Очистка низкомолекулярных соединений: немного знаний физхимии и разницы в растворимостях целевых молекул.

Очистка пептидов: немного знания хроматографии.

Очистка антител: немного белка А.

Очистка вирусных векторов: *куча беготни с эксклюзионной хроматографией под грайндкор*

Вообще, только поработав на серьёзном фармацевтическом производстве я понял смысл выражения "GMP compliance".
Как вещи происходили в лаборатории - я приходил ночью, чтоб ни с кем не толкаться и не делить приборы и ламинары, спокойно подготавливался, делал свои дела, уходил под утро делая запись в экселевской табличке.
Как вещи происходят на производстве - приходишь ко времени, координируешь работу десятка человек (желательно предупредив их о примерной дате за неделю), 2-3 часа ищешь все материалы и готовишь растворы в объёмах от 5 литров, делаешь кучу записей с приложением чеков из приборов, делаешь работу, два дня пишешь отчёт.

Атомную бомбу делали по выкраденным чертежам, и курировал её Берия. С космической программой выкрадывать чертежи было не у кого, пришлось доставать русских инженеров из большевистских концлагерей.

Космос это будущее человечества, и открыли его недобитые большевиками русские. Императорская инженерная школа, если быть точным. Если бы не красные — полетели бы раньше лет на 15. Но, к счастью, в 1961 году многие были ещё живы.

К этому моменту коммунисты уже закупили полтора миллиона тонн зерна у своих главных политических соперников в космической гонке, и продолжали наращивать темпы закупок. Для спасения колхозной системы из лагерей доставать было некого.

Небольшая находка; возможно, кому-то пригодится - https://click.endnote.com


Очень много научных работ даёт просмотреть и скачать (ещё бы - ведь работает на основе UnPaywall), можно подключать аккаунты библиотек и институтов, а также выгружать в Zotero/Mendeley 😌

Для тех, кто с Пабмеда не только скачивает, но и иногда загружает ☺

Шок! Учёные ахнули! Гематоксилин - не фиолетовый

Сухой он жёлто-оранжевый, при растворении - прекрасно красный как клюквенный морс, и только при окислении даёт фиолетовый гематеин.

Изначально гематоксилин получали из кампешевого дерева Haematoxylum campechianum. На одной из картинок выше видно, что срезы и щепа этого дерева красноватые, как и раствор гематоксилина в воде.

Красящим в гистологии веществом, строго говоря, является не сам гематоксилин, а продукт его окисления — гематеин. В связи с этим гематоксилиновые красители раньше готовились заранее и становились пригодны для работы только через некоторое время, в течение которого происходило окисление гематоксилина в гематеин (созревание краски).
Серьезно, в старых прописях гематоксилинов написано "после приготовления растворы гематоксилина должны “созревать” в течение 3-4 недель с доступом яркого света и кислорода воздуха, для чего раствор с красителем оставляют на подоконнике, накрыв марлей". на подоконнике! Наташа, вставай, мы там гематоксилин под марлей уронили.
Это вам не форез прогнать! Гистология это долго! Сейчас, конечно, стадии гематеина достигают с помощью химических окислителей.

Однако ни вот этот красный раствор гематоксилина, ни сам по себе гематеин - тоже не окрасят клетки. Им нужны так называемые протравы, обычно соли металлов, например алюмокалиевые квасцы или соли железа. Вот с ними гематеин образует красящий лак и, так уж и быть, сделает вам базофильно.

