🔮تابع...
ميڪرو_عملي


🔷Gram stain
🍁مجموعة من المواد التي نستخدمها للتفريق بين البڪتيريا السالبة والموجبة ، ٳليگم الخطوات :-
🔶Procedures :-

1⃣- الخطوﮪ الٲولۍ ⇦ Fixation التثبيت.
📚تثبيت العينه بطريقة استخدام الحرارة او مواد ڪيميائية مثل الٳيثانول.
🩺🎼عند التثبيت بالحرارة نقوم بالآتي :-
1- ضع قطرة من D.W علۍ السلايد.
2-نضيف من المستعمره colony يعني بكتيريا تم نزريعها مسبقاً ثم نقوم بخلطها مع الDWاللي كانت عبارة عن قطرﮪ في السلايد.
✨♦️طبعاً الان اصبح اسمها smear
3- نقوم بتثبيت الـsmear بواسطة الحرارﮪ نمرر السلايد فوق الحراره 3-5 مرات.

2⃣- الخطوﮪ الثانيه ⇦ Staining
🔸Crystal violet :-
نغطي الـsmear بهذه الصبغه مادة crystal violet ونخليها دقيقه ثم نقوم بغسلها
في هذه المرحلة تتفاعل صبغة الموجبة والسالبه مع الـcrystal violet
🔸iodine
ايضاً نغطي الـsmear بالٲيودين دقيقه وبعدين نغسلها
طبعاً هذه الصبغه ستتفاعل مع صبغة الكريستال violet
🔸decolorization
نغطي الsmear بٲي مادة decolorization لمدة ثواني فقط
هذه العملية نستخدمها من ٲجل ٳزالة الـcrystal violet من البڪتيريا سالبة الgram باستخدام مواد مذيبه مثل
Alcohol, aceton, acetoalcohol

🔸safranin
نغطي الsmear بهذﮪ المادة لمدة دقيقه واحدﮪ بعدما خلصنا من decolorization.
في هذه المرحلة ⇦ البڪتيريا السالبة بتصبغ بالsafranin

✨🩺النتيجہ'ﮪ :-
نحط العينة تحت الميڪروسڪوب ونلاحظ ٳذا گان اللون ٲحمر فٳن البكتيريا سالبة نوع عصوي
G negative bacilli
وٳذا گان لون ٲزرق فٳنها موجبة كروية
G +ve cocci
الصور موجودﮪ في سلايد 13

⭕️ملاحظة:-
الـcell wall في البڪتيريا الموجبة يتگون مة جدار سميڪ Thick من الببتيدوجلايگان.
بينما في البڪتيريا السالبة يتگون من الـLipopolysaccharide.
👇🏻👇🏻هنا توضيح ٲڪثر لـ⇩:-
🔷🩺Decolorization
تگلمنا عنه في نفس المنشور وقلنا انه نستخدم فيه
🔮1- alcohol
طبعاً يحتاج دقيقة واحدة وعيبه انه ضعيف weak

🔮2- acetone
سريع وقوي

🔮3- acetoalcohol
الٲڪثر استخداماً ويحتاج 30 ثانيه
ومثلما قلنا فوق كملنا عملية الـdecolorization نرجع نصبغ العينه بالـsafranin وهذي الصبغه تتفاعل مع الببتيدوجلايگان للـG negative ولاتتفاعل مع الـ +ve وبعد دقيقة من وضع هذه الصبغه نقوم بغسل العينة وننتظر حتۍ يجف السلايد ونضعه تحت الميكروسڪوب لمشاهدة نوع البڪتيريا.

🔹G + ve
تصبغ بصبغة الگريستال violet ويگون الناتج لون ٲزرق
♦️G _ ve
تصبغ بصبغة الـسافرانين ويڪون الناتج لون ٲحمر.

