#تست_آنترون
💠تست آنترون (Anthrone Test): تعریف، اصول، روش، نتایج و موارد استفاده💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️تست آنترون یک آزمایش گروهی برای شناسایی کربوهیدرات‌ها است که روشی سریع و راحت برای تعیین کمیت کربوهیدرات‌های آزاد یا متصل به لیپیدها (Lipid) یا پروتئین‌ها، ارائه می‌کند.
◀️اهداف تست آنترون
➖برای تشخیص وجود کربوهیدرات در یک محلول مشخص
➖برای تعیین میزان غلظت کربوهیدرات‌های آزاد و متصل در یک محلول
◀️اصول تست آنترون
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️اگر کربوهیدرات به شکل کربوهیدرات آزاد مانند پلی یا مونوساکارید (poly- or monosaccharide) یا به شکل متصل مانند گلیکوپروتئین (Glycoprotein) یا گلیکولیپید (Glycolipid) در محلول وجود داشته باشد، اسید غلیظ موجود در شناساگر آنترون ابتدا آن را به مونوساکارید جزء هیدرولیز می‌کند.
✔️به طور مشابه، اسید غلیظ سپس هیدراته‌شدن مونوساکاریدها را کاتالیز می‌کند تا فورفورال (Furfural) (از پنتوزها (Pentose)) یا هیدروکسیل فورفورال (Hydroxyl furfural) (از هگزوزها (Hexose)) تشکیل شود. فورفورال یا هیدروکسیل فورفورال تشکیل شده با دو مولکول نفتول (Naphthol) مربوط به شناساگر آنترون، ترکیب شده و یک کمپلکس سبز آبی تشکیل می‌دهد. سپس می‌توان غلظت این کمپلکس را با اندازه‌گیری میزان جذب طول موج 620 نانومتری در یک اسپکتروفتومتر (Spectrophotometer) یا در کالریمتر فیلتر قرمز تعیین کرد.
◀️واکنش
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
➖هیدرولیز پلی‌ساکاریدها به مونوساکارید (پلی ساکارید ← مونوساکارید)
➖دهیدراسیون مونوساکاریدها به فورفورال (مونوساکارید ← فورفورال)
➖واکنش فورفورال با نفتول {فورفورال + شناساگر آنترون (نفتول) ← کمپلکس آبی – سبز}
◀️نیازمندی‌ها
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
1️⃣لوازم مورد نیاز
➖تجهیزات:
▪️اسپکتروفتومتر UV
▫️میکسر ورتکس (Vortex)
▪️شوف بالن (Mantle heater)/ بن‌ماری (Water bath)
➖مواد شیمیایی / شناساگرها:
▪️شناساگر آنترون
▫️گلوکز
▪️کربوهیدرات‌های دیگر در صورت تمایل
▫️نمونه
➖ظروف شیشه‌ای و سایر تجهیزات:
▪️لوله‌های آزمایش، پایه لوله آزمایش، پیپت‌ها (Pipette)، بشر آزمایشگاهی (Beaker)، یخ، درپوش لوله آزمایش، دستمال کاغذی، آب فشان.
2️⃣شناساگرها
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
➖شناساگر آنترون: 2 گرم آنترون در 1 لیتر H2SO4 غلیظ حل کنید. شناساگر تازه تهیه شده باید برای تست استفاده شود.
محلول ذخیره گلوکز: با اضافه کردن 200 میکروگرم گلوکز به هر یک میلی‌لیتر آب مقطر، محلول ذخیره گلوکز را آماده کنید. نکته: در صورت تمایل می‌توان از کربوهیدرات‌های دیگر با همان غلظت به عنوان نمونه استفاده کرد.
◀️روش تست آنترون
✔️حجم‌های مختلف (50 میکرولیتر، 100 میکرولیتر و غیره) محلول گلوکز را از محلول تهیه شده (200 میکروگرم بر میلی‌لیتر) از پیپت خارج و در یک سری لوله آزمایش بریزید و حجم را با آب مقطر به 1 میلی‌لیتر برسانید.
