Zmall Pharma

Рассматриваем диссер "Three-Dimensional Human Neural Stem Cell Culture for High-Throughput Assessment of Developmental Neurotoxicity", как и обещал - https://t.me/smallpharm/2150.
Основные тезисы:
1) Классические методы оценки нейротоксичности на плоских субстратах (пластик, или поверхности покрытые белками для адгезии) слишком вариабельны. Даже покрытие может влиять на результат, например, в случае с нейротоксичностью метилртути, клетки высаженные на поли-L-лизин оказались более чувствительными, чем клетки высаженные на витронектин и фибронектин.
2) Микрофлюидные системы - в принципе, интересные системы, т.к. на них можно создавать градиенты концентрации токсикантов и аттрактантов (для изучения миграции клеток). Но они сложны в обслуживании и работе, чувствительны к клеточному дебрису.
3) А вот 3D системы вообще молодцы - с помощью них можно создавать и клеточные, и химические градиенты. Как пример, автор приводит открытое с помощью таких систем явление кратковременного усиления пролиферации нейрональных стволовых клеток в присутствии кетамина.
4) Нейротоксичность (а в особенности developmental neurotoxicity) важно изучать именно на нейрональных стволовых клетках. Приведена ссылка на список соединений, которые избирательно токсичны именно для этого типа клеток, но относительно хорошо переносятся уже дифференцировавшимися кортикальными нейронами.
5) Практическая часть - моё почтение, рекомендую почитать и восхититься. Шикарная многоуровневая работа для создания репортерных линий. Проверены как и варианты оценки нейротоксичности неорганики всякой, так и блокаторов транспортеров. Что понравилось: простая формула для расчёта активности транспортеров в репотерных линиях (TAF - Transporter Activity Factor): TAF = [(Fn – Fcntrl) / Fn] x 100
Где Fn - флуоресценция при добавлении ингибитора
Fcntrl - флуоресценция контрольных лунок
Меньше работает транспортер - меньше флуоресценция.
6) Различия между 2D и 3D культурами заключаются в бОльшей выживаемости клеток при повышении концентрации токсиканта. Кривая доза/эффект "растягивается" в сторону больших концентраций.
7) Клеточная смерть, вызываемая токсичностью дигоксина и топотекана, начинается с нарушения трансмембранного потенциала в митохондриях, а не на внешней мембране клеток.
8) Нужно исследовать системы, состоящие из нескольких типов клеток: в моделях, одновременно содержащих клетки ReNcell VM (коммерческая линия нейрональных стволовых клеток) и HepaRG (линия гепатоцитов) при добавлении парацетамола, жизнеспособность ReNcell VM снижалась больше, чем при добавлении парацетамола к этим же клеткам, культивируемым отдельно. Объяснение здесь кроется в большой метаболической активности HepaRG относительно парацетамола и, соответственно, большей скорости нарастания концентрации токсичных метаболитов парацетамола. Усиление нейротоксичности при совместном культивировании с циклофосфамидом не наблюдалось. Но наблюдалось при добавлении IDPN (избирательный нейротоксин).
В диссере для этого явления введено понятие метаболизм-опосредованной нейротоксичности.
Сам файл - следующим постом, enjoy!

Small Pharma

О, кстати - на днях наткнулся на один интересный PhD thesis посвящённый оценке токсичности интересных веществ на органоидах.
Stay tuned, разбор будет скоро.

1.65K views19:07