❌ٲخطاء شائعة تحصل ٲثناء قيامنا بالعمليات السابقة منها :-
🍁1- ابقاء البگتيريا ٲكثر من 24 ساعة قد يتسبب بموتها
🍁2- زيادة الحرارة علۍ السلايد يعني غلط انه السلايد نخليها تتعرض لحرارة ٲكثر من الوقت اللازم
🍁3- عدم الغسل بطريقة صحيحة
🍁4- نستخدم گمية زائدﮪ من الـDecolorization

#اللجنة_العلمية_للدفعة_السادسة
#ميڪرو_عملي
#قسم_النشر_والتوزيع

🔮تابع...
ميڪرو_عملي

✨🔴✨Culture media✨🔴✨
✍🏻التعريف :-
هي عبارة عن محاليل غذائية تستخدم في المختبرات ليتم تزريع الڪائنات الدقيقة فيها.
✍🏻ٲهميتها :-
1- تحدد نوع المضاد الحيوي المناسب للبگتيريا.
2- للحصول علۍ مستعمرات منفصلة.
3- دراسة خصائص البڪتيريا من ٲجل الٲبحاث العلمية وغيرها.
✍🏻انواع العينات :-
1- uria
2- stool
3- swap
4- blood

Preperation➪ التحضير
✨📚يتم اخذ العينة مباشرة وتزريعها في media
✨📚يتم تعقيم الـloop
✨📚تخطيط الmedia كما في الصور الموضحه في المحاضرة
✨📚يتم التزيع علۍ gas burner
✨📚بعد التزريع نضع الmedia في الحاضنة لمدة 24ساعة
✨📚بعد 24 ساعة تؤخذ العينة ونعمل لها touch of colony استعداداً لصبغها ومعرفة ما ٳذا گانت البگتيريا موجبة او سالبة.

😢Classification :-
1- consistency :-
هذا التصنيف يعتمد ع معدل الـagar او كميته ويندرج تحته ثلاث حالات
①solid
②semisolid
③liquid
2- Composition:-
يعتمد علۍ المگونات المختلفة للٲوساط التزريعية ⇦media وگذلڪ ع الٳستخدام.

🧪Consistency:-
The advantages of agar
مميزات الـagar
🍁...عبارة عن كربوهيدرات عديد التسكر
🍁...لايذوب في الحاضنة عند درجة حرارة 37 لذلك يستخدم ك وسط تزريعي
🍁... مقاوم لدرجة حرارة الاوتوكلاف التي هي 121 درجة اثناء عملية التعقيم.
🍁... يعطي الصلابة للٲوساط الزراعية وذلك ٳعتماداً ع كميته فيها.

🩺🩸ٲولاً ... الصلب تگون نسبة الـagar فيه1.5% مثل
Macconky, CLED, XLD, blood chocolate.

🩺🩸ثانياً... السائل وتكون نسبة الـagar فيه 0% مثل
Tryptone soya brath, alkaline peptone water, transport media.

🩺🩸ثالثاً... شبه صلب STM وتكون نسبة الـagar فيه0.75% وتعتبر هي الٲفضل لمعرفة حرگة البڪتيريا.


🧪🧬Composition:-
🔹يعتمد هذا التقسيم علۍ مگونات الميديا :-
🩺1- البروتين ⇦ احماض امينيه وببتيد
🩺2- مؤشرات الحمضية او القاعدية ⇦ وهي مؤشرات تعطي لون حسب الحموضة
📝A- phenol red➪
✍🏻ٳذا گان حمضي يعطي لون ٲصفر
✍🏻ٳذا كان قاعدي يعطي لون ٲحمر
📝B- neutral red ➪
✍🏻حمضي⇦ لون احمر
✍🏻قاعدي⇦لون اصفر
📝C- bromothymol blue➪
✍🏻حمضي⇦ اصفر
✍🏻قاعدي⇦ازرق
....نتابع بقية مكونات الـmedia :-
🩺3- معادن :- مثل الحديد والكالسيوم والمغنيسيوم وگلوريد الصوديوم.
🩺4- سڪر :- بعض الـmedia تحتوي علۍ نوعين من السگر والبعض تحتوي ع ثلاثة انواع.
🩺5- مواد اختيارية "محددﮪ" وهي مواد تسمح بنمو نوع محدد من البگتيريا لغرض تحديد نوع المضاد الحيوي المناسب لها هذه المواد مثل
الٲملاح الصفراويه ، كلوريد الصوديوم ، صبغات ، مضادات حيوية
🩺6 ـ agar

📚🔮طبعاً الـpH indicator مرتبط بالسگر والبروتين لٳن الاوساط الزراعية ٳذا استهلگت ڪل السگر تنتج اوساط حمضيةوٳذا استهلڪت گل البروتين تنتج اوساط قاعديه لكن بعض البروتينات فقط.