✔️برای ساخت یک منحنی استاندارد، یکی از لوله‌ها را که فقط حاوی 1 میلی‌لیتر آب مقطر است را با لیبل 1 برچسب و بقیه لوله‌ها را با لیبل2 تا 9 برچسب بزنید. لوله‌های 10 تا 15 هم برای نمونه‌های نامعلوم برچسب بزنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️پنج میلی‌لیتر از شناساگر آنترون را به هر کدام از لوله‌ها اضافه و با ورتکس خوب مخلوط کنید.
✔️لوله‌ها را خنک کنید.
✔️روی لوله‌ها را با درپوش بپوشانید و در دمای 90 درجه سانتی‌گراد به مدت 17 دقیقه انکوبه کنید یا به مدت 10 دقیقه در بن‌ماری بجوشانید.
✔️لوله‌ها را تا دمای اتاق خنک کنید و چگالی نوری محلول‌ها را در طول موج 620 نانومتر در مقایسه با لوله شماره 1 اندازه گیری کنید.
✔️یک منحنی استاندارد جذب نور در برابر غلظت گلوکز تهیه کنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️مقدار گلوکز را در نمونه نامعلوم با رسم منحنی استاندارد A620 در محور Y و غلظت گلوکز در محور X تعیین کنید.
◀️نتیجه و تفسیر آزمون آنترون
✔️وجود کمپلکس آبی – سبز نشان دهنده وجود کربوهیدرات در محلول داده شده است.
✔️با استفاده از نمودار می‌توان غلظت نمونه‌های نامعلوم را تعیین کرد.
◀️موارد استفاده از تست آنترون
✔️تست آنترون برای تشخیص و تعیین غلظت کربوهیدرات‌ها در نمونه‌های مختلف مانند سرم خون، شیر و مشتقات آن و غیره استفاده می‌شود.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️محدودیت‌های تست آنترون
✔️نتیجه تست آنترون در نمونه‌هایی که حاوی کربوهیدرات‌هایی مانند دی-گلوکز فنیل اوزازون (D-glucose phenylosazone) و دی-گلوکز فنیل اوزتریائول (D-glucose phenylosotriaole) هستند، منفی است زیرا در مرحله دهیدراسیون، فورفورال یا هیدروکسی فورفورال تشکیل نمی‌دهند.
⛔️فقط فوروارد مجاز است⛔️
#اختصاصی_کانال
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸
💠تست آنترون (Anthrone Test): تعریف، اصول، روش، نتایج و موارد استفاده💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️تست آنترون یک آزمایش گروهی برای شناسایی کربوهیدرات‌ها است که روشی سریع و راحت برای تعیین کمیت کربوهیدرات‌های آزاد یا متصل به لیپیدها (Lipid) یا پروتئین‌ها، ارائه می‌کند.
◀️اهداف تست آنترون
➖برای تشخیص وجود کربوهیدرات در یک محلول مشخص
➖برای تعیین میزان غلظت کربوهیدرات‌های آزاد و متصل در یک محلول
◀️اصول تست آنترون
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️اگر کربوهیدرات به شکل کربوهیدرات آزاد مانند پلی یا مونوساکارید (poly- or monosaccharide) یا به شکل متصل مانند گلیکوپروتئین (Glycoprotein) یا گلیکولیپید (Glycolipid) در محلول وجود داشته باشد، اسید غلیظ موجود در شناساگر آنترون ابتدا آن را به مونوساکارید جزء هیدرولیز می‌کند.
✔️به طور مشابه، اسید غلیظ سپس هیدراته‌شدن مونوساکاریدها را کاتالیز می‌کند تا فورفورال (Furfural) (از پنتوزها (Pentose)) یا هیدروکسیل فورفورال (Hydroxyl furfural) (از هگزوزها (Hexose)) تشکیل شود. فورفورال یا هیدروکسیل فورفورال تشکیل شده با دو مولکول نفتول (Naphthol) مربوط به شناساگر آنترون، ترکیب شده و یک کمپلکس سبز آبی تشکیل می‌دهد. سپس می‌توان غلظت این کمپلکس را با اندازه‌گیری میزان جذب طول موج 620 نانومتری در یک اسپکتروفتومتر (Spectrophotometer) یا در کالریمتر فیلتر قرمز تعیین کرد.
◀️واکنش
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
➖هیدرولیز پلی‌ساکاریدها به مونوساکارید (پلی ساکارید ← مونوساکارید)
➖دهیدراسیون مونوساکاریدها به فورفورال (مونوساکارید ← فورفورال)
➖واکنش فورفورال با نفتول {فورفورال + شناساگر آنترون (نفتول) ← کمپلکس آبی – سبز}
◀️نیازمندی‌ها
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
1️⃣لوازم مورد نیاز
➖تجهیزات:
▪️اسپکتروفتومتر UV
▫️میکسر ورتکس (Vortex)
▪️شوف بالن (Mantle heater)/ بن‌ماری (Water bath)
➖مواد شیمیایی / شناساگرها:
▪️شناساگر آنترون
▫️گلوکز
▪️کربوهیدرات‌های دیگر در صورت تمایل
▫️نمونه
➖ظروف شیشه‌ای و سایر تجهیزات:
▪️لوله‌های آزمایش، پایه لوله آزمایش، پیپت‌ها (Pipette)، بشر آزمایشگاهی (Beaker)، یخ، درپوش لوله آزمایش، دستمال کاغذی، آب فشان.
2️⃣شناساگرها
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
➖شناساگر آنترون: 2 گرم آنترون در 1 لیتر H2SO4 غلیظ حل کنید. شناساگر تازه تهیه شده باید برای تست استفاده شود.
محلول ذخیره گلوکز: با اضافه کردن 200 میکروگرم گلوکز به هر یک میلی‌لیتر آب مقطر، محلول ذخیره گلوکز را آماده کنید. نکته: در صورت تمایل می‌توان از کربوهیدرات‌های دیگر با همان غلظت به عنوان نمونه استفاده کرد.
◀️روش تست آنترون
✔️حجم‌های مختلف (50 میکرولیتر، 100 میکرولیتر و غیره) محلول گلوکز را از محلول تهیه شده (200 میکروگرم بر میلی‌لیتر) از پیپت خارج و در یک سری لوله آزمایش بریزید و حجم را با آب مقطر به 1 میلی‌لیتر برسانید.
✔️برای ساخت یک منحنی استاندارد، یکی از لوله‌ها را که فقط حاوی 1 میلی‌لیتر آب مقطر است را با لیبل 1 برچسب و بقیه لوله‌ها را با لیبل2 تا 9 برچسب بزنید. لوله‌های 10 تا 15 هم برای نمونه‌های نامعلوم برچسب بزنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️پنج میلی‌لیتر از شناساگر آنترون را به هر کدام از لوله‌ها اضافه و با ورتکس خوب مخلوط کنید.
✔️لوله‌ها را خنک کنید.
✔️روی لوله‌ها را با درپوش بپوشانید و در دمای 90 درجه سانتی‌گراد به مدت 17 دقیقه انکوبه کنید یا به مدت 10 دقیقه در بن‌ماری بجوشانید.
✔️لوله‌ها را تا دمای اتاق خنک کنید و چگالی نوری محلول‌ها را در طول موج 620 نانومتر در مقایسه با لوله شماره 1 اندازه گیری کنید.
✔️یک منحنی استاندارد جذب نور در برابر غلظت گلوکز تهیه کنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️مقدار گلوکز را در نمونه نامعلوم با رسم منحنی استاندارد A620 در محور Y و غلظت گلوکز در محور X تعیین کنید.
◀️نتیجه و تفسیر آزمون آنترون
✔️وجود کمپلکس آبی – سبز نشان دهنده وجود کربوهیدرات در محلول داده شده است.
✔️با استفاده از نمودار می‌توان غلظت نمونه‌های نامعلوم را تعیین کرد.
◀️موارد استفاده از تست آنترون
✔️تست آنترون برای تشخیص و تعیین غلظت کربوهیدرات‌ها در نمونه‌های مختلف مانند سرم خون، شیر و مشتقات آن و غیره استفاده می‌شود.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️محدودیت‌های تست آنترون
✔️نتیجه تست آنترون در نمونه‌هایی که حاوی کربوهیدرات‌هایی مانند دی-گلوکز فنیل اوزازون (D-glucose phenylosazone) و دی-گلوکز فنیل اوزتریائول (D-glucose phenylosotriaole) هستند، منفی است زیرا در مرحله دهیدراسیون، فورفورال یا هیدروکسی فورفورال تشکیل نمی‌دهند.
⛔️فقط فوروارد مجاز است⛔️
#اختصاصی_کانال
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸
