تحليل البصاق sputum
ACID FAST BACILLI
لنوع الأول يعتمد يستخدم لإكتشاف مرض الدرن (TB ) والنوع الثاني من التحاليل نستخدم طريقة الزراعة والتحضيين لإكتشاف أنواع المايكروبات المتواجدة بشكل عام وبالتالي علاجها.
أولاً : تحليل البصاق ثلاثة أيام متتالية :-
- يشترط تجميع البصاق في الصباح الباكر بعد المضمضة بالماء عدة مرات وقبل الأكــــــــل ولا تقبل عينات اللعابالــ (saliva) لتسهيل إخراج البلغم يمكن إستنشاق بخار الماء الساخن في الصباح ويفضل أن ترسل العينة في نفس اليوم إلى المعمل ليتم إختبارها.
* يجب التأكيد على التالي عند إستلام العينة :
1-أن يكون وعاء تجميع العينة نظيف وغير محتوي على أي إضافات ويفضل إحضارالعينة في الوعاء الذي يعطى من المختبر وليس سواه.
2-أن تكون العينة محتوية على البلغم وإلا فلا تقبل عينة اللعاب.
2-كتابة الإسم على الوعاء المحتوي على العينة.
3-كتابة التاريخ على وعاء العينة.
4-كتابة رقم العينة على الوعاء ( يعني العينة الأولى أو الثانية أو الثالثة ).
*خطوات التحليل :- عبارة عن عمل فيلم من البلغم وصباغته بصبغة الــــZiehl Neelsen stain التي من خلالها يتم صباغة الــ acid fast bacilli من النوع الــ Mycobacterium tuberculosis المسببة لمرض الدرن الرئوي.
1- نقوم بأخذ جزء من البلغم المشكوك فيه ( أي الموجود به شيء مريب ومتغير كلون غريب أو دم ) ونفرده على شريحة زجاجية.
2- نترك الشريحة الزجاجية لتنشف في الهواء.
3- نقوم بالتثبيت للمسحة بواسطة تمرير الشريحة بشكل سريع على الجزء الأعلى من النار حوالي 4-5 مرات.
4- نتبع خطوات الصبغة المرفقة مع الصبغة ، فالصبغات الخاصة بهذا التحليل نوعان :
النوع الأول لانستخدم فيه النار والتسخيين وهذه الصبغة سريعة جدا وحديثة.
النوع الثاني نستخدم النار وهي طريقة قديمة ولكن نتائجها أفضل.
5-بعد الصباغة نقوم بفحص الشريحة تحت الميكروسكوب كاملة بشكل جيد ثم نحدد وجود من عدم وجود الدرن بإكتشافنا أو عدم إكتشافنا للعصيات المنحنية.
6- عند كتابة التقرير يجب أن نكتب في حال لم نجد شيء : No acide fast bacilli is seen ولا نكتب Negative لأنه من الممكن أن لا نجد في الشريحة أو في الجزئية المفحوصة العصيات بينما هي موجودة في جزء آخر من العينة وفي حال وجودها نكتب كالتالي :
+++ one or more bacilli / oil slide
++ ten bacilli / slide
+ from three to nine bacilli / slide
+/- from one to tow bacilli / slide
انيا / الزراعة و التحضين :- نحتاج عينة واحدة فقط لنزرعها في الميديا التالية :
1-Blood agar
2-Chocolate agar
3-MacConkey agar
4-SAB agar
لمدة 24 ساعة ثم نقوم بتشخيص نوع البكتيريا في حال النمو بإستخدام صبغة الجرام ثم نستخدم الديسكات المحتوية على المضادات لنرى من منها أكثر نفعا في القضاء على هذه البكتيريا وبالتالي نساعد الطبيب المعالج في تحديد نوع الدواء.
*ملاحظة / هناك نوع خاص للميديا المستخدمة لإكتشاف وجود الدرن وتدعى Lownsten jenseen media فقط نستخدمها للدرن ولكن لباقي الأنواع من البكتيريا نستخدم الميديا السابق ذكرها.
Telegram.me/analysis_96
ACID FAST BACILLI
لنوع الأول يعتمد يستخدم لإكتشاف مرض الدرن (TB ) والنوع الثاني من التحاليل نستخدم طريقة الزراعة والتحضيين لإكتشاف أنواع المايكروبات المتواجدة بشكل عام وبالتالي علاجها.
أولاً : تحليل البصاق ثلاثة أيام متتالية :-
- يشترط تجميع البصاق في الصباح الباكر بعد المضمضة بالماء عدة مرات وقبل الأكــــــــل ولا تقبل عينات اللعابالــ (saliva) لتسهيل إخراج البلغم يمكن إستنشاق بخار الماء الساخن في الصباح ويفضل أن ترسل العينة في نفس اليوم إلى المعمل ليتم إختبارها.
* يجب التأكيد على التالي عند إستلام العينة :
1-أن يكون وعاء تجميع العينة نظيف وغير محتوي على أي إضافات ويفضل إحضارالعينة في الوعاء الذي يعطى من المختبر وليس سواه.
2-أن تكون العينة محتوية على البلغم وإلا فلا تقبل عينة اللعاب.
2-كتابة الإسم على الوعاء المحتوي على العينة.
3-كتابة التاريخ على وعاء العينة.
4-كتابة رقم العينة على الوعاء ( يعني العينة الأولى أو الثانية أو الثالثة ).
*خطوات التحليل :- عبارة عن عمل فيلم من البلغم وصباغته بصبغة الــــZiehl Neelsen stain التي من خلالها يتم صباغة الــ acid fast bacilli من النوع الــ Mycobacterium tuberculosis المسببة لمرض الدرن الرئوي.
1- نقوم بأخذ جزء من البلغم المشكوك فيه ( أي الموجود به شيء مريب ومتغير كلون غريب أو دم ) ونفرده على شريحة زجاجية.
2- نترك الشريحة الزجاجية لتنشف في الهواء.
3- نقوم بالتثبيت للمسحة بواسطة تمرير الشريحة بشكل سريع على الجزء الأعلى من النار حوالي 4-5 مرات.
4- نتبع خطوات الصبغة المرفقة مع الصبغة ، فالصبغات الخاصة بهذا التحليل نوعان :
النوع الأول لانستخدم فيه النار والتسخيين وهذه الصبغة سريعة جدا وحديثة.
النوع الثاني نستخدم النار وهي طريقة قديمة ولكن نتائجها أفضل.
5-بعد الصباغة نقوم بفحص الشريحة تحت الميكروسكوب كاملة بشكل جيد ثم نحدد وجود من عدم وجود الدرن بإكتشافنا أو عدم إكتشافنا للعصيات المنحنية.
6- عند كتابة التقرير يجب أن نكتب في حال لم نجد شيء : No acide fast bacilli is seen ولا نكتب Negative لأنه من الممكن أن لا نجد في الشريحة أو في الجزئية المفحوصة العصيات بينما هي موجودة في جزء آخر من العينة وفي حال وجودها نكتب كالتالي :
+++ one or more bacilli / oil slide
++ ten bacilli / slide
+ from three to nine bacilli / slide
+/- from one to tow bacilli / slide
انيا / الزراعة و التحضين :- نحتاج عينة واحدة فقط لنزرعها في الميديا التالية :
1-Blood agar
2-Chocolate agar
3-MacConkey agar
4-SAB agar
لمدة 24 ساعة ثم نقوم بتشخيص نوع البكتيريا في حال النمو بإستخدام صبغة الجرام ثم نستخدم الديسكات المحتوية على المضادات لنرى من منها أكثر نفعا في القضاء على هذه البكتيريا وبالتالي نساعد الطبيب المعالج في تحديد نوع الدواء.
*ملاحظة / هناك نوع خاص للميديا المستخدمة لإكتشاف وجود الدرن وتدعى Lownsten jenseen media فقط نستخدمها للدرن ولكن لباقي الأنواع من البكتيريا نستخدم الميديا السابق ذكرها.
Telegram.me/analysis_96
تيريا المحتمل وجودها في عينة البول:
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• المكورات السبحية البراز يه
• عصيات الحميات المعوية (التيفود)
• عصيات القولون E.coli ,Strept. faecalis
• عصيات البروتيص
• السيلان
• السل
البيئات المستخدمة في عينات البول:
Blood agar:
بعض أنواع البيئات لا تنمو ألا بوجود الدم مثل:
الالتهاب السحائي الوبائي - الالتهاب الرئوي.
بعض أنواع البكتيريا تفرز خمائر تذيب كرات الدم الحمراء فيمكن التعرف عليها مثل الأنواع المختلفة من المكورات السبحية.
وأهميتها في تمييز نوع التحلل ألفا, بيتا, جاما
Chocolate agar:
يستخدم في مزارع الالتهاب الرئوي-السيلان-الأنفلونزا
وأهميتها أيضا في تمييز نمو بكتيريا نيسيريا, هيموفلص.