В общем вы поняли, гематоксилин - это хлопотно. Но красиво. И как без него?
#гистология

Я очень люблю культуру IMR32 за её свойства. С одной стороны - это вообще не монокультура глиобластомы, а смесь собственно переродившихся глиальных клеток с фибробластами. С другой - она прекрасна морфологически и по свойствам.
Это идеальная культура для моделирования человеческой глиобластомы за счёт наличия на мембране O-Ac-GD2 ганглиозида и экспрессии Н-ацетилхолиновых и некоторых других нейромедиаторых рецепторов. То есть "как бы" нейрональная ткань с наличием этого почти неуловимого ганглиозида.
Был бы я "большим дяденькой", то попробовал бы нарабатывать аттенуированную вакцину от бешенства в этих клетках, ведь оказывается что сам рабдовирус в них всё-таки размножается - https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9224959/
Кстати, прикол из статьи - оказывается суммарные экстрагированные ганглиозиды, добавленные в среду, замедляют распространение вируса бешенства.

Хозяюшке на заметку - первые в мире вакцины против чумы и холеры придумал ещё в 19 веке одессит Владимир Хавкин.
Для любителей ДЕГа, наброшу - свои исследования он вёл в Индии, соответственно вакцину испытывали на местных индусах. За что и был награждён королевой Викторией орденом и направлением на службу в минобороны военным инфекционистом.

Ищем биоинформатиков в ФМБА.
Обработки данных полногеномного секвенирования и транскриптомов. Интерпретация данных NGS и GWAS, популяционная генетика. Разработка алгоритмов, сборка пайплайнов.
Статистический и биоинформатический анализ данных исследований, построение моделей машинного обучения. Интерпретация результатов молекулярно-генетических исследований ( Rna-seq, scRNA—seq,
scAtac-seq, пространственная транскриптомика.
Высшее образование: биоинформатика, биофизика, биоинженерия.
Знание хотя бы одного языка с динамической типизацией (Python или R, плюс используемые ими библиотеки).

Резюме можно отправлять на почту: dsvetlichnyj@cspmz.ru или в телеграм по телефону:89680420077.

Вся наномедицина и популярная тема с "микроносителями" и "наноконтейнерами" обламывается об такую штуку как ОПСОНИЗАЦИЯ. Среднее время циркуляции ЛЮБЫХ наночастиц в организме (если они не с полностью биологически инертным покрытием) не превышает 10-20 минут. Затем они захватываются печенью и селезёнкой. Продлить время циркуляции возможно только "перегрузив" макрофаги инертными частицами или мёртвыми эритроцитами.
Интересный факт: ни одно из низкомолекулярных соединений, известных до настоящего времени, не увеличивало Т1/2 циркуляции наночастиц в организме.

Слева - органы мыши, которой были введены наночастицы (квантовые точки), справа - контроль. Как видно, флюоресциируют только печень, селезёнка и лёгкие. Мышь разобрана спустя 15 минут после инъекции.

​​Эмбриологам удалось вырастить эмбрионы мыши вне матки в течение более длительного срока, чем когда-либо прежде, что дает беспрецедентное представление о формировании органов и конечностей млекопитающих — процесса, ранее скрытого внутри тела матери. По сообщениям исследователей из Израиля, новая система, состоящая из герметичных контейнеров, находящихся в специальном устройстве вращения и наполненных питательными веществами, поддерживала жизнь эмбрионов мышей с 5-го по 11-й день развития (что является примерно половиной 20-дневного срока беременности этих животных). К этому времени у зародышей сформировались задние конечности и все их основные органы.

Читать далее → https://medach.pro/post/2595

Хозяюшке на заметку - наша иммунная система является полноценным генштабом и линией Маннергейма. Без шуток - нейтрофилы могут использовать для задержания бактерий самоубийственные атаки - пироптоз - особый вид клеточной смерти, когда клетка "выворачивается наизнанку" высвобождая все протеазы и нуклеиновые кислоты, таким образом задерживая бактерии от распространения. Более того, при пироптозе высвобождаются, само собой, внутриклеточные протеазы и другие белки, запускающие реакцию на DAMP (damage-associated molecular pattern), которая выражается в том числе и в виде рекрутирования ещё большего количества иммунных клеток в очаг инвазии. Прямо таки атаки камикадзе.
Но есть ещё у нас в организме некоторые способы борьбы, которые нарушают все нормы ОЗХО. Иммунные клетки в борьбе с бактериальной или грибковой инвазией, способы производить... синильную кислоту.
Открыто было это ещё в 1981 году, но саму книгу "Cyanide in biology" (1981г) найти в сети проблематично.
Так вот вам отдельная статья, но того же автора, которая писала в той книге главу про цианид при фагоцитозе -
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2989021/