✨🔹types of media according to composition :-
🥀🍁1- basic media
🔮لاتحتاج متطلبات خاصة مثال عليها
neutrient agar

🥀🍁2- enriched media
🔮عبارة عن ميديا صلبة وتحتاج متطلبات خاصة مثل الدم.
Blood-chocolate

🥀🍁3- enrichment media
🔮ميديا سائلة تحتاج متطلبات خاصة مثل SPS
Tryptone soya brath, alkaline peptone water,

🥀🍁4- selective media
🔮تحتوي ع مواد معينه اختيارية لتثبيط الگائنات الدقيقة الغير مرغوب فيها.
مثل
XLD, macconky, DCA, SS.....etc.

🥀🍁5- differential media
🔮تحتوي علۍ مؤشر الـpH والذي يقوم بالتفريق بين انواع البگتيريا الممرضة هذه الميديا مثل
CLED, XLD, macconky, DCA ...etc.

🥀🍁6- transport media
مثل
Cary-Bilar medium, Amies transport media

🥀🍂7- identification media
✍🏻...گل الـselective media تعتبر differential media لگن مش گل الـdifferential تعتبر selective
➪ CLED ➪
تعتبر differential فقط

#اللجنة_العلمية_للدفعة_السادسة
#ميڪرو_عملي
#قسم_النشر_والتوزيع

ملخص المحاضرة الرابعة ميكرو عملي 🔥

#ملخصات
#ميكرو_عملي
#قسم_العملي
#اللجنة_العلمية_الدفعة_السادسة

ملخص المحاضرة الخامسة ميكرو عملي 🔥

#ملخصات
#ميكرو_عملي
#قسم_العملي
#اللجنة_العلمية_الدفعة_السادسة

ملخص المحاضرة الثالثة كاملة للميكرو العملي ..ولكن على شكل منشور 😁🔥

🔥Culture media 🔥

Culture Media:-
اوساط غذائية تعمل على تغذية ونمو البكتيريا...
*Def:-
Providing the appropriate nutrient medium for bacteria in Laboratories.


*اسم الفحص الذي نشخص فيه نوع البكتيريا هو ⬅️stool cultuer


*اسم الفحص الذي نشخص فيه parasite هو ⬅️
Stool analysis

*components of culture media is :-
اي ان البكتيريا تتغذى عليه
1) Carbohydrate.
2) Minerals (selective agent).
3) protein.
4)Agar .
5) yeast
6) pH indecater.
7) Fat .
8) Stain -->selecting agent.

*Slinder(اقيس فيه الماء المطلوب)


* Agar:-
➡️ Agar is polysaccharides that form a gelatinous substance which gives rigidity to the medium.

تعمل ماده جلاتينية وظيفتها تعطي صلابة للوسط


* Classification of cluture media :-

1⃣consistency.. (Agar).

- نسبه ال (Agar) :-
--» 1,5% يعطي قوام ثابت (solid)
--»0% تكون liquid وتسمى Broth

--»0.75% تكون semisolid
فهي تحدد حركه البكتيريا مثل SIM


2⃣content.. (حق الاطباق).




&&&&&&&&&&
🛑مهم الفرق بينهن والمثال والاستخدام لكل نوع .
*Type of culture Media according to composition :-

1) Basic media-->

-نستخدمه في فحص الحساسية وتحديد نوع المضاد الحيوي (Antibiotic)


-يحتوي على مواد اساسية مثل المواد الذي ذكرت سابقاً---» لذلك أي نوع من البكتيريا تعيش فيه .

⬅️مثل / nutrient agar.