MacConkeys medium:
وهو للتعرف على البكتريا المخمرة لسكر اللاكتوز(لون احمر أو وردي) والتي لاتخمرة (نفس لون البيئة) وتنمو فيها عائلة البكتيريا المعوية
Cled agar:
للتفريق بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز والتي لاتخمرة وتحد من نمو بكتيريا البروتيص
طريقة أخذ العينة:
• أن تكون العينة من وسط البول وذلك حتى لا تحتوي على إفرازات من مجرى البول.
• أن يراعى التنبيه على المريض وخصوصا السيدات بغسل الأعضاء التناسلية الخارجية جيدا بالماء والصابون.
• يجب أن تفحص العينة خلال 3 ساعات من جمعها حيث أن تكاثر ونمو البكتيريا مما يودي إلى خلل في النتائج الكيميائية مثل نقص الجلوكوز وخلافه.
طريقة الزرع:
1) يتم تسجيل العينة ووضع البيانات في الملف الخاص بالزرع.
2) يتم تسجيل رقم العينة الخاص بالمختبر على الطبق.
3) يتم خلط العينة بهدوء لتوزيع أي راسب يكون في قاع العينة.
4) يتم الزرع بأخذ نقطه أو نقطتين من البول ويتم وضعها داخل طبق الزرع
5) يتم توزيع نقطة البول في الطبق باستخدام الإبرة حسب ميكانيكية معينه.
6) توضع الأطباق في الحاضنة عند درجة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
عينات البراز:
البكتيريا المحتمل وجودها في عينة البراز:
• السالمونيلا والشيجيلا
• الكوليرا
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• الإيشريشيا كولاي
• البروتيص
البيئات المستخدمة على وجه العموم فهي كما يلي:
S.S agar:
تستخدم للعينات البرازية وهي بيئة انتخابية حيث أن هذه البيئة تثبط نمو البكتيريا الموجبة للجرام وكذلك تحتوي على مثبطات نمو البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز.
فبنسبة للسالونيلا في XLD فلونها زهري والمركز توجد نقطة سوداء
أما في الشيجيلا فلونها زهري وبدون مركز اسود اللون السائد زهري
EMB:
بيئة تفريقية لعزل البكتيريا المعوية السالبة للجرام مثل: سالمونيلا, بروتيص, شيجيلا حيث تحتوي هذه البيئة على دليلين هما Eosine وMethylene blue الذين يفرقان بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة
DCA:
تحوي سكر اللاكتوز لذلك تفرق بين المخمرة وغير المخمرة لونها احمر فاتح يقترب من البني في حالة التخمر يتحول لونها إلى الأحمر الباهت.
حيث السالمونيلا لا لون لها وفي المركز نقطة سوداء
أما الشيجيلا فهي بدون لون
S.B) Selenite broth):
وهي بيئة سائله غنية لنمو السالمونيلا بأنواعها
المســحـــاتSWABS:
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
Blood Agar*
*Sabouraud Agar
Macconkey Agar*
*Chocolate Agar
أما البكتيريا المتوقع نموها فهي كالتالي وذلك حسب المنطقة المعزولة منها:
1-Beta.Hameolytic Streptococci.
2-Corynebacterium Diphtheriae.
3-Bordetella Pertussis.
4-Meningococci.
5-Staph Aureus.
6-Haemophills Influenzae.
7-Candida albicans.
أنواع المسحات:
1) مسحة من الزور أو الحلق في حالة الدفتيريا – التهاب الزور تزرع على B.A لاحتمال وجود المكورات السبحية المذيبة للدم أو العنقودية الذهبي تزرع على MAC عينات سلبية للجرام
2) مسحة من الجروح والدمامل والناسور
3) مسحة من الشرج في الأطفال في حالة الدوسنتريا
4) مسحة من الشرج في حالات الوفاة كما في الكوليرا
5) مسحة من التقيحات التي بالأذن، الأنف، العيون
تزرع على BA لا هوائي وهوائي وأيضا MAC
6) مسحة من الرحم كما في حالة السيلان- حمى النفاس
تزرع على BA+CO2 لاحتمال وجود مكورات سبحية مذيبة للدم
تزرع على MAC لاحتمال وجود العصيات سلبية جرام (بكتيريا القولون)
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
نستعمل Blood Agar و Macconkey Agar فقط
أما في حالة مسحة من الرحم أو العين فنستعمل Blood Agar و Chocolate Agar
التعرف على البكتيريا:
الفحص الميكروسكوبي عن طريق صبغ العينة:
أهمية الصبغة:
1. رؤية البكتيريا والتعرف عليها.
2. بعض أنواع الصبغات تستخدم في التفرقة بين أنواع البكتيريا مثل صبغة جرام التي تفرق بين الإيجابية والسلبية وصبغة زيل نلسن تصبغ البكتيريا المقاومة للأحماض.
أنواع الصبغات:
صبغات بسيطة:
• methylene blue stain
• صبغة كاربول فوكسين
صبغات مركبة:وهي الصبغات التي تستخدم فيها أكثر من صبغة أولية
• صبغة جرام:
وهي تتكون من صبغة الميثي
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• المكورات السبحية البراز يه
• عصيات الحميات المعوية (التيفود)
• عصيات القولون E.coli ,Strept. faecalis
• عصيات البروتيص
• السيلان
• السل
البيئات المستخدمة في عينات البول:
Blood agar:
بعض أنواع البيئات لا تنمو ألا بوجود الدم مثل:
الالتهاب السحائي الوبائي - الالتهاب الرئوي.
بعض أنواع البكتيريا تفرز خمائر تذيب كرات الدم الحمراء فيمكن التعرف عليها مثل الأنواع المختلفة من المكورات السبحية.
وأهميتها في تمييز نوع التحلل ألفا, بيتا, جاما
Chocolate agar:
يستخدم في مزارع الالتهاب الرئوي-السيلان-الأنفلونزا
وأهميتها أيضا في تمييز نمو بكتيريا نيسيريا, هيموفلص.
MacConkeys medium:
وهو للتعرف على البكتريا المخمرة لسكر اللاكتوز(لون احمر أو وردي) والتي لاتخمرة (نفس لون البيئة) وتنمو فيها عائلة البكتيريا المعوية
Cled agar:
للتفريق بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز والتي لاتخمرة وتحد من نمو بكتيريا البروتيص
طريقة أخذ العينة:
• أن تكون العينة من وسط البول وذلك حتى لا تحتوي على إفرازات من مجرى البول.
• أن يراعى التنبيه على المريض وخصوصا السيدات بغسل الأعضاء التناسلية الخارجية جيدا بالماء والصابون.
• يجب أن تفحص العينة خلال 3 ساعات من جمعها حيث أن تكاثر ونمو البكتيريا مما يودي إلى خلل في النتائج الكيميائية مثل نقص الجلوكوز وخلافه.
طريقة الزرع:
1) يتم تسجيل العينة ووضع البيانات في الملف الخاص بالزرع.
2) يتم تسجيل رقم العينة الخاص بالمختبر على الطبق.
3) يتم خلط العينة بهدوء لتوزيع أي راسب يكون في قاع العينة.
4) يتم الزرع بأخذ نقطه أو نقطتين من البول ويتم وضعها داخل طبق الزرع
5) يتم توزيع نقطة البول في الطبق باستخدام الإبرة حسب ميكانيكية معينه.
6) توضع الأطباق في الحاضنة عند درجة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
عينات البراز:
البكتيريا المحتمل وجودها في عينة البراز:
• السالمونيلا والشيجيلا
• الكوليرا
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• الإيشريشيا كولاي
• البروتيص
البيئات المستخدمة على وجه العموم فهي كما يلي:
S.S agar:
تستخدم للعينات البرازية وهي بيئة انتخابية حيث أن هذه البيئة تثبط نمو البكتيريا الموجبة للجرام وكذلك تحتوي على مثبطات نمو البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز.
فبنسبة للسالونيلا في XLD فلونها زهري والمركز توجد نقطة سوداء
أما في الشيجيلا فلونها زهري وبدون مركز اسود اللون السائد زهري
EMB:
بيئة تفريقية لعزل البكتيريا المعوية السالبة للجرام مثل: سالمونيلا, بروتيص, شيجيلا حيث تحتوي هذه البيئة على دليلين هما Eosine وMethylene blue الذين يفرقان بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة
DCA:
تحوي سكر اللاكتوز لذلك تفرق بين المخمرة وغير المخمرة لونها احمر فاتح يقترب من البني في حالة التخمر يتحول لونها إلى الأحمر الباهت.
