#Minimal_Media
💠محیط کشت مینیمال: کاربرد و ترکیبات💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️مینیمال براث (Minimal Broth) که با نامهای محیط کشت مینیمال (Minimal Culture) یا مینیمال مدیا (Minimal Media) نیز شناخته میشود، اولین بار توسط فردی به نام دیویس فرموله شد. مینیمال براث، در واقع محیط کشتی است که با حداقل نیازها و بدون حضور اسیدهای آمینه، از رشد نوع وحشی میکروارگانیسمها (مانند نوع وحشی اشریشیا کلی) حمایت میکند.
✔️مینیمال مدیا یک محیط تعریف شده است که ترکیب آن بر اساس میکروارگانیسم مورد نظر، متفاوت خواهد بود. به طور معمول، این محیط حاوی یک منبع کربن مانند قند/ سوکسینات، نمکهای معدنی مختلف (مانند منیزیم، نیتروژن، فسفر و گوگرد) و آب است.
✔️قندها به عنوان کربن و انرژی عمل میکنند و نمکهای منیزیم و آمونیوم به عنوان منابع یونهایی عمل میکنند که متابولیسم میکروارگانیسم را تحریک میکند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️کاربرد محیط کشت مینیمال
✔️از اصلیترین کاربرد محیط کشت مینیمال میتوان به امکان مقایسهی کشت میکروارگانیسم و شکل جهش یافته آن اشاره کرد. در واقع این محیط کشت امکان تمایز سلولهای نوع وحشی (wild type) و سلولهای جهش یافته (mutant) را فراهم میکند.
✔️سلولهای نوع وحشی که با نام خورو نیز شناخته میشوند، فنوتیپ نرمالی از یک ارگانیسم هستند که به طور وحشی در طبیعت پدیدار میشوند.
✔️درمقابل سلولهای نوع وحشی، سلولهای جهش یافته قرار دارد. گونههای جهش یافته، ارگانیسمهایی نو با ویژگیهای ژنتیکی تازه هستند که طی جهش ژنی ایجاد میشوند و فنوتیپی متفاوت از فنوتیپ طبیعی دارند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️محیط کشت مینیمال بیشترین استفاده را در تمایز گونههای اشریشیا کلی دارد. گونههای جهش یافته اشریشیا کلی با قرار گرفتن نوع وحشی اشریشیاکلی در معرض نور ماوراء بنفش به دست میآیند. اما برای رشد به محیطی کامل از نظر تغذیه نیاز دارند. مینیمال مدیا را میتوان با مکملهایی برای رشد گونههای جهش یافته تکمیل کرد.
◀️ترکیبات محیط کشت مینیمال
✔️ مینیمال براث به صورت تجاری در دسترس است اما شما در آزمایشگاه میتوانید به راحتی آن را آماده کنید. در جدول ضمیمه میزان و انواع ترکیبات این محیط کشت آورده شده است.
◀️روش آماده سازی محیط کشت مینیمال
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
1️⃣مواد را به طور جداگانه با توجه به حجم مورد نظر خود وزن کنید. (در اینجا ۱ لیتر از محیط کشت در نظر گرفتهشده است).
2️⃣در یک بشر حدود ۹۰۰ میلیلیتر dd H2O (deionized distilled water) بریزید.
3️⃣مواد را (به جز آگار) به بشر اضافه کنید.
4️⃣بشر را روی هات پلیت قرار دهید تا مواد به کمک حرارت در آب حل شوند.
5️⃣مقدار pH محیط کشت مینیمال را تنظیم کنید. pH محیط در دمای ۲۵ درجه سانتیگراد حدود ۰٫۲ ±۰ است.
6️⃣مجددا به محلول آب اضافه کنید تا حجم نهایی آن به ۱۰۰۰ میلیلیتر برسد.