**

2) Enriched media--->

1.5 (solid)
يحتوي على نفس مكونات ال basic ولكن أضافوا لها Enriched factor ..فهو عامل مغذي
حيث يتم إضافة ال blood الى blood agar

يتكون من نوعين هما :
1-blood agar
حيث يكون الوسط فيه بارد
حيث يستخدم خصوصًا في بكتيريا sterptococcus لانها تستطيع تصنيفها اذا كانت بيتا او الفا او جاما
حيث
beta hemolysis
تعني تكسير كامل
alfa hemolysis
تعني تكسير جزئي
jama hemolysis
تعني انه لا يوجد تكسير

2- chocolate agar = heated blood
اي تكون في وسط ساخن ..وهذا يؤدي إلى تكسير RBCs
تستخدم في البكتيريا المدللة التي تحتاج الى ظروف معينة (fastidious organism ) مثل :
🔥Neisseria spp.
🔥haemophilus influenzae

**

3)Enrichment Media
.
يستخدم لتزريع عينه الدم (sps) ويختلف عن الاول بأنه ( 0%agar ) اي انه broth.

⬅️مثل: TSA and TSB.

**

4) Selective agent (media)--->

-تثبيط نوع البكتيريا الغير مرغوبة مثل normal flora وتعزز نمو البكتيريا الممرضة الذي نحتاج تزريعها .
-نسبة او نوع ال"Selective agent" تختلف من نوع إلى آخر .
-انواعها يكونوا على حسب نوع العينة "normal flora" وعلى حسب نوع ال "pathogen"
ومن امثلتها ⬅️
📌Mannitol salt agar
📌Macconkey broth agar( liquid)
نسبة(%agar 0)↪️

📌Macconkey agar ( solid)

📌DCA , SS ,XLD , TCBS , EMB (agars)

**

5)indicator media وتسمى أيضًا
(differential media)---≥
-وهو عبارة عن موشر تمييز بين نوعين من البكتيريا (عباره عن لون)

- له ثلاثه انواع :-
١-phenol red:-
->Yellow(حامضي)
->red(قاعدي).

٢-Neutral red :-
->Yellow (قاعدي)
->red(حامضي).

٣-BTB (bromo thymol blue):-
->Yellow(حامضي).
->blue(متعادل).
->green(قاعدي).
__

*تنقسم البكتيريا الى :-

1⃣ مستهلكة للاكتوز :-
-تعطي وسط حامضي.
مثل( Escherichia coli) و (klebsiella).
وهذا يعطي لون اصفر

2⃣غير مستهلكة للاكتوز:-

-تعطي وسط قاعدي ---» لون احمر » مثل (coliform)
____

⬅️مثال لل indicator media
- CLED agar حيث يستخدم لتوزيع البول

((🔴 ملاحظة مهمة🔴 / أي طبق زراعي يحدث فيه تغيير في اللون من لون إلى اخر فهذا دلالة على وجود indicator agent ويصنف هذا الطبق as indicator media او باسمه الآخر differential media ))

****

6)Transport media:-

-وسط غذائي يحتوي على
( preservative agent).

-يستخدم لنقل العينات لكي لا تخرب مع الوقت.
مثل : Amies transport medium

⬅️مثل fastidions microorganism لازم تزرع على طول .

*

7)identification media:-

-تستخدم للتعرف على صفات وخواص البكتيريا .
٠
⬅️ امثلتها تسمى (biochemical test)
مثل
١• SCA tesa : Simmons' citrate agar

٢• KIA test

٣•SIM agar

٤•urease test agar.

٥• Citrate utilization test.

**&&&&&

-كل ال selective تعتبر indicator ,,,
لكن ليس كل ال indector يعتبر selective

⏺يتم رفض العينة إذا لم يتم أخذ البيانات وموعد أخذ العينة.


⏺مكونات طبق التوزيع الثلاثي الموجود في المعمل :
-macconkey،
-blood،
-chocolate

#ملخصات
#ميكرو_عملي
#قسم_العملي

أهم المعلومات التي تم تقييدها -ميكرو عملي
للزميلة/شيام الحمادي👇المحاضرات الثلاث الأولى 🔥

#ملخصات
#ميكرو_عملي

Micro.lab 3 (culture media)🔥
الإضافات التي لم تذكر في الملزمة 👏
مشاركة زميلنا الرائع/ هاشم وليد

#قسم_العملي
#ميكرو_عملي

ورجعنا لكم بأسئلة عن المعمل الاول والثاني للميكرو العملي 😊🔥

#MCQ
#ميكرو_عملي
#قسم_العملي