حيث السالمونيلا لا لون لها وفي المركز نقطة سوداء
أما الشيجيلا فهي بدون لون
S.B) Selenite broth):
وهي بيئة سائله غنية لنمو السالمونيلا بأنواعها
المســحـــاتSWABS:
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
Blood Agar*
*Sabouraud Agar
Macconkey Agar*
*Chocolate Agar
أما البكتيريا المتوقع نموها فهي كالتالي وذلك حسب المنطقة المعزولة منها:
1-Beta.Hameolytic Streptococci.
2-Corynebacterium Diphtheriae.
3-Bordetella Pertussis.
4-Meningococci.
5-Staph Aureus.
6-Haemophills Influenzae.
7-Candida albicans.
أنواع المسحات:
1) مسحة من الزور أو الحلق في حالة الدفتيريا – التهاب الزور تزرع على B.A لاحتمال وجود المكورات السبحية المذيبة للدم أو العنقودية الذهبي تزرع على MAC عينات سلبية للجرام
2) مسحة من الجروح والدمامل والناسور
3) مسحة من الشرج في الأطفال في حالة الدوسنتريا
4) مسحة من الشرج في حالات الوفاة كما في الكوليرا
5) مسحة من التقيحات التي بالأذن، الأنف، العيون
تزرع على BA لا هوائي وهوائي وأيضا MAC
6) مسحة من الرحم كما في حالة السيلان- حمى النفاس
تزرع على BA+CO2 لاحتمال وجود مكورات سبحية مذيبة للدم
تزرع على MAC لاحتمال وجود العصيات سلبية جرام (بكتيريا القولون)
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
نستعمل Blood Agar و Macconkey Agar فقط
أما في حالة مسحة من الرحم أو العين فنستعمل Blood Agar و Chocolate Agar
التعرف على البكتيريا:
الفحص الميكروسكوبي عن طريق صبغ العينة:
أهمية الصبغة:
1. رؤية البكتيريا والتعرف عليها.
2. بعض أنواع الصبغات تستخدم في التفرقة بين أنواع البكتيريا مثل صبغة جرام التي تفرق بين الإيجابية والسلبية وصبغة زيل نلسن تصبغ البكتيريا المقاومة للأحماض.
أنواع الصبغات:
صبغات بسيطة:
• methylene blue stain
• صبغة كاربول فوكسين
صبغات مركبة:وهي الصبغات التي تستخدم فيها أكثر من صبغة أولية
• صبغة جرام:
وهي تتكون من صبغة الميثي
علم التحليلات المرضية
Photo
Klebsiella pneumoniae
#الكليبسلا_الرئوية
🔶Picture 1,2 Non-hemolytic, mucoid colonies of Klebsiella pneumoniae on #blood agar.
تكون المستعمرات غير محللة للدم على وسط اكار الدم ،مخاطية بسببluxuriantpolysaccharide capsule
🔶Picture 3 Klebsiella pneumoniae on #MacConkey agar.
المستعمرات ايضا مخاطية ذات لون وردي بسبب تحلل اللاكتوز (سكر اللاكتوز احد مكونات وسط الماكونكي) Lactose-positive mucoid colonies forms pink colored colonies in MacConkey Agar. s.
🔶Picture 4 Klebsiella pneumoniae micrograph. Gram-stain. Microscopic appearance: shorter Gram-negative rods.
الكلبسلا الرئوية توجد بشكل نورمال فلورا في الامعاء وتأتي ثانية بعد E.coli كأحد البكتريا المسببة لالتهاب المجاري البولية في كبار السن كما انها ايضا ممرض انتهازي للمرضى مع امراض الرئة المزمن chronic pulmonary disease ، امراض الامعاء، مرض ضمور الطبقة المخاطية للأنف nasal mucosa atrophy، و الورم الانفي لصلب rhinoscleroma
🔶Klebsiella pneumoniae basic characteristics:
GRAM-NEGATIVE RODS
ENCAPSULATED
NON-MOTILE
NON-SPORE-FORMING
CATALASE: POSITIVE
OXIDASE: NEGATIVE
FACULTATIVELY ANAEROBIC
#علم_التحليلات_المرضية
Telegram.me/alshaeralshabi_iq
Telegram.me/analysis_96
#الكليبسلا_الرئوية
🔶Picture 1,2 Non-hemolytic, mucoid colonies of Klebsiella pneumoniae on #blood agar.
تكون المستعمرات غير محللة للدم على وسط اكار الدم ،مخاطية بسببluxuriantpolysaccharide capsule
🔶Picture 3 Klebsiella pneumoniae on #MacConkey agar.
المستعمرات ايضا مخاطية ذات لون وردي بسبب تحلل اللاكتوز (سكر اللاكتوز احد مكونات وسط الماكونكي) Lactose-positive mucoid colonies forms pink colored colonies in MacConkey Agar. s.
🔶Picture 4 Klebsiella pneumoniae micrograph. Gram-stain. Microscopic appearance: shorter Gram-negative rods.
الكلبسلا الرئوية توجد بشكل نورمال فلورا في الامعاء وتأتي ثانية بعد E.coli كأحد البكتريا المسببة لالتهاب المجاري البولية في كبار السن كما انها ايضا ممرض انتهازي للمرضى مع امراض الرئة المزمن chronic pulmonary disease ، امراض الامعاء، مرض ضمور الطبقة المخاطية للأنف nasal mucosa atrophy، و الورم الانفي لصلب rhinoscleroma
🔶Klebsiella pneumoniae basic characteristics:
GRAM-NEGATIVE RODS
ENCAPSULATED
NON-MOTILE
NON-SPORE-FORMING
CATALASE: POSITIVE
OXIDASE: NEGATIVE
FACULTATIVELY ANAEROBIC
#علم_التحليلات_المرضية
Telegram.me/alshaeralshabi_iq
Telegram.me/analysis_96
Telegram
سوالف ليل ❤❤
🔹♯ ✭ سوالف ليل
↓
» 🎤 ۫ ○.۟
لـﯛ ﺹـﯠرﭤج لـۅ صـﯛتج يـﻧﯛﻣنـﯤ
لـﯛ ۑـا اللهۂْ لـﯞ طيـفـﭾَْ ۑـڪومنـﯤ ្•
♛ʳᵐᵃᶻᶤᵃᵗ 🐾🌿and :- ⤴️ آشــعآر
-
┇🌟القناهہ خاليهہ من اﻟتبادل🌟 ┇
-
@ska96 ⬅ منشئ 🌞🌿 #:
↓
» 🎤 ۫ ○.۟
لـﯛ ﺹـﯠرﭤج لـۅ صـﯛتج يـﻧﯛﻣنـﯤ
لـﯛ ۑـا اللهۂْ لـﯞ طيـفـﭾَْ ۑـڪومنـﯤ ្•
♛ʳᵐᵃᶻᶤᵃᵗ 🐾🌿and :- ⤴️ آشــعآر
-
┇🌟القناهہ خاليهہ من اﻟتبادل🌟 ┇
-
@ska96 ⬅ منشئ 🌞🌿 #:
عينات البراز stool specimen :
========================
تكون القناة الهضمية عند المواليد معقمة وتبدأ الجراثيم بالدخول إليها عبر الطعام والشراب فيتكون مجتمعاً ميكروبياً يتعايش مع الإنسان داخل جهازه الهضمي وهو ما يعرف normal flora ويزداد عدد هذه الكائنات كلما اتجهنا إلى أسفل الجهاز الهضمي بالرغم من وجود الحمض المعوي ووجود إنزيم الببسين الهاضم للمكونات البروتينية ولكن يزداد هذا العدد في الأمعاء الدقيقة والغليظة أكثر لوجود المواد الغذائية داخلها لمدة طويلة مما يعطي فرصة لهذه الكائنات بالزيادة العددية لها .
وتحدث التهابات القناة الهضمية نتيجة الإصابة بعدة أنواع من المسببات كالبكتيريا والطفيليات والفيروسات فيحدث ألم أو غثيان أو قيئ أو إسهال وقد يصاحب ذلك الحمى كعرض من أعراض التهاب القناة الهضمية .
الجراثيم الممرضة التي قد توجد في الجهاز الهضمي :
----------------------------------
1- الفيروسات مثل Rotavirus و Norwalk agentvirus و Adenovirus .
2- الطفيليات Parasite مثل :
Entamoeba histolytica و Giardia lamblia .
3- البكتيريا ومنها حسب الجدول التالي :
الأنواع الأكثر شيوعاً -----الأنواع الأقل شيوعاً
Salmonella ----- Staphylococcus aureus
Shigella ----- E.coli
Vibrio spp. ----- Clostridium perfringens
Yersinia enterocolitica ----- Aeromonas
Cambylobacter jejuni------ Bacillus cereus
Mycobacterium tuberculosis
وتستخدم عدة عينات للكشف عن مسببات الإلتهاب مثل :
1- مسحة من المستقيم rectal swab أو من فتحة الشرج .
2- خزعة من الأمعاء Gastric biopsy .
3- الدم للزراعة أو للكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم .
4- البراز stool وهي الأكثر شيوعاً .
----------------------''
مراحل فحص عينة البراز :
1- الفحص الظاهري macroscopic examination :
يلاحظ قوام ولون العينة ووجود المخاط والدم وأطوار الديدان وذلك بالعين المجردة .
2- الفحص المجهري microscopic examination :
يعمل شريحة من عينة البراز بطريقة التحضير الرطب إذا كان المسبب من الفطريات مثل Candida spp. أو الطفيليات فيلاحظ أطوارها مثل الديدان والأميبا وغيرها .
كما ويستخدم الميكروسكوب لملاحظة خلايا الدم الحمراء والبيضاء دلالة على وجود الألتهاب.
3- زراعة عينة البراز :
تستخدم هذه الخطوة لعزل مسبب المرض خاصة البكتيريا ولابد من ملاحظة ما يلي :
1- لاتزرع عينة البراز في الظروف اللاهوائية لأن معظم الساكن الطبيعي من البكتيريا في الأمعاء لاهوائي ومسببات المرض هي من النوع الهوائي الإختياري .
2- استخدام الأوساط الإختيارية والتفريقية لتثبيط الساكن الطبيعي وتنمية البكتيريا المسببة للمرض فقط . ويجب أن تكون هذه الأوساط الغذائية تغطي جميع أنواع البكتيريا الشائعة المسببة للمرض..
-------
3- يمكن استخدام صبغة جرام لمعرفة كون المرض ناتجاً عن البكتيريا نفسها أم عن السموم التي تفرزها ولاتستخدم هذه الصبغة كمرحلة تشخيصية لكثرة الأنواع البكتيرية المسببة لالتهابات الأمعاء .
يفضل عزل الأنواع المختلفة على بيئات خاصة كما سيرد ( وهي الطريقة الدارجة في المختبرات ) :
أ- عزل بكتيريا Salmonella and Shigella :
ويتم عزل هذين النوعين من البكتيريا على عدة أوساط وهي :
1- تستخدم أوساط مفرقة واختيارية جزئية مثل Macconkey agar أو EMB حيث يعتبر هذين الوسطين من الأوساط المفرقة التي تميز بين البكتيريا الموجبة والسالب لصبغة جرام حيث ينمو عليها البكتيريا السالبة لجرام فقط كما أنها تميز البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة لاحتواء هذين الوسطين على اللاكتوز في تركيبهما . فالبكتيريا المخمرة للاكتوز تظهر كمستعمرات وردية وغير المخمرة تظهر مستعمراتها شفافة غير ملونة وتعتبر كل من Salmonella and Shigella غير مخمرة للاكتوز لذا تكون مستعمراتها شفافة غير ملونة على هذين الوسطين .
2- تستخدم البيئات التالية كونها مثبطة للساكن الطبيعي في الأمعاء وتنمي Salmonella and Shigella فقط وهي :
تزرع العينة على بيئة Salmonella Shigella agar و Desoxy cohlate citrate agar و Kauffmann-brilliant green agar تمنع الأخيرة نمو كثير من البكتيريا المعوية وخاصة E.coli and Proteus وتسمح بنمو السالمونيلا والشايجيلا . وتعمل هذه البيئات كمفرق للبكتيريا المخمرة للسكر والتي تظهر كمستعمرات وردية اللون وبما أن السالمونيلا والشايجيلا غير مخمرة للسكر فتظهر كمستعمرات عديمة اللون كما سبق ذكره .
بيئة Leifson selenite broth أو Mueller tetrathionate broth :
تحتوي على مواد كيميائية مثل Citrate , desoxycholate , tetrathionate تمنع نمو البكتيريا الموجبة لجرام وتنشط نمو السالمونيلا والشايجيلا .
** بيئة Hektoen enteric agar :
يعتبر هذا الوسط اختياري لاحتوائه على تركيز عال من أملاح الصفراء Bile salt كما يعتبر وسطاً مفرقاً نظراً لاحتوائه على الكربوهيدرات فيفرق بين البكتيريا ال
========================
تكون القناة الهضمية عند المواليد معقمة وتبدأ الجراثيم بالدخول إليها عبر الطعام والشراب فيتكون مجتمعاً ميكروبياً يتعايش مع الإنسان داخل جهازه الهضمي وهو ما يعرف normal flora ويزداد عدد هذه الكائنات كلما اتجهنا إلى أسفل الجهاز الهضمي بالرغم من وجود الحمض المعوي ووجود إنزيم الببسين الهاضم للمكونات البروتينية ولكن يزداد هذا العدد في الأمعاء الدقيقة والغليظة أكثر لوجود المواد الغذائية داخلها لمدة طويلة مما يعطي فرصة لهذه الكائنات بالزيادة العددية لها .
وتحدث التهابات القناة الهضمية نتيجة الإصابة بعدة أنواع من المسببات كالبكتيريا والطفيليات والفيروسات فيحدث ألم أو غثيان أو قيئ أو إسهال وقد يصاحب ذلك الحمى كعرض من أعراض التهاب القناة الهضمية .
الجراثيم الممرضة التي قد توجد في الجهاز الهضمي :
----------------------------------
1- الفيروسات مثل Rotavirus و Norwalk agentvirus و Adenovirus .
2- الطفيليات Parasite مثل :
Entamoeba histolytica و Giardia lamblia .
3- البكتيريا ومنها حسب الجدول التالي :
الأنواع الأكثر شيوعاً -----الأنواع الأقل شيوعاً
Salmonella ----- Staphylococcus aureus
Shigella ----- E.coli
Vibrio spp. ----- Clostridium perfringens
Yersinia enterocolitica ----- Aeromonas
Cambylobacter jejuni------ Bacillus cereus
Mycobacterium tuberculosis
وتستخدم عدة عينات للكشف عن مسببات الإلتهاب مثل :
1- مسحة من المستقيم rectal swab أو من فتحة الشرج .
2- خزعة من الأمعاء Gastric biopsy .
3- الدم للزراعة أو للكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم .
4- البراز stool وهي الأكثر شيوعاً .
----------------------''
مراحل فحص عينة البراز :
1- الفحص الظاهري macroscopic examination :
يلاحظ قوام ولون العينة ووجود المخاط والدم وأطوار الديدان وذلك بالعين المجردة .
2- الفحص المجهري microscopic examination :
يعمل شريحة من عينة البراز بطريقة التحضير الرطب إذا كان المسبب من الفطريات مثل Candida spp. أو الطفيليات فيلاحظ أطوارها مثل الديدان والأميبا وغيرها .
كما ويستخدم الميكروسكوب لملاحظة خلايا الدم الحمراء والبيضاء دلالة على وجود الألتهاب.
3- زراعة عينة البراز :
تستخدم هذه الخطوة لعزل مسبب المرض خاصة البكتيريا ولابد من ملاحظة ما يلي :
1- لاتزرع عينة البراز في الظروف اللاهوائية لأن معظم الساكن الطبيعي من البكتيريا في الأمعاء لاهوائي ومسببات المرض هي من النوع الهوائي الإختياري .
2- استخدام الأوساط الإختيارية والتفريقية لتثبيط الساكن الطبيعي وتنمية البكتيريا المسببة للمرض فقط . ويجب أن تكون هذه الأوساط الغذائية تغطي جميع أنواع البكتيريا الشائعة المسببة للمرض..
-------
3- يمكن استخدام صبغة جرام لمعرفة كون المرض ناتجاً عن البكتيريا نفسها أم عن السموم التي تفرزها ولاتستخدم هذه الصبغة كمرحلة تشخيصية لكثرة الأنواع البكتيرية المسببة لالتهابات الأمعاء .
يفضل عزل الأنواع المختلفة على بيئات خاصة كما سيرد ( وهي الطريقة الدارجة في المختبرات ) :
أ- عزل بكتيريا Salmonella and Shigella :
ويتم عزل هذين النوعين من البكتيريا على عدة أوساط وهي :
1- تستخدم أوساط مفرقة واختيارية جزئية مثل Macconkey agar أو EMB حيث يعتبر هذين الوسطين من الأوساط المفرقة التي تميز بين البكتيريا الموجبة والسالب لصبغة جرام حيث ينمو عليها البكتيريا السالبة لجرام فقط كما أنها تميز البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة لاحتواء هذين الوسطين على اللاكتوز في تركيبهما . فالبكتيريا المخمرة للاكتوز تظهر كمستعمرات وردية وغير المخمرة تظهر مستعمراتها شفافة غير ملونة وتعتبر كل من Salmonella and Shigella غير مخمرة للاكتوز لذا تكون مستعمراتها شفافة غير ملونة على هذين الوسطين .