7️⃣محیط کشت را درون یک ارلن بریزید. آگار را با توجه به حجم تعیین شده (یعنی ۱۵ گرم آگار برای ۱ لیتر از محیط کشت) به ارلن اضافه کنید.
8️⃣دهانه ارلن را ببندید و آن را در دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
9️⃣در نهایت میتوانید محیط کشت مینیمال را در پتری دیشهای مختلف بریزید.
✔️پتری دیشهای حاوی محیط کشت را در دمای ۲ الی ۸ درجه سانتیگراد نگهداری کنید تا زمانی که مورد استفاده قرار گیرند. نمونه آزمایشی را میتوان مستقیماً روی پلیت حاوی مینیمال آگار رگه کرد (کشت خطی) و سپس پلیت ها باید در انکوباتور قرار گیرند و در برابر نور محافظت شود.
◀️کشت نمونه در محیط کشت مینیمال
✔️همانطور که گفته شد، یکی از کاربردهای اصلی محیط کشت مینیمال تمایز گونههای وحشی و جهشیافتهی اشریشیا کلی است. به این منظور سوسپانسیون سلولی از نوع وحشی E. coli تحت تابش اشعه فرا بنفش قرار میگیرد و روی مینیمال آگار کشت داده میشود. این امر امکان رشد سلولهای نوع وحشی و سلولهای جهش یافته را فراهم میکند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️سپس کلنیهای انتخاب شده به آبگوشت مینیمال (Minimal Broth) و همچنین آبگوشت مینیمالی که حاوی یکسری افزودنی برای رشد گونههای جهش یافته است اضافه میشوند.
✔️آبگوشت در دمای ۳۵ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴ ساعت در انکوباتور قرار میگیرد.
✔️در صورتی که ارگانیسم در Minimal Broth حاوی مکمل، رشد کند اما هیچ رشدی در Minimal Broth نداشته باشد، به این معنی است که گونهی مورد آزمایش جهش یافته است.
⤵️Sharebiology
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸
💠محیط کشت مینیمال: کاربرد و ترکیبات💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️مینیمال براث (Minimal Broth) که با نامهای محیط کشت مینیمال (Minimal Culture) یا مینیمال مدیا (Minimal Media) نیز شناخته میشود، اولین بار توسط فردی به نام دیویس فرموله شد. مینیمال براث، در واقع محیط کشتی است که با حداقل نیازها و بدون حضور اسیدهای آمینه، از رشد نوع وحشی میکروارگانیسمها (مانند نوع وحشی اشریشیا کلی) حمایت میکند.
✔️مینیمال مدیا یک محیط تعریف شده است که ترکیب آن بر اساس میکروارگانیسم مورد نظر، متفاوت خواهد بود. به طور معمول، این محیط حاوی یک منبع کربن مانند قند/ سوکسینات، نمکهای معدنی مختلف (مانند منیزیم، نیتروژن، فسفر و گوگرد) و آب است.
✔️قندها به عنوان کربن و انرژی عمل میکنند و نمکهای منیزیم و آمونیوم به عنوان منابع یونهایی عمل میکنند که متابولیسم میکروارگانیسم را تحریک میکند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️کاربرد محیط کشت مینیمال
✔️از اصلیترین کاربرد محیط کشت مینیمال میتوان به امکان مقایسهی کشت میکروارگانیسم و شکل جهش یافته آن اشاره کرد. در واقع این محیط کشت امکان تمایز سلولهای نوع وحشی (wild type) و سلولهای جهش یافته (mutant) را فراهم میکند.
✔️سلولهای نوع وحشی که با نام خورو نیز شناخته میشوند، فنوتیپ نرمالی از یک ارگانیسم هستند که به طور وحشی در طبیعت پدیدار میشوند.