А вот кстати коротенькая заметочка, про непроработанный вопрос -
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9369328/
Нейроны также способны к локальной генерации синильной кислоты. Причём, это не просто биохимический артефакт, вроде АФК в митохондриях, но вполне себе цельное звено сигнальной цепи работы опиоидных рецепторов - введение антидотов от отравления цианидами снижало ответ на гидроморфон (агониста мю-опиодиных рецепторов).
Вот ещё статья с матчастью (биохимический матан на тему механизма генерации цианида) -
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10956427/

Почему я вообще употребляю выражение "локальная генерация"? Потому что HCN - крайне нестабильное соединение, реагирующее буквально со всем чем можно, и выделившись в нано- и пико- количествах не уходит далеко, не успевает оказать каких-либо генерализованных эффектов, и реагирует только с клеткой выделившей цианид или максимум с соседними, не влияя на клеточное дыхание.

Вечерний хадис о качестве клинических исследований. Про research chemicals могу рассказать забавную историю - в начале-середине 00х GSK открыли малую молекулу, которая сразу стала культовой у качков. Не стероид, но ОЧЕНЬ хорошо повышала выносливость и эффект от тренировок.
Естественно, её начали по патентным и научным данным воспроизводить китайцы (пропись синтеза есть, аналитические данные эталона в статье есть, всё есть). Качки начали её кушать, всем всё нравилось.
Потом GSK ВНЕЗАПНО выступают с заявлением, которое крайне усиленно распространяют, что это соединение - страшшшнющий канцероген, ужаснах просто, опасно, ахтунг, капут! И требуют приостановить и прижать его оборот даже в виде исследовательского соединения. Якобы вызывает множественные опухоли.
Качков они напугали СИЛЬНО, но до сих пор о множестве раковых качков ничего неизвестно, хотя кушали это соединение довольно много людей (в абсолютных цифрах).
https://en.wikipedia.org/wiki/GW501516
Вот кстати то "жутко канцерогенное" соединение для качков.

А вот дальше начинаются СТРАННОСТИ.
Само сообщение о раке было опубликовано не в научном журнале, где присутствует хорошее рецензирование и рецензент может придраться даже к дизайну эксперимента, а... доложено на конференции ;)
Уже позже, в 2014 году, была статья в плохо рецензируемом журнале (который так и называется - Экспертные мнения на тему фармакотерапии/Expert Opinion on Pharmacotherapy), где сообщение о множественных опухолях было преведено без ссылки на источник, а сама статья просто издевательская - с прямыми благодарностями к GSK.
GF Watts has received honoraria for lectures and commentaries from Genfit, Pfizer, AstraZeneca, Merck Sharp & Dohme, Novartis, Amgen, Abbott and Sanofi-Aventis. With respect tothe content of the article, GT Chew has previously received research grant funding from Pfizer and GlaxoSmithKline and has participated in research sponsored by Laboratoires Fournier. A Sahebkar has no conflict of interest.

Но и сам доклад на конференции мы вам не покажем (С)
он еле еле находится на через Wayback Machine, без картинок, только в режиме краткого резюме - доза/рак:
https://web.archive.org/web/20150504013406/http://www.toxicology.org/AI/PUB/Tox/2009Tox.pdf
Но и там забавно - доклады в архивах конференции упорядочены по темам -
Сначала идёт доклад где активатор PPAR-gamma вызывает рак (о нашем рассматриваемом порошочке)
а потом, следующая статья - Активаторы PPAR-gamma подавляют рак поджелудочной железы

"Шёл в комнату - попал в другую" (С)

Делай раз

Делай два