2- تستخدم البيئات التالية كونها مثبطة للساكن الطبيعي في الأمعاء وتنمي Salmonella and Shigella فقط وهي :
تزرع العينة على بيئة Salmonella Shigella agar و Desoxy cohlate citrate agar و Kauffmann-brilliant green agar تمنع الأخيرة نمو كثير من البكتيريا المعوية وخاصة E.coli and Proteus وتسمح بنمو السالمونيلا والشايجيلا . وتعمل هذه البيئات كمفرق للبكتيريا المخمرة للسكر والتي تظهر كمستعمرات وردية اللون وبما أن السالمونيلا والشايجيلا غير مخمرة للسكر فتظهر كمستعمرات عديمة اللون كما سبق ذكره .
بيئة Leifson selenite broth أو Mueller tetrathionate broth :
تحتوي على مواد كيميائية مثل Citrate , desoxycholate , tetrathionate تمنع نمو البكتيريا الموجبة لجرام وتنشط نمو السالمونيلا والشايجيلا .
** بيئة Hektoen enteric agar :
يعتبر هذا الوسط اختياري لاحتوائه على تركيز عال من أملاح الصفراء Bile salt كما يعتبر وسطاً مفرقاً نظراً لاحتوائه على الكربوهيدرات فيفرق بين البكتيريا ال
مخمرة للسكر ومنتجة لغاز H2S عن غيرها من الأنواع .
يكون لون هذا الوسط في العادة أخضراً وتظهر المستعمرات المخمرة للسكر باللون الأصفر .
وبما أن Salmonella and Shigella غير مخمرة للسكريات لذا تظهر مستعمراتها شفافة عديمة اللون . ولكن تظهر مستعمرات Salmonella فقط على هذه البيئة في منتصفها نقطة سوداء بسبب انتاج غاز H2Sالذي يترسب باللون الأسود على المستعمرة وهذه الخاصية تميز بكتيريا Salmonell عن Shigella .
-------------------
ملاحظة : تشترك صفة إنتاج غاز H2S مع بكتيريا Salmonell كل من بكتيريا Proteus , Providencia , Morganell .
** بيئة Xylose lysin deoxy cholate ( XLD ) :
هذه البيئة ذات لون أحمر يتحول للون الأصفر عند نمو بكتيريا مخمرة للسكر عليه ويعتبر وسط ملائم لعزل بكتيريا Sigella .
3- تستخدم بيئات خاصة عالية الإختيارية ومفرقة بشكل خاص لبكتيريا Salmonella and Shigella مثل بيئة Bismuth sulfite agar الخاصة بتنمية بكتيريا Salmonella فقط لاحتوائه على تركيز عالي من صبغة Brilliant green وأملاح Bismuth فيكون لونه رمادياً لامعاً . وعند نمو بكتيريا Salmonella typhi تظهر مستعمراتها بلون أسود محاطة بمنطقة خضراء لامعة وبقية الأنواع من هذه البكتيريا ( Salmonella ) فتظهر إما شفافة أو خضراء أو سوداء .
4- تستخدم بيئات اختيارية إغنائية وهذه الأوساط سائلة تستخدم للقضاء على كافة أنواع البكتيريا الموجودة في عينة البراز وتنشط نمو بكتيريا Salmonella و Shigella وذلك بحقن كمية بسيطة من البراز غي البيئة ثم تحضينها لمدة 10 – 18 ساعة ثم يتم عمل زراعة أخرى sub culture على أوساط مفرقة للتمييز بين بكتيريا Salmonella و Shigella .
ومن هذه الأوساط Selenite broth , Tetrathionate broth , GN broth .
====================
خطوات عزل وزراعة البكتيريا من عينة البراز :
1- خذ كمية من البراز بواسطة ماسحة قطنية معقمة .
2- ازرع العينة بالتخطيط بواسطة الماسحة القطنية على وسطين من الأوساط التالية مع تفضيل أن يكون أحدهما خاص ببكتيريا Salmonella , Shigella .
مثل SS agar , Hekton enteric agar , Brilliant green agar , Desoxy cholate citrate agar .
ويفضل زرع عينة البراز في وسط إغنائي Selective enrichment media مثل Selenite broth أو GN broth وبعد التحضين 18 ساعة تقريباً يعمل تخطيط على أحدى البيئات السالفة الذكر بواسطة إبرة التلقيح .
3- تزرع العينة من الوسط الإغنائي أيضاً على بيئة EMB أو Macconkey agar أو Desoxycholate agar .
4- تزرع العينة أيضاً على بيئة Bismuth sulfite agar لعزل بكتيريا التيفوئيد وتشخيصها إن وجدت .
5- يتم تحضين الأوساط المزروعة لمدة 24 ساعة عند 35 ْم وقد يلزم بيئة Bismuth فترة أطول .
النتائج : تدرس الأطباق المزروعة تحت إضاءة جيدة للبحث عن النتائج التالية :
تظهر مستعمرات Salmonella , Shigella شفافة على الأوساط السابقة وتظهر مستعمرات Salmonella typhi سوداء اللون على بيئة Bismuth sulfate agar .
===================
عزل بكتيريا Yersinia enterocolitica :
يستخدم وسط Cefsulodin irgasan novobiocin ( CIN ) agar كوسط اختياري خاص لعزل بكتيريا Yersinia من عينة البراز وذلك لاحتوائه على مواد غذائية خاصة لهذه البكتيريا بالإضافة للمضادات الحيوية .
يتم زراعة العينة على الوسط السابق ثم يحضن لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة الغرفة . وبعد فترة التحضين تظهر مستعمرات Yersinis بلون زهري لامع ذات مركز أحمر .
وتظهر بعض أنواع البكتيريا هذه الصفة مثل Citrobacter , Aeromonas وللتمييز بينها تزرع على وسط Blood agar ثم نقوم بعمل الإختبارات البيوكيميائية . حيث أن Yersinia تعطي نتيجة سالبة لفحص الأكسيديز وبكتيريا Aeromonas تعطي نتيجة موجبة .
يمكن عزل بكتيريا Yersinis enterocolitica على وسط Blood agar , Macconkey agar حيث تنمو هذه البكتيريا على بيئة آجار الدم خلال 24 ساعة مكونة مستعمرات صغيرة سريعة النمو ومتحركة عند درجة حرارة الغرفة وهي غير مخمرة للاكتوز وتعطي نتيجة سالبة لصبغة جرام واختبار الأكسيديز وتعطي نتيجة موجبة لفحص Urease .
=================
عزل بكتيريا Vibrio cholera :
تنمو هذه البكتيريا المسببة لمرض الكوليرا على عدة أوساط ولكن بيئة Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar ( TCBS ) من أفضل الأوساط المميزة لهذه البكتيريا حيث تظهر بكتيريا Vibrio cholera كمستعمرات صفراء اللون بينماالنوع
Vibrio parahaemolyticus يعطي مستعمرات خضراء اللون على هذا الوسط .
=================
عزل بكتيريا Campylobacter :
تستخدم أوساط اختيارية خاصة بتنمية هذه البكتيريا مثل Campy-blood agar
و Skirrows media حيث تزرع العينة على الوسط ثم تحضن عند درجة 42 ْم لمدة 48 ساعة بوجود 10 % ثاني أكسيد الكربون .
ويعتبر وسط Campy-blood agar أفضل في تنمية بكتيريا Compylobacter jejuni بينما الآخر قد يستعمل لتنمية بقية أنواع هذه
يكون لون هذا الوسط في العادة أخضراً وتظهر المستعمرات المخمرة للسكر باللون الأصفر .
وبما أن Salmonella and Shigella غير مخمرة للسكريات لذا تظهر مستعمراتها شفافة عديمة اللون . ولكن تظهر مستعمرات Salmonella فقط على هذه البيئة في منتصفها نقطة سوداء بسبب انتاج غاز H2Sالذي يترسب باللون الأسود على المستعمرة وهذه الخاصية تميز بكتيريا Salmonell عن Shigella .
-------------------
ملاحظة : تشترك صفة إنتاج غاز H2S مع بكتيريا Salmonell كل من بكتيريا Proteus , Providencia , Morganell .
** بيئة Xylose lysin deoxy cholate ( XLD ) :
هذه البيئة ذات لون أحمر يتحول للون الأصفر عند نمو بكتيريا مخمرة للسكر عليه ويعتبر وسط ملائم لعزل بكتيريا Sigella .
3- تستخدم بيئات خاصة عالية الإختيارية ومفرقة بشكل خاص لبكتيريا Salmonella and Shigella مثل بيئة Bismuth sulfite agar الخاصة بتنمية بكتيريا Salmonella فقط لاحتوائه على تركيز عالي من صبغة Brilliant green وأملاح Bismuth فيكون لونه رمادياً لامعاً . وعند نمو بكتيريا Salmonella typhi تظهر مستعمراتها بلون أسود محاطة بمنطقة خضراء لامعة وبقية الأنواع من هذه البكتيريا ( Salmonella ) فتظهر إما شفافة أو خضراء أو سوداء .