✔️درمقابل سلولهای نوع وحشی، سلولهای جهش یافته قرار دارد. گونههای جهش یافته، ارگانیسمهایی نو با ویژگیهای ژنتیکی تازه هستند که طی جهش ژنی ایجاد میشوند و فنوتیپی متفاوت از فنوتیپ طبیعی دارند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️محیط کشت مینیمال بیشترین استفاده را در تمایز گونههای اشریشیا کلی دارد. گونههای جهش یافته اشریشیا کلی با قرار گرفتن نوع وحشی اشریشیاکلی در معرض نور ماوراء بنفش به دست میآیند. اما برای رشد به محیطی کامل از نظر تغذیه نیاز دارند. مینیمال مدیا را میتوان با مکملهایی برای رشد گونههای جهش یافته تکمیل کرد.
◀️ترکیبات محیط کشت مینیمال
✔️ مینیمال براث به صورت تجاری در دسترس است اما شما در آزمایشگاه میتوانید به راحتی آن را آماده کنید. در جدول ضمیمه میزان و انواع ترکیبات این محیط کشت آورده شده است.
◀️روش آماده سازی محیط کشت مینیمال
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
1️⃣مواد را به طور جداگانه با توجه به حجم مورد نظر خود وزن کنید. (در اینجا ۱ لیتر از محیط کشت در نظر گرفتهشده است).
2️⃣در یک بشر حدود ۹۰۰ میلیلیتر dd H2O (deionized distilled water) بریزید.
3️⃣مواد را (به جز آگار) به بشر اضافه کنید.
4️⃣بشر را روی هات پلیت قرار دهید تا مواد به کمک حرارت در آب حل شوند.
5️⃣مقدار pH محیط کشت مینیمال را تنظیم کنید. pH محیط در دمای ۲۵ درجه سانتیگراد حدود ۰٫۲ ±۰ است.
6️⃣مجددا به محلول آب اضافه کنید تا حجم نهایی آن به ۱۰۰۰ میلیلیتر برسد.
7️⃣محیط کشت را درون یک ارلن بریزید. آگار را با توجه به حجم تعیین شده (یعنی ۱۵ گرم آگار برای ۱ لیتر از محیط کشت) به ارلن اضافه کنید.
8️⃣دهانه ارلن را ببندید و آن را در دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه اتوکلاو کنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
9️⃣در نهایت میتوانید محیط کشت مینیمال را در پتری دیشهای مختلف بریزید.
✔️پتری دیشهای حاوی محیط کشت را در دمای ۲ الی ۸ درجه سانتیگراد نگهداری کنید تا زمانی که مورد استفاده قرار گیرند. نمونه آزمایشی را میتوان مستقیماً روی پلیت حاوی مینیمال آگار رگه کرد (کشت خطی) و سپس پلیت ها باید در انکوباتور قرار گیرند و در برابر نور محافظت شود.
◀️کشت نمونه در محیط کشت مینیمال
✔️همانطور که گفته شد، یکی از کاربردهای اصلی محیط کشت مینیمال تمایز گونههای وحشی و جهشیافتهی اشریشیا کلی است. به این منظور سوسپانسیون سلولی از نوع وحشی E. coli تحت تابش اشعه فرا بنفش قرار میگیرد و روی مینیمال آگار کشت داده میشود. این امر امکان رشد سلولهای نوع وحشی و سلولهای جهش یافته را فراهم میکند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️سپس کلنیهای انتخاب شده به آبگوشت مینیمال (Minimal Broth) و همچنین آبگوشت مینیمالی که حاوی یکسری افزودنی برای رشد گونههای جهش یافته است اضافه میشوند.
✔️آبگوشت در دمای ۳۵ درجه سانتی گراد به مدت ۲۴ ساعت در انکوباتور قرار میگیرد.
✔️در صورتی که ارگانیسم در Minimal Broth حاوی مکمل، رشد کند اما هیچ رشدی در Minimal Broth نداشته باشد، به این معنی است که گونهی مورد آزمایش جهش یافته است.
⤵️Sharebiology
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸
Telegram
attach 📎