Один из проектов у меня полностью завязан на линии немелкоклеточного рака легкого человека А549. Я слышала от старшего коллеги, что это неудачная модель для изучения митохондрий - которые, разумеется, и требовалось в них изучать, - а кроме того, в отличие от других клеток, их оказалось сложно вылечить от микоплазмы. Когда потребовалось провести ее экстерминацию в дефицитных откриспованных А549, привезенных мне из Ирландии, я, начитавшись Видаля, решила попробовать кларитромицин.
Потестировала переносимость на клетках HCT116, и оказалось, что даже при 50 мкМ они и не думают гибнуть. Однако клеткам А549 и U2OS от минимальных концентраций стало очень плохо, и в частности, наблюдалась очень сильная вакуолизация. С азитромицином вышла та же история - правда, токсичность оказалась еще выше: они при сходных концентрациях уменьшились в размерах и перестали делиться - выглядели так же, как при обработке ингибитором обоих mTORC'ов и индуктором аутофагии торином 2.
Пошерстив пабмёд, я выяснила, что кларитромицин, азитромицин и, судя по всему, макролиды в принципе - ингибиторы поздней аутофагии (например, вот, вот, вот, вот). Для клеток НСТ116 кларитромицин был токсичен только в концентрациях более 80 мкМ, но не за счет аутофагии, а ингибирования калиевого канала hERG1 (вот). У U2OS и A549 довольно высокий базовый уровень аутофагии, в отличие от HCT116, - возможно, потому их микоплазма больше и любит и потому макролиды для них токсичны в меньших концентрациях.
Думаю, не добавить ли их в работу в качестве дополнительных ингибиторов аутофагии - или они приобретут устойчивость, пока я выбиваю из них микоплазму?

#лабораторный_могул

В статье экспрессировали токсин микоплазмы и смотрели на вакуолизацию. Ну и "лечили" ингибиторами v-ATPase.