4- تستخدم بيئات اختيارية إغنائية وهذه الأوساط سائلة تستخدم للقضاء على كافة أنواع البكتيريا الموجودة في عينة البراز وتنشط نمو بكتيريا Salmonella و Shigella وذلك بحقن كمية بسيطة من البراز غي البيئة ثم تحضينها لمدة 10 – 18 ساعة ثم يتم عمل زراعة أخرى sub culture على أوساط مفرقة للتمييز بين بكتيريا Salmonella و Shigella .
ومن هذه الأوساط Selenite broth , Tetrathionate broth , GN broth .
====================
خطوات عزل وزراعة البكتيريا من عينة البراز :
1- خذ كمية من البراز بواسطة ماسحة قطنية معقمة .
2- ازرع العينة بالتخطيط بواسطة الماسحة القطنية على وسطين من الأوساط التالية مع تفضيل أن يكون أحدهما خاص ببكتيريا Salmonella , Shigella .
مثل SS agar , Hekton enteric agar , Brilliant green agar , Desoxy cholate citrate agar .
ويفضل زرع عينة البراز في وسط إغنائي Selective enrichment media مثل Selenite broth أو GN broth وبعد التحضين 18 ساعة تقريباً يعمل تخطيط على أحدى البيئات السالفة الذكر بواسطة إبرة التلقيح .
3- تزرع العينة من الوسط الإغنائي أيضاً على بيئة EMB أو Macconkey agar أو Desoxycholate agar .
4- تزرع العينة أيضاً على بيئة Bismuth sulfite agar لعزل بكتيريا التيفوئيد وتشخيصها إن وجدت .
5- يتم تحضين الأوساط المزروعة لمدة 24 ساعة عند 35 ْم وقد يلزم بيئة Bismuth فترة أطول .
النتائج : تدرس الأطباق المزروعة تحت إضاءة جيدة للبحث عن النتائج التالية :
تظهر مستعمرات Salmonella , Shigella شفافة على الأوساط السابقة وتظهر مستعمرات Salmonella typhi سوداء اللون على بيئة Bismuth sulfate agar .
===================
عزل بكتيريا Yersinia enterocolitica :
يستخدم وسط Cefsulodin irgasan novobiocin ( CIN ) agar كوسط اختياري خاص لعزل بكتيريا Yersinia من عينة البراز وذلك لاحتوائه على مواد غذائية خاصة لهذه البكتيريا بالإضافة للمضادات الحيوية .
يتم زراعة العينة على الوسط السابق ثم يحضن لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة الغرفة . وبعد فترة التحضين تظهر مستعمرات Yersinis بلون زهري لامع ذات مركز أحمر .
وتظهر بعض أنواع البكتيريا هذه الصفة مثل Citrobacter , Aeromonas وللتمييز بينها تزرع على وسط Blood agar ثم نقوم بعمل الإختبارات البيوكيميائية . حيث أن Yersinia تعطي نتيجة سالبة لفحص الأكسيديز وبكتيريا Aeromonas تعطي نتيجة موجبة .
يمكن عزل بكتيريا Yersinis enterocolitica على وسط Blood agar , Macconkey agar حيث تنمو هذه البكتيريا على بيئة آجار الدم خلال 24 ساعة مكونة مستعمرات صغيرة سريعة النمو ومتحركة عند درجة حرارة الغرفة وهي غير مخمرة للاكتوز وتعطي نتيجة سالبة لصبغة جرام واختبار الأكسيديز وتعطي نتيجة موجبة لفحص Urease .
=================
عزل بكتيريا Vibrio cholera :
تنمو هذه البكتيريا المسببة لمرض الكوليرا على عدة أوساط ولكن بيئة Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar ( TCBS ) من أفضل الأوساط المميزة لهذه البكتيريا حيث تظهر بكتيريا Vibrio cholera كمستعمرات صفراء اللون بينماالنوع
Vibrio parahaemolyticus يعطي مستعمرات خضراء اللون على هذا الوسط .
=================
عزل بكتيريا Campylobacter :
تستخدم أوساط اختيارية خاصة بتنمية هذه البكتيريا مثل Campy-blood agar
و Skirrows media حيث تزرع العينة على الوسط ثم تحضن عند درجة 42 ْم لمدة 48 ساعة بوجود 10 % ثاني أكسيد الكربون .
ويعتبر وسط Campy-blood agar أفضل في تنمية بكتيريا Compylobacter jejuni بينما الآخر قد يستعمل لتنمية بقية أنواع هذه
البكتيريا .
==============
عزل بكتيريا Helicobacter pylori :
تسبب هذه البكتيريا قرحة المعدة والإثنا عشر وتعزل بأخذ خزعة من مكان التقرح ثم إجراء أحد الفحوصات التالية عليها :
1- عمل مسحة من النسيج المأخوذ ( الخزعة ) وصبغها بصبغة جمسا Giemsa stane لمشاهدة البكتيريا التي تكون منحنية أو لولبية الشكل .
2- تزرع هذه البكتيريا على بيئة Campy-blood agar أو Skirrows media مضافاً لها المضادات الحيوية التالية Trimethoprim , Vancomycin .
ويمكن زراعة العينة على بيئة Chocolate agar مضافاً لها بعض المضادات الحيوية لقتل الكائنات الملوثة للعينة مثل Amphotericin , Nalidixc acid , Vancomycin . ثم تحضن الأوساط المزروعة عند درجة 37 ْم لمدة 3 - 6 أيام فتظهر مستعمرات لامعة ذات قطر يتراوح بين 1 – 2 ملم عند وجود هذه البكتيريا .
3- تنتج هذه البكتيريا إنزيم Urease بقوة لذلك يمكن وضع النسيج في بيئة سائلة Urease media المحتوية على اليوريا بحيث يؤدي إنتاج البكتيريا لإنزيم اليورييز إلى تغير لون الوسط خلال 15 – 30 دقيقة من وضع العينة .
==============
عزل بكتيريا E.coli :
تعتبر من الفلورا الطبيعية التي تعيش في أمعاء الإنسان إلا أن بعض أنواعها تسبب الإسهال لدى الأطفال حديثي الولادة بسبب إفراز السموم مثل النوع المصلي E.coli O157:H7 هو أكثرها شيوعاً .
ويتم زراعتها بأخذ مسحة شرجية أو عينة من البراز وزراعتها على بيئة Blood agar و أوساط اختيارية أخرى مثل Macconkey agar و EMB ثم تحضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وعند ظهور مستعمرات هذه البكتيريا يؤخذ جزء منها ويعرض لأجسام مضادة خاصة بكل نوع مصلي لوحده من أنواع E.coli على شريحة بحيث تعطي النتيجة الإيجابية تخثر للعينة Agglutination . كما يمكن زراعة العينة على بيئة Sorbitol macconkey agar حيث أن 95 % من أنواع بكتيريا E.coli قادرة على تخمير سكر السوربيتول بينما النوع المصلي E.coli O157:H7 يعطي نتيجة سلبية لهذا الفحص .
=================
عزل بكتيريا السل Mycobacterium tuberculosis :
في بعض حالات السل الرئوي وفي حال صعوبة أخذ عينة من البلغم للأشخاص المصابين بهذا المرض يمكن أخذ عينة من البراز لتشخيص مرض السل فيتم زراعة العينة على بيئة Lowenstein-jensen media .
=================
عزل البكتيريا العنقودية الممرضة :
نبحث في هذا العزل على البكتيريا العنقودية Staph. الموجبة لفحص Coagulase فيستخدم لذلك بيئة غنية بأملاح كلوريد الصوديوم مثل Staph. Medium -110 أو Mannitol salt agar .
=================
عزل الفطريات :
قد تتواجد أنواع من الفطريات في الأمعاء مثل Candida albicans بشكل يشبه خلايا الخميرة بشكل طبيعي ولكن عند ضعف مناعة الجسم قد يزداد عددها مما قد يسبب مرضاً . ومما هو جدير بالذكر أن وجود خلايا كالخميرة ليس ذو دلالة مرضية بينما وجودها ووجود خيوط فطرية في العينة يعطي دلالة على المرض .
ويمكن الكشف عنها بعمل تحضير رطب ومشاهدته بواسطة المجهر . كما ويمكن زراعة العينة على أوساط خاصة بالفطريات مثل SDA ( Sugar dextrose agar ) ثم تحضن عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وتظهر مستعمرات Candida بيضاء حليبية مشابهة لمستعمرات البكتيري.
