#فلوسایتومتری #وزیکولهای_خارج_سلولی
💠شناسایی وزیکولهای خارج سلولی در ادرار با استفاده از فلوسایتومتری💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️وزیکولهای خارج سلولی توسط انواع سلول در بدن ترشح می‌شوند. آنها در اشکال و اندازه‌های مختلف وجود دارند. به عنوان مثال، اگزوزوم ها نانووزیکول‌هایی با اندازه 30 تا 200 نانومتر هستند که پس از ترکیب شدن با غشای پلاسمایی وزیکولهای داخل مجرا، آزاد می‌شوند.
✔️سایر وزیکولهای خارج سلولی شامل میکرووزیکول‌هایی هستند که بزرگ‌تر از اگزوزوم‌ها هستند و از غشای پلاسمایی سرچشمه می‌گیرند، نه از مسیر اندوسایتیک. در پزشکی، از وزیکولهای خارج سلولی می‌توان برای اطلاع پزشکان در مورد وضعیت پاتوفیزیولوژیک یک فرد استفاده کرد. این مقاله چگونگی شناسایی وزیکولهای خارج سلولی و توسعه یک تکنیک قوی را توضیح می‌دهد که بر محدودیت‌های قبلی غلبه می‌کند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️وزیکول های خارج سلولی به عنوان یک ابزار تشخیصی برای نمونه برداری از نمونه‌های کوچک خون یا ادرار برای نظارت بر وضعیت بیماری در حال ظهور هستند. در حال حاضر، روش‌های مختلفی مانند اولتراسانتریفیوژ، رسوب‌گذاری و جداسازی بر اساس گرادیان چگالی برای غنی‌سازی وزیکولهای خارج سلولی قبل از مشخص کردن آنها استفاده می‌شود.
✔️اندازه و غلظت وزیکولهای خارج سلولی با استفاده از روش‌های فیزیکی از جمله آنالیز ردیابی نانوذرات و غلظت پروتئین یا اسید نوکلئیک با استفاده از روش‌های مرسوم مانند وسترن بلات و PCR تعیین می‌شود.
✔️عیب اصلی این روش‌ها زمان بر بودن آنها و مناسب نبودن آنها برای غربالگری تعداد زیادی از نمونه‌ها است. یکی از چالش‌های شناسایی وزیکول خارج سلولی، تعیین ترکیب مولکولی وزیکول‌ها است. از آنجایی که تنوع سلول به سلول زیاد است، انتخاب نشانگرهای جهانی می‌تواند کارایی کمتری داشته باشد. به عنوان مثال، تغییرات در ترکیب وزیکولهای خارج سلولی در صورت بروز تومورها به خوبی درک نشده است.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️بسیاری از روش‌های فعلی مورد استفاده برای توصیف وزیکولهای خارج سلولی به دلیل نیاز به حجم نمونه بزرگ و/یا نمونه غنی‌شده محدود شده‌اند.
✔️در یک مطالعه، محققان از تکنیکی برای تشخیص حساس وزیکولهای خارج سلولی استفاده کردند که به حداقل پردازش نمونه‌ها نیاز دارد. وزیکولهای خارج سلولی مشتق شده از رده سلولی سرطان پروستات ابتدا با اولتراسانتریفیوژ خالص شدند. وزیکولهای خارج سلولی بازسازی شده دارای تتراسپانین، CD9 و نشانگر سلول های اپیتلیال، EpCAM بودند.
◀️بهبود حساسیت روش های تشخیصی
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️وزیکولهای خارج سلولی از یک رده سلولی سرطان پروستات،به نام PC3 استخراج شد. یکی از عوامل مهم رقیق شدن است. در نمونه‌های بیولوژیکی، مانند ادرار، وزیکولهای خارج سلولی ممکن است تا حد زیادی رقیق شوند. وزیکولهای خارج سلولی به دست آمده از پلاسما یا سرم نمونه‌های ناسالم نیز ممکن است با وزیکولهای خارج سلولی از بافت‌های طبیعی مخلوط شوند. در مواردی مانند این، از نشانگرهای اضافی برای تومور یا استرس برای گرفتن وزیکولهای خارج سلولی مربوطه استفاده می شود.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
💠شناسایی وزیکولهای خارج سلولی در ادرار با استفاده از فلوسایتومتری💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️وزیکولهای خارج سلولی توسط انواع سلول در بدن ترشح می‌شوند. آنها در اشکال و اندازه‌های مختلف وجود دارند. به عنوان مثال، اگزوزوم ها نانووزیکول‌هایی با اندازه 30 تا 200 نانومتر هستند که پس از ترکیب شدن با غشای پلاسمایی وزیکولهای داخل مجرا، آزاد می‌شوند.
✔️سایر وزیکولهای خارج سلولی شامل میکرووزیکول‌هایی هستند که بزرگ‌تر از اگزوزوم‌ها هستند و از غشای پلاسمایی سرچشمه می‌گیرند، نه از مسیر اندوسایتیک. در پزشکی، از وزیکولهای خارج سلولی می‌توان برای اطلاع پزشکان در مورد وضعیت پاتوفیزیولوژیک یک فرد استفاده کرد. این مقاله چگونگی شناسایی وزیکولهای خارج سلولی و توسعه یک تکنیک قوی را توضیح می‌دهد که بر محدودیت‌های قبلی غلبه می‌کند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️وزیکول های خارج سلولی به عنوان یک ابزار تشخیصی برای نمونه برداری از نمونه‌های کوچک خون یا ادرار برای نظارت بر وضعیت بیماری در حال ظهور هستند. در حال حاضر، روش‌های مختلفی مانند اولتراسانتریفیوژ، رسوب‌گذاری و جداسازی بر اساس گرادیان چگالی برای غنی‌سازی وزیکولهای خارج سلولی قبل از مشخص کردن آنها استفاده می‌شود.
✔️اندازه و غلظت وزیکولهای خارج سلولی با استفاده از روش‌های فیزیکی از جمله آنالیز ردیابی نانوذرات و غلظت پروتئین یا اسید نوکلئیک با استفاده از روش‌های مرسوم مانند وسترن بلات و PCR تعیین می‌شود.
✔️عیب اصلی این روش‌ها زمان بر بودن آنها و مناسب نبودن آنها برای غربالگری تعداد زیادی از نمونه‌ها است. یکی از چالش‌های شناسایی وزیکول خارج سلولی، تعیین ترکیب مولکولی وزیکول‌ها است. از آنجایی که تنوع سلول به سلول زیاد است، انتخاب نشانگرهای جهانی می‌تواند کارایی کمتری داشته باشد. به عنوان مثال، تغییرات در ترکیب وزیکولهای خارج سلولی در صورت بروز تومورها به خوبی درک نشده است.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️بسیاری از روش‌های فعلی مورد استفاده برای توصیف وزیکولهای خارج سلولی به دلیل نیاز به حجم نمونه بزرگ و/یا نمونه غنی‌شده محدود شده‌اند.
✔️در یک مطالعه، محققان از تکنیکی برای تشخیص حساس وزیکولهای خارج سلولی استفاده کردند که به حداقل پردازش نمونه‌ها نیاز دارد. وزیکولهای خارج سلولی مشتق شده از رده سلولی سرطان پروستات ابتدا با اولتراسانتریفیوژ خالص شدند. وزیکولهای خارج سلولی بازسازی شده دارای تتراسپانین، CD9 و نشانگر سلول های اپیتلیال، EpCAM بودند.
◀️بهبود حساسیت روش های تشخیصی
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️وزیکولهای خارج سلولی از یک رده سلولی سرطان پروستات،به نام PC3 استخراج شد. یکی از عوامل مهم رقیق شدن است. در نمونه‌های بیولوژیکی، مانند ادرار، وزیکولهای خارج سلولی ممکن است تا حد زیادی رقیق شوند. وزیکولهای خارج سلولی به دست آمده از پلاسما یا سرم نمونه‌های ناسالم نیز ممکن است با وزیکولهای خارج سلولی از بافت‌های طبیعی مخلوط شوند. در مواردی مانند این، از نشانگرهای اضافی برای تومور یا استرس برای گرفتن وزیکولهای خارج سلولی مربوطه استفاده می شود.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
#فلوسایتومتری #وزیکولهای_خارج_سلولی
ادامه
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️برای دستیابی به حساسیت بالای تشخیص، محققان ابتدا پارامترهایی را که برای به دست آوردن نسبت سیگنال به نویز بالا حیاتی بودند، تجزیه و تحلیل کردند. از آنجایی که فلورسانس تشخیص داده شده در فلوسایتومتر متناسب با مقدار فلوئوروکروم در هر سلول است، اگر تعداد وزیکولهای خارج سلولی اشباع شده باشد، می‌توان به حداکثر سیگنال رسید. بنابراین، برای تولید یک سیگنال بهینه، تعداد کل سلول در هر آزمایش و تعداد وزیکولهای خارج سلولی که حاوی اپی توپ هستند باید تعیین شود.
✔️تعداد وزیکولهای خارج سلولی گرفته شده به ازای هر سلول را می‌توان با قرار دادن سطح دایره وزیکول خارج سلولی بر روی سطح سلول محاسبه کرد. بر اساس این محاسبه، یک سلول 6 میکرونی می تواند 6420 وزیکول خارج سلولی را در خود جای دهد. اگر یک سایتومتر 3000 تا 6000 سلول داشته باشد × 1.93-3.85 وزیکول خارج سلولی می‌تواند این سلول‌ها را اشباع کند.
✔️این برخلاف تعداد 2 تا 4 آنتی بادی است که می‌توانند در شرایط اشباع به لنفوسیت‌های T متصل شوند. این اجازه می دهد تا فلورسانس سلول‌ها حتی اگر فقط نیمی از سطح اتصال توسط وزیکول های خارج سلولی پوشانده شده باشد قابل تشخیص باشد.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️یک سنجش قوی و قابل تکرار
✔️سلول‌های شش میکرونی استفاده شده برای مطالعه ،سلول های متراکم شده و زباله‌ها دور ریخته شدند. هنگامی که وزیکولهای خارج سلولی با سلول‌های پوشش داده شده با آنتی بادی به مدت 18 ساعت انکوبه شدند، سیگنال خوبی به دست آمد. بنابراین، با استفاده از سلول‌های پوشش داده شده با آنتی بادی، می‌توان حتی پروتئین‌هایی با فراوانی اندک را با حد تشخیص کمتر از روش وسترن بلات تشخیص داد.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️از این روش می‌توان برای تشخیص وزیکولهای خارج سلولی که نشانگرهای عمومی خارج سلولی مانند تتراسپانین ها یا نشانگرهای خاص سلول های اپیتلیال مانند EpCAM را بیان می‌کنند، استفاده کرد. این روش دارای حساسیت زیادی است که امکان مشاهده نشانگرها را مستقیماً در نمونه‌های رقیق مانند ادرار فراهم می‌کند.
✔️این روش می‌تواند یک سنجش قوی و تکرارپذیر برای تشخیص تومور مارکرهای مختلف باشد و می‌تواند برای تعیین وجود و پیشرفت بیماری بدون نیاز به غنی سازی نمونه استفاده شود.
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸
ادامه
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️برای دستیابی به حساسیت بالای تشخیص، محققان ابتدا پارامترهایی را که برای به دست آوردن نسبت سیگنال به نویز بالا حیاتی بودند، تجزیه و تحلیل کردند. از آنجایی که فلورسانس تشخیص داده شده در فلوسایتومتر متناسب با مقدار فلوئوروکروم در هر سلول است، اگر تعداد وزیکولهای خارج سلولی اشباع شده باشد، می‌توان به حداکثر سیگنال رسید. بنابراین، برای تولید یک سیگنال بهینه، تعداد کل سلول در هر آزمایش و تعداد وزیکولهای خارج سلولی که حاوی اپی توپ هستند باید تعیین شود.
✔️تعداد وزیکولهای خارج سلولی گرفته شده به ازای هر سلول را می‌توان با قرار دادن سطح دایره وزیکول خارج سلولی بر روی سطح سلول محاسبه کرد. بر اساس این محاسبه، یک سلول 6 میکرونی می تواند 6420 وزیکول خارج سلولی را در خود جای دهد. اگر یک سایتومتر 3000 تا 6000 سلول داشته باشد × 1.93-3.85 وزیکول خارج سلولی می‌تواند این سلول‌ها را اشباع کند.
✔️این برخلاف تعداد 2 تا 4 آنتی بادی است که می‌توانند در شرایط اشباع به لنفوسیت‌های T متصل شوند. این اجازه می دهد تا فلورسانس سلول‌ها حتی اگر فقط نیمی از سطح اتصال توسط وزیکول های خارج سلولی پوشانده شده باشد قابل تشخیص باشد.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️یک سنجش قوی و قابل تکرار
✔️سلول‌های شش میکرونی استفاده شده برای مطالعه ،سلول های متراکم شده و زباله‌ها دور ریخته شدند. هنگامی که وزیکولهای خارج سلولی با سلول‌های پوشش داده شده با آنتی بادی به مدت 18 ساعت انکوبه شدند، سیگنال خوبی به دست آمد. بنابراین، با استفاده از سلول‌های پوشش داده شده با آنتی بادی، می‌توان حتی پروتئین‌هایی با فراوانی اندک را با حد تشخیص کمتر از روش وسترن بلات تشخیص داد.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️از این روش می‌توان برای تشخیص وزیکولهای خارج سلولی که نشانگرهای عمومی خارج سلولی مانند تتراسپانین ها یا نشانگرهای خاص سلول های اپیتلیال مانند EpCAM را بیان می‌کنند، استفاده کرد. این روش دارای حساسیت زیادی است که امکان مشاهده نشانگرها را مستقیماً در نمونه‌های رقیق مانند ادرار فراهم می‌کند.
✔️این روش می‌تواند یک سنجش قوی و تکرارپذیر برای تشخیص تومور مارکرهای مختلف باشد و می‌تواند برای تعیین وجود و پیشرفت بیماری بدون نیاز به غنی سازی نمونه استفاده شود.
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