#negative_staining
💠رنگ آمیزی منفی باکتری‌ها : اصول، روش و نتایج💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️در حقیقت استفاده از تکنیک‌های رنگ‌آمیزی مختلف در آزمایشگاهها، به شناخت بسیاری از میکروارگانیسم‌ها یا ناهنجاری‌ها کمک می‌کند. بنابراین رنگ‌آمیزی بافت یا نمونه نقش مهمی در پزشکی و تحقیقات دارد. اما گاهی اوقات روش‌های رنگ‌آمیزی می‌تواند سبب از بین رفتن ساختار نمونه یا بافت شده و نتایج را تحت تاثیر قرار دهد. گاهی نیز ممکن ایت میکروارگانیسم به خوبی رنگ‌آمیزی نشود و نتایج منفی (یا مثبت) کاذب را به همراه داشته باشد. در این شرایط رنگ آمیزی منفی مفیدتر خواهد بود.
✔️در رنگ آمیزی منفی، جهت تثبیت لام از حرارت استفاده نمی‌شود. زیرا تثبیت حرارتی می‌تواند ویژگی‌های مورفولوژیکی سلول را تغییر دهد. بنابراین این روش یکی از تکنیک‌های مهم رنگ‌آمیزی در آزمایشگاهها، به ویژه بخش میکروبیولوژی است. زیرا تکنیک رنگ آمیزی منفی بیشتر برای باکتری‌ها کاربرد دارد.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️رنگ آمیزی منفی در مواردی که باکتری به خوبی رنگ نمی‌شود، کاربرد دارد. در رنگ‌آمیزی منفی، سلول‌های باکتریایی رنگ‌آمیزی نمی‌شوند. بلکه پس زمینه به رنگ تیره رنگ‌آمیزی می‌شود. سلول‌های باکتری نیز به‌صورت ناحیه‌ای شفاف در پس‌زمینه‌ای تاریک ظاهر می‌شوند. در رنگ‌آمیزی منفی باکتری، می‌توان از انواع رنگ‌های اسیدی مانند نیگروسین (Nigrosin)، جوهر هندی (India ink) ، ائوزین (Eosin) یا کنگو رد (Congo red) استفاده کرد.
◀️ علت نامگذاری رنگ آمیزی منفی
✔️جوهر هندی یا نیگروسین، رنگ‌های اسیدی هستند. در نتیجه به راحتی یک یون هیدروژن (پروتون) را از دست می‌دهند و دارای بار منفی می‌شوند. از آنجایی که سطح اکثر سلول‌های باکتری دارای بار منفی است، رنگ با بار منفی را دفع می‌کند. به همین دلیل رنگ به سلول نفوذ نمی‌کند و سلول به عنوان یک منطقه شفاف ظاهر می‌شود. ر عوض سطح شیشه رنگی شده و باکتری‌ها به صورت لکه‌های شفاف در پس زمینه تاریک ظاهر می‌شوند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️کاربرد رنگ آمیزی منفی در آزمایشگاه
✔️هدف اصلی از رنگ آمیزی منفی بررسی شکل مورفولوژیکی، اندازه و چینش سلول‌های باکتریایی است که رنگ‌آمیزی آن‌ها دشوار است. به عنوان مثال: اسپیرلا (Spirilla). همچنین می‌توان از آن برای رنگ‌آمیزی سلول‌هایی که بیش از حد حساس هستند استفاده کرد.
✔️رنگ‌آمیزی منفی برای آماده‌سازی نمونه‌های بیولوژیکی و بررسی آن‌ها زیر میکروسکوپ الکترونی نیز کاربرد دارد. از این روش برای مشاهده ویروس‌ها، باکتری‌ها، تاژک‌های باکتریایی، ساختارهای غشایی بیولوژیکی و پروتئین‌ها یا توده‌های پروتئینی استفاده می‌شود که همگی قدرت پراکندگی الکترون پایینی دارند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️همچنین برای مطالعه و شناسایی توده‌های لیپیدی آبی مانند لیپوزوم‌های لایه‌ای، میسل‌های کروی معکوس و فازهای استوانه‌ای شش ضلعی توسط میکروسکوپ الکترونی از رنگ آمیزی منفی استفاده می‌شود.
◀️مراحل رنگ آمیزی منفی
1️⃣یک لام تمیز را بردارید. یک قطره بسیار کوچک از نیگروسین را در انتهای لام قرار دهید. با استفاده از لوپ، مقدار کمی از کشت را روی قطره نیگروسین قرار دهید. دقت کنید رنگ پخش نشود.
2️⃣یک لام تمیز دیگر بردارید و انتهای آن را روی قطره رنگ قرار دهید. آن را به سمت قطره کج کنید تا یک زاویه حاده تشکیل شود.
3️⃣سپس یک گسترده یکنواخت و نازک ایجاد کنید.
4️⃣بدون هیچگونه حرارت دادن، اجازه دهید اسمیر روی لام خشک شود.
5️⃣لام را با استفاده از روغن ایمرسیون زیر میکروسکوپ بررسی کنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️بررسی نتایج رنگ‌آمیزی منفی زیر میکروسکوپ
✔️در زیر میکروسکوپ، سلول‌های باکتریایی به صورت یک جسم شفاف با اندازه و شکل متغیر در پس زمینه تاریک ظاهر می‌شوند.
⤵️Microbiology Info
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸
💠رنگ آمیزی منفی باکتری‌ها : اصول، روش و نتایج💠
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️در حقیقت استفاده از تکنیک‌های رنگ‌آمیزی مختلف در آزمایشگاهها، به شناخت بسیاری از میکروارگانیسم‌ها یا ناهنجاری‌ها کمک می‌کند. بنابراین رنگ‌آمیزی بافت یا نمونه نقش مهمی در پزشکی و تحقیقات دارد. اما گاهی اوقات روش‌های رنگ‌آمیزی می‌تواند سبب از بین رفتن ساختار نمونه یا بافت شده و نتایج را تحت تاثیر قرار دهد. گاهی نیز ممکن ایت میکروارگانیسم به خوبی رنگ‌آمیزی نشود و نتایج منفی (یا مثبت) کاذب را به همراه داشته باشد. در این شرایط رنگ آمیزی منفی مفیدتر خواهد بود.
✔️در رنگ آمیزی منفی، جهت تثبیت لام از حرارت استفاده نمی‌شود. زیرا تثبیت حرارتی می‌تواند ویژگی‌های مورفولوژیکی سلول را تغییر دهد. بنابراین این روش یکی از تکنیک‌های مهم رنگ‌آمیزی در آزمایشگاهها، به ویژه بخش میکروبیولوژی است. زیرا تکنیک رنگ آمیزی منفی بیشتر برای باکتری‌ها کاربرد دارد.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️رنگ آمیزی منفی در مواردی که باکتری به خوبی رنگ نمی‌شود، کاربرد دارد. در رنگ‌آمیزی منفی، سلول‌های باکتریایی رنگ‌آمیزی نمی‌شوند. بلکه پس زمینه به رنگ تیره رنگ‌آمیزی می‌شود. سلول‌های باکتری نیز به‌صورت ناحیه‌ای شفاف در پس‌زمینه‌ای تاریک ظاهر می‌شوند. در رنگ‌آمیزی منفی باکتری، می‌توان از انواع رنگ‌های اسیدی مانند نیگروسین (Nigrosin)، جوهر هندی (India ink) ، ائوزین (Eosin) یا کنگو رد (Congo red) استفاده کرد.
◀️ علت نامگذاری رنگ آمیزی منفی
✔️جوهر هندی یا نیگروسین، رنگ‌های اسیدی هستند. در نتیجه به راحتی یک یون هیدروژن (پروتون) را از دست می‌دهند و دارای بار منفی می‌شوند. از آنجایی که سطح اکثر سلول‌های باکتری دارای بار منفی است، رنگ با بار منفی را دفع می‌کند. به همین دلیل رنگ به سلول نفوذ نمی‌کند و سلول به عنوان یک منطقه شفاف ظاهر می‌شود. ر عوض سطح شیشه رنگی شده و باکتری‌ها به صورت لکه‌های شفاف در پس زمینه تاریک ظاهر می‌شوند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️کاربرد رنگ آمیزی منفی در آزمایشگاه
✔️هدف اصلی از رنگ آمیزی منفی بررسی شکل مورفولوژیکی، اندازه و چینش سلول‌های باکتریایی است که رنگ‌آمیزی آن‌ها دشوار است. به عنوان مثال: اسپیرلا (Spirilla). همچنین می‌توان از آن برای رنگ‌آمیزی سلول‌هایی که بیش از حد حساس هستند استفاده کرد.
✔️رنگ‌آمیزی منفی برای آماده‌سازی نمونه‌های بیولوژیکی و بررسی آن‌ها زیر میکروسکوپ الکترونی نیز کاربرد دارد. از این روش برای مشاهده ویروس‌ها، باکتری‌ها، تاژک‌های باکتریایی، ساختارهای غشایی بیولوژیکی و پروتئین‌ها یا توده‌های پروتئینی استفاده می‌شود که همگی قدرت پراکندگی الکترون پایینی دارند.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
✔️همچنین برای مطالعه و شناسایی توده‌های لیپیدی آبی مانند لیپوزوم‌های لایه‌ای، میسل‌های کروی معکوس و فازهای استوانه‌ای شش ضلعی توسط میکروسکوپ الکترونی از رنگ آمیزی منفی استفاده می‌شود.
◀️مراحل رنگ آمیزی منفی
1️⃣یک لام تمیز را بردارید. یک قطره بسیار کوچک از نیگروسین را در انتهای لام قرار دهید. با استفاده از لوپ، مقدار کمی از کشت را روی قطره نیگروسین قرار دهید. دقت کنید رنگ پخش نشود.
2️⃣یک لام تمیز دیگر بردارید و انتهای آن را روی قطره رنگ قرار دهید. آن را به سمت قطره کج کنید تا یک زاویه حاده تشکیل شود.
3️⃣سپس یک گسترده یکنواخت و نازک ایجاد کنید.
4️⃣بدون هیچگونه حرارت دادن، اجازه دهید اسمیر روی لام خشک شود.
5️⃣لام را با استفاده از روغن ایمرسیون زیر میکروسکوپ بررسی کنید.
🔬 @MLSandBIOLOGY 🔬
◀️بررسی نتایج رنگ‌آمیزی منفی زیر میکروسکوپ
✔️در زیر میکروسکوپ، سلول‌های باکتریایی به صورت یک جسم شفاف با اندازه و شکل متغیر در پس زمینه تاریک ظاهر می‌شوند.
⤵️Microbiology Info
🧬Instagram Link🧬
❤️کانال جامع علوم آزمایشگاهی و بیولوژی👇👇
🔬 @MLSandBIOLOGY 🩸