================
#Admin : Saif kh
================
==============
عزل بكتيريا Helicobacter pylori :
تسبب هذه البكتيريا قرحة المعدة والإثنا عشر وتعزل بأخذ خزعة من مكان التقرح ثم إجراء أحد الفحوصات التالية عليها :
1- عمل مسحة من النسيج المأخوذ ( الخزعة ) وصبغها بصبغة جمسا Giemsa stane لمشاهدة البكتيريا التي تكون منحنية أو لولبية الشكل .
2- تزرع هذه البكتيريا على بيئة Campy-blood agar أو Skirrows media مضافاً لها المضادات الحيوية التالية Trimethoprim , Vancomycin .
ويمكن زراعة العينة على بيئة Chocolate agar مضافاً لها بعض المضادات الحيوية لقتل الكائنات الملوثة للعينة مثل Amphotericin , Nalidixc acid , Vancomycin . ثم تحضن الأوساط المزروعة عند درجة 37 ْم لمدة 3 - 6 أيام فتظهر مستعمرات لامعة ذات قطر يتراوح بين 1 – 2 ملم عند وجود هذه البكتيريا .
3- تنتج هذه البكتيريا إنزيم Urease بقوة لذلك يمكن وضع النسيج في بيئة سائلة Urease media المحتوية على اليوريا بحيث يؤدي إنتاج البكتيريا لإنزيم اليورييز إلى تغير لون الوسط خلال 15 – 30 دقيقة من وضع العينة .
==============
عزل بكتيريا E.coli :
تعتبر من الفلورا الطبيعية التي تعيش في أمعاء الإنسان إلا أن بعض أنواعها تسبب الإسهال لدى الأطفال حديثي الولادة بسبب إفراز السموم مثل النوع المصلي E.coli O157:H7 هو أكثرها شيوعاً .
ويتم زراعتها بأخذ مسحة شرجية أو عينة من البراز وزراعتها على بيئة Blood agar و أوساط اختيارية أخرى مثل Macconkey agar و EMB ثم تحضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وعند ظهور مستعمرات هذه البكتيريا يؤخذ جزء منها ويعرض لأجسام مضادة خاصة بكل نوع مصلي لوحده من أنواع E.coli على شريحة بحيث تعطي النتيجة الإيجابية تخثر للعينة Agglutination . كما يمكن زراعة العينة على بيئة Sorbitol macconkey agar حيث أن 95 % من أنواع بكتيريا E.coli قادرة على تخمير سكر السوربيتول بينما النوع المصلي E.coli O157:H7 يعطي نتيجة سلبية لهذا الفحص .
=================
عزل بكتيريا السل Mycobacterium tuberculosis :
في بعض حالات السل الرئوي وفي حال صعوبة أخذ عينة من البلغم للأشخاص المصابين بهذا المرض يمكن أخذ عينة من البراز لتشخيص مرض السل فيتم زراعة العينة على بيئة Lowenstein-jensen media .
=================
عزل البكتيريا العنقودية الممرضة :
نبحث في هذا العزل على البكتيريا العنقودية Staph. الموجبة لفحص Coagulase فيستخدم لذلك بيئة غنية بأملاح كلوريد الصوديوم مثل Staph. Medium -110 أو Mannitol salt agar .
=================
عزل الفطريات :
قد تتواجد أنواع من الفطريات في الأمعاء مثل Candida albicans بشكل يشبه خلايا الخميرة بشكل طبيعي ولكن عند ضعف مناعة الجسم قد يزداد عددها مما قد يسبب مرضاً . ومما هو جدير بالذكر أن وجود خلايا كالخميرة ليس ذو دلالة مرضية بينما وجودها ووجود خيوط فطرية في العينة يعطي دلالة على المرض .
ويمكن الكشف عنها بعمل تحضير رطب ومشاهدته بواسطة المجهر . كما ويمكن زراعة العينة على أوساط خاصة بالفطريات مثل SDA ( Sugar dextrose agar ) ثم تحضن عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وتظهر مستعمرات Candida بيضاء حليبية مشابهة لمستعمرات البكتيري.
================
#Admin : Saif kh
================
اجار الماكونكي (MacConkey Agar)
*******************
عبارة عن وسط زراعي صمم لنمو بكتيريا سلبية الغرام وصبغهم عن طريق تخمير الاكتوز.
ماكونكي اجار يحتوي على أَمْلاَحُ الصَّفْراء (لتثبيط بكتيريا موجبة الغرام ,ماعدا المكَوَّرَةٌ مِعَوِيَّة Enterococcus و بعض أنواع البكتيريا العنقودية كالعنقودية ذهبية.
البَنَفْسَجِيَّةُ المُتَبَلْوِرَة (وهو أيضا يقوم بتثبط بكتيريا موجبة الغرام)
الاحمر المحايد (وهو الذي يقوم بصبغ البكتيريا المخممرة للاكتوز)
لاكتوز وبيبتون
التركيب :
بيبتون - 17 g
بروتيوز بيبتون - 3 g
لاكتوز - 10 g
املاح الصفراء - 1.5 g
كلوريد الصوديوم - 5 g
الاحمر المحايد - 0.03 g
اجار - 13.5 g
ماء - يضاف ليصل المجموع 1 لتر ,ويعدل اس هيدروجيني إلى 7
الاستخدامات:
يعمل على محدد للاس الهيدروجيني. الاجار يفرق بين بكتيريا سالبة الغرام التي تستطيع ان تخمر الاكتوز (Lac+) والتي لاتخمر الاكتوز (Lac-).
هذا الوسط يعرف باسم الوسط المحدد
1) لاكتوز موجب:
عبر استخدام الاكتوز المتوفر في الوسط. امثلة : إشريكية قولونية وكليبسيلا Klebsiella وانتيروبكتر Enterobacter وتكون تفرز حمض الذي يخفض الاس الهيدروجيني وبالتالي المستعمرات تأخذ اللون الاحمر. الأملاح الصفراء تترسب بجانب المستعرات.
2) لاكتوز سالب:
البكتيريا الغير مخمرة للاكتوز كالزائفة الزنجارية وشيقيلا Shigellaوسالمونيلا Salmonella وبروتيس Proteus. هذه البكتيريا لاتستطيع استخدام الاكتوز وتستخدم البيبتون كبديل.
3) تخمير للاكتوز متأخر
بعض الكائنات تخمر الاكتوز بشكل ضعيف أو متأخر ومنها سيريشيا Serratia وسيتروبكتر Citrobacter.
منقول
*******************
عبارة عن وسط زراعي صمم لنمو بكتيريا سلبية الغرام وصبغهم عن طريق تخمير الاكتوز.
ماكونكي اجار يحتوي على أَمْلاَحُ الصَّفْراء (لتثبيط بكتيريا موجبة الغرام ,ماعدا المكَوَّرَةٌ مِعَوِيَّة Enterococcus و بعض أنواع البكتيريا العنقودية كالعنقودية ذهبية.
البَنَفْسَجِيَّةُ المُتَبَلْوِرَة (وهو أيضا يقوم بتثبط بكتيريا موجبة الغرام)
الاحمر المحايد (وهو الذي يقوم بصبغ البكتيريا المخممرة للاكتوز)
لاكتوز وبيبتون
التركيب :
بيبتون - 17 g
بروتيوز بيبتون - 3 g
لاكتوز - 10 g
املاح الصفراء - 1.5 g
كلوريد الصوديوم - 5 g
الاحمر المحايد - 0.03 g
اجار - 13.5 g
ماء - يضاف ليصل المجموع 1 لتر ,ويعدل اس هيدروجيني إلى 7
الاستخدامات:
يعمل على محدد للاس الهيدروجيني. الاجار يفرق بين بكتيريا سالبة الغرام التي تستطيع ان تخمر الاكتوز (Lac+) والتي لاتخمر الاكتوز (Lac-).
هذا الوسط يعرف باسم الوسط المحدد
1) لاكتوز موجب:
عبر استخدام الاكتوز المتوفر في الوسط. امثلة : إشريكية قولونية وكليبسيلا Klebsiella وانتيروبكتر Enterobacter وتكون تفرز حمض الذي يخفض الاس الهيدروجيني وبالتالي المستعمرات تأخذ اللون الاحمر. الأملاح الصفراء تترسب بجانب المستعرات.
2) لاكتوز سالب:
البكتيريا الغير مخمرة للاكتوز كالزائفة الزنجارية وشيقيلا Shigellaوسالمونيلا Salmonella وبروتيس Proteus. هذه البكتيريا لاتستطيع استخدام الاكتوز وتستخدم البيبتون كبديل.
3) تخمير للاكتوز متأخر
بعض الكائنات تخمر الاكتوز بشكل ضعيف أو متأخر ومنها سيريشيا Serratia وسيتروبكتر Citrobacter.
منقول
Forwarded from علم التحليلات المرضية
استخدامات بعض الأوساط الشائعة الاستخدام
الأغار المغذي Nutrient agar
الزراعة الروتينية Routine culture
إظهار التصبغ Demonstration of pigmentation
يمكن إجراء اختبار الكاتاليز Catalase والأكسيديز oxidase والتراص agglutination على هذا الوسط
أغار الماكونكي MacConkey agar
الزراعة الروتينية للعصيات السالبة لصبغة جرام gram negative bacilli
وسط تفريقي Differential medium
وسط انتقائي خفيف Mildly selective medium
الكليد أغار CLED agar يستخدم لنفس الغرض و لكنه يستخدم بشكل أساسي لعينات البول
أغار الدم Blood agar
يستخدم للزراعة الروتينية كوسط إغنائي Enriched medium
يستخدم لزراعة البكتيريا الصعبة و شديدة الحساسية مثل المكورات العقدية Streptococcus species
إظهار خاصية الانحلال Demonstration of hemolytic property
أغار الشوكولاته Chocolate agar (شوكولاتة المخبريين)
وسط إغنائي Enriched medium
يستخدم لزراعة النيسيريا Neisseria و الهيموفيليس انفلونزا Haemophilus influenzae
أغار مولر هنتون Mueller Hinton Agar MHA
يستخدم لاختبارات الحساسية للمضادات الحيوية antibiotic susceptibility بطريقة نشر القرص أو تفشي القرص disk diffusion
#معلومة_مخبرية_على_الطائر
الأغار المغذي Nutrient agar
الزراعة الروتينية Routine culture
إظهار التصبغ Demonstration of pigmentation
يمكن إجراء اختبار الكاتاليز Catalase والأكسيديز oxidase والتراص agglutination على هذا الوسط
أغار الماكونكي MacConkey agar
الزراعة الروتينية للعصيات السالبة لصبغة جرام gram negative bacilli
وسط تفريقي Differential medium
وسط انتقائي خفيف Mildly selective medium
الكليد أغار CLED agar يستخدم لنفس الغرض و لكنه يستخدم بشكل أساسي لعينات البول
أغار الدم Blood agar
يستخدم للزراعة الروتينية كوسط إغنائي Enriched medium
يستخدم لزراعة البكتيريا الصعبة و شديدة الحساسية مثل المكورات العقدية Streptococcus species
إظهار خاصية الانحلال Demonstration of hemolytic property
أغار الشوكولاته Chocolate agar (شوكولاتة المخبريين)
وسط إغنائي Enriched medium
يستخدم لزراعة النيسيريا Neisseria و الهيموفيليس انفلونزا Haemophilus influenzae
أغار مولر هنتون Mueller Hinton Agar MHA
يستخدم لاختبارات الحساسية للمضادات الحيوية antibiotic susceptibility بطريقة نشر القرص أو تفشي القرص disk diffusion
#معلومة_مخبرية_على_الطائر
تيريا المحتمل وجودها في عينة البول:
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• المكورات السبحية البراز يه
• عصيات الحميات المعوية (التيفود)
• عصيات القولون E.coli ,Strept. faecalis
• عصيات البروتيص
• السيلان
• السل
البيئات المستخدمة في عينات البول:
Blood agar:
بعض أنواع البيئات لا تنمو ألا بوجود الدم مثل:
الالتهاب السحائي الوبائي - الالتهاب الرئوي.
بعض أنواع البكتيريا تفرز خمائر تذيب كرات الدم الحمراء فيمكن التعرف عليها مثل الأنواع المختلفة من المكورات السبحية.
وأهميتها في تمييز نوع التحلل ألفا, بيتا, جاما
Chocolate agar:
يستخدم في مزارع الالتهاب الرئوي-السيلان-الأنفلونزا
وأهميتها أيضا في تمييز نمو بكتيريا نيسيريا, هيموفلص.
MacConkeys medium:
وهو للتعرف على البكتريا المخمرة لسكر اللاكتوز(لون احمر أو وردي) والتي لاتخمرة (نفس لون البيئة) وتنمو فيها عائلة البكتيريا المعوية
Cled agar:
للتفريق بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز والتي لاتخمرة وتحد من نمو بكتيريا البروتيص
طريقة أخذ العينة:
• أن تكون العينة من وسط البول وذلك حتى لا تحتوي على إفرازات من مجرى البول.
• أن يراعى التنبيه على المريض وخصوصا السيدات بغسل الأعضاء التناسلية الخارجية جيدا بالماء والصابون.
• يجب أن تفحص العينة خلال 3 ساعات من جمعها حيث أن تكاثر ونمو البكتيريا مما يودي إلى خلل في النتائج الكيميائية مثل نقص الجلوكوز وخلافه.
طريقة الزرع:
1) يتم تسجيل العينة ووضع البيانات في الملف الخاص بالزرع.
2) يتم تسجيل رقم العينة الخاص بالمختبر على الطبق.
3) يتم خلط العينة بهدوء لتوزيع أي راسب يكون في قاع العينة.
4) يتم الزرع بأخذ نقطه أو نقطتين من البول ويتم وضعها داخل طبق الزرع
5) يتم توزيع نقطة البول في الطبق باستخدام الإبرة حسب ميكانيكية معينه.
6) توضع الأطباق في الحاضنة عند درجة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
عينات البراز:
البكتيريا المحتمل وجودها في عينة البراز:
• السالمونيلا والشيجيلا
• الكوليرا
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• الإيشريشيا كولاي
• البروتيص
البيئات المستخدمة على وجه العموم فهي كما يلي:
S.S agar:
تستخدم للعينات البرازية وهي بيئة انتخابية حيث أن هذه البيئة تثبط نمو البكتيريا الموجبة للجرام وكذلك تحتوي على مثبطات نمو البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز.
فبنسبة للسالونيلا في XLD فلونها زهري والمركز توجد نقطة سوداء
أما في الشيجيلا فلونها زهري وبدون مركز اسود اللون السائد زهري
EMB:
بيئة تفريقية لعزل البكتيريا المعوية السالبة للجرام مثل: سالمونيلا, بروتيص, شيجيلا حيث تحتوي هذه البيئة على دليلين هما Eosine وMethylene blue الذين يفرقان بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة
DCA:
تحوي سكر اللاكتوز لذلك تفرق بين المخمرة وغير المخمرة لونها احمر فاتح يقترب من البني في حالة التخمر يتحول لونها إلى الأحمر الباهت.
حيث السالمونيلا لا لون لها وفي المركز نقطة سوداء
أما الشيجيلا فهي بدون لون
S.B) Selenite broth):
وهي بيئة سائله غنية لنمو السالمونيلا بأنواعها
المســحـــاتSWABS:
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
Blood Agar*
*Sabouraud Agar
Macconkey Agar*
*Chocolate Agar
أما البكتيريا المتوقع نموها فهي كالتالي وذلك حسب المنطقة المعزولة منها:
1-Beta.Hameolytic Streptococci.
2-Corynebacterium Diphtheriae.
3-Bordetella Pertussis.
4-Meningococci.
5-Staph Aureus.
6-Haemophills Influenzae.
7-Candida albicans.
أنواع المسحات:
1) مسحة من الزور أو الحلق في حالة الدفتيريا – التهاب الزور تزرع على B.A لاحتمال وجود المكورات السبحية المذيبة للدم أو العنقودية الذهبي تزرع على MAC عينات سلبية للجرام
2) مسحة من الجروح والدمامل والناسور
3) مسحة من الشرج في الأطفال في حالة الدوسنتريا
4) مسحة من الشرج في حالات الوفاة كما في الكوليرا
5) مسحة من التقيحات التي بالأذن، الأنف، العيون
تزرع على BA لا هوائي وهوائي وأيضا MAC
6) مسحة من الرحم كما في حالة السيلان- حمى النفاس
تزرع على BA+CO2 لاحتمال وجود مكورات سبحية مذيبة للدم
تزرع على MAC لاحتمال وجود العصيات سلبية جرام (بكتيريا القولون)
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
نستعمل Blood Agar و Macconkey Agar فقط
أما في حالة مسحة من الرحم أو العين فنستعمل Blood Agar و Chocolate Agar
التعرف على البكتيريا:
الفحص الميكروسكوبي عن طريق صبغ العينة:
أهمية الصبغة:
1. رؤية البكتيريا والتعرف عليها.
2. بعض أنواع الصبغات تستخدم في التفرقة بين أنواع البكتيريا مثل صبغة جرام التي تفرق بين الإيجابية والسلبية وصبغة زيل نلسن تصبغ البكتيريا المقاومة للأحماض.
أنواع الصبغات:
صبغات بسيطة:
• methylene blue stain
• صبغة كاربول فوكسين
صبغات مركبة:وهي الصبغات التي تستخدم فيها أكثر من صