Оптические методы анализа
— основаны на изучении оптических свойств:

2️⃣Нефелометрия и турбидиметрия.

🔶Нефелометрия — измерение интенсивности света, рассеянного частицами раствора.

🔶Турбидиметрия — измерение ослабления интенсивности света, прошедшего через раствор. При чем, интенсивность света ⬇️из-за поглощения частицами, и рассеяния от частиц.

#методы

Прочитать про иммунологические методы и получить эстетическое удовольствие можно тут ⏩ 12 методов в картинках: иммунологические технологии

#методы

Ложноотрицательный результат анализа мочи на бензодиазепин

1️⃣пациент:
Для снижения симптомов синдрома отмены при злоупотреблении опиатами пациенту назначен лоразепам.

2️⃣ пациент:
Поступил в отделение после передозировки лоразепамом.

Пробы мочи отправили для анализа на бензодиазепины и ожидали положительный результат.

❕Но результат на платформе ARCHITECT с реагентом Multigent на бензодиазепин (гомогенный ИФА) оказался отрицательным для обоих пациентов.

✅При измерении на другой платформе содержание бензодиазепинов: 320 нг/мл у 1 пациента, 4895 нг/мл — у 2 пациента.

🔰До 47% результатов скрининга мочи на бензодиазепины являются ложноотрицательными при использовании ИФА. Низкая чувствительность связана с низкой перекрестной реактивностью к лекарственным метаболитам.

Например, лоразепам выводится в виде метаболита ▶️глюкуронида.
То есть важно знать перекрестную реактивность теста с метаболитом, а не с исходным препаратом.

❎ У Abbott Multigent Benzodiazepines отсутствует перекрестная реактивность ИФА с метаболитом лоразепама, поэтому результаты пациентов были отрицательные.

С осторожностью используйте этот реагент для скрининга или наблюдения за пациентами, принимающими лоразепам.

#case #моча #преаналитика

🔰Для тех, кому интересна диагностика аутоиммунных заболеваний
⏩ сайт Международной группы (ICAP) типов свечения антинуклеарного фактора.

Фото и описание морфологических типов свечения при непрямой иммунофлуоресценции на клетках HEp-2.

#методы #теория #международный_опыт

ИФА: Сэндвич-метод

Иммунологический метод для выявления антигенов: целевой антиген оказывается зажат между иммобилизованным и меченым антителом — как в сэндвиче.

Схема реакции

🔵Инкубация 1: образование комплекса Аг-Ат.

К носителю с иммобилизованными антителами (в лунку) добавляют раствор, в котором содержится анализируемый антиген ⏩ образование специфического комплекса.

🔵Отмывка: удаление несвязавшихся молекул антигена.

🔵Инкубация 2: образование комплекса Аг-Ат-конъюгат.

Добавляют меченные ферментом антитела (конъюгат) ⏩ образование тройного комплекса — конъюгат связывается с антигеном из комплекса Аг-Ат.

🔵Отмывка: удаления избытка конъюгата.

🔵Определение активности фермента:

1️⃣Добавление раствора хромогенного субстрата: фермент и субстрат вступают в реакцию с изменением цвета содержимого ячейки.

2️⃣Добавление стоп-реагента: для остановки ферментативной реакции.

3️⃣Определение концентрации антигена: интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию целевого антигена в пробе.

#методы #ИФА

Реакция прямой гемагглютинации

Гемагглютинация — «склеивание», агрегация эритроцитов.

🔰При «прямой» реакции антитела (агглютинины) сыворотки непосредственно взаимодействуют с антигенами (агглютиногенами) эритроцитов.

Пример:
Для определения групп крови по системе АВ0 и резус-фактора используют цоликлоны анти-А, анти-В и анти-D-супер. Цоликлоны — раствор мышиных моноклональных антител.

В лунку специального планшета помещают:
▶️одну большую каплю (0,1 мл) цоликлона.
▶️рядом одну маленькую каплю (~0,01 мл) исследуемой крови.

Цоликлон и кровь перемешивают, через некоторое время регистрируют появление или отсутствие реакции агглютинации.

#методы

Виртуальная иммунологическая лаборатория от Howard Hughes Medical Institute, позволяет воспроизвести все этапы ИФА:

▶️от подготовки образцов
▶️до интерпретации результатов.

Каждый шаг сопровождается теоретическими пояснениями на английском.

🟩Нажмите кнопку «Start Interactive» и на 30 минут погрузитесь в постановку ИФА.

#методы #ИФА

❓Что это за клетка?

Пишите предположения в комментариях ⬇️Ответ там же завтра.

#case от Blood-Academy

Реакция непрямой гемагглютинации

🔰Гемагглютинация — «склеивание», агрегация эритроцитов.
При «непрямой» агглютинации антитела сыворотки взаимодействуют с антигенами, которые адсорбированными на эритроцитах или инертных частицах (латекс).

🟢Сенсибилизированные антигеном эритроциты — это эритроцитарный диагностикум для обнаружения антител.
🟢Эритроциты «нагруженны» антителами — это эритроцитарный антительный диагностикум для выявления антигенов.

Реакции непрямой гемагглютинации применяют для:
▶️серологической диагностики инфекций, вызванных бактериями, риккетсиями, простейшими.
▶️выявления чувствительности к лекарственным препаратам,
определение СРБ (латекс) и т.д.

✅Положительный результат: эритроциты оседают на дне лунки в виде круга со складчатым краем («зонтик»).

🚫Отрицательный результат: эритроциты компактно оседают в центре лунки, как «пуговка» или колечко.

#методы

Хук-эффект

Обсуждали эффект-крючка в статье Ложнонизкий результат β-ХГЧ у беременной, теперь о том, почему так происходит.

🔰Хук-эффект наблюдается, когда при очень высокой концентрации аналита, измеренное содержание ошибочно занижено.

⏩Избыток аналита в сэндвич-ИФА связывается обоими антителами - с иммобилизованными и мечеными, что мешает образованию иммунного комплекса. Компоненты реакции, не участвующие в сэндвиче удаляются.

❕Интенсивность сигнала снижается и может попасть в диапазон калибровочной кривой. Это приводит к ложно отрицательному результату или занижению фактической концентрации.

Наблюдается:
🔻в сэндвич-ИФА.
🔻в твердофазных ИФА, когда концентрация иммобилизованных антител ограничена.
🔻для аналитов с широким диапазоном концентраций, например, опухолевые маркеры.

#методы

На этом всё.
🔰Вспомнили методику, которую стоит разобрать? - Пишите в комментариях ⬇️

Ранее выявление инвазивного кандидоза при проведении КАК

Пациент поступил с жалобами на боль в животе и спутанность сознания в течение 3х дней:
▶️Глюкоза 60,6 ммоль/л
▶️Лейкоциты 17,78х10*49 /л
▶️Лактат 11,9 ммоль/л

Есть факторы риска инвазивного кандидоза:
🟠перенесенные операции на пищеварительном тракте;
🟠недавнее применение антибиотиков широкого спектра действия;
🟠парентеральное питание;
🟠наличие центрального катетера.

Через 4 дня после поступления изменилась старерограмма распределения WBC (Sysmex XN-9000):
🔴рис. А — аномальное зона в области незрелых гранулоцитов.
🔴рис. В — частицы в зоне дебриса, «облако» в зоне нормобластов.
🔴рис.С — частицы в зоне дебриса

🔰При микроскопии мазка обнаружены свободные и фагоцитированные дрожжевые клетки. Позже посев ЦВК и венозной крови подтвердили наличие Candida krusei.

Анализ скатерограмм гематологического анализатора дает много полезной информации и может помочь в определении тактики и наблюдения за пациентом.

#case #методы #КАК

Что такое референтный интервал

🔵центральные 95% результатов, ожидаемых у здоровых людей.
🔵статистический показатель.
🔵отражает биологические свойства популяции.
🔵не применяется для разделения здоровых и больных.
🔵используются для скрининга.

Референтные интервалы можно получить из разных источников:
▶️инструкция производителей к реагентам.
▶️публикации.
▶️справочники.
▶️многоцентровые исследования.
▶️национальные или международные рекомендации сообществ.
▶️клинические руководства.

Согласно ISO-15189, каждая лаборатория должна пересматривать референсы, разрабатывать собственные. Из-за загруженности, стоимости и трудоемкости это процесса многие лаборатории игнорируют рекомендацию и это понятно…

❗️Важно, чтобы референтные интервалы из внешнего источника были проверены до внедрения в практику.

#референсы

Способы верификации референтных интервалов

При внедрении нового метода измерения или аналита нужно определить референтный интервал.

❗️Если лаборатория берет референс из литературы или другой лаборатории — он должен быть подтвержден, т.е. верифицирован.

Одним из 3 способов:
1️⃣субъективная оценка.
2️⃣использование небольшого числа эталонных лиц.
3️⃣использование большого числа эталонных лиц.

🔰Субъективная оценка

Тщательное сравнении демографических данных референтной популяции от которой перенимается реферес.
🔶самой популяции (распределение по полу и возрасту).
🔶географического положения.
🔶преаналитических процессов (подготовка субъектов, сбор, транспортировка и подготовка проб).
🔶аналитических характеристик метода.

При соответствии всех факторов — референтный интервал может быть передан без дополнительной проверки.

🔰Использование небольшого числа проб

Достаточный и стандартный метод. Результаты от 20 здоровых добровольцев сравнивают с референтными значениями, с учетом разбивки по возрасту и полу.

🔰Анализ большого количества образцов

Используется редко, так как число проб в этом случае, почти достигает размера выборки для разработки собственных референсов.

#референсы #международный_опыт

❓Назовите эти 2 клетки

Пишите предположения в комментариях ⬇️Ответ там же завтра.

#case от Blood-Academy

Верификация референтного интервала

⬆️Алгоритм проверки референтных интервалов с помощью небольшого числа проб. По рекомендациями CLSI.

#референсы #международный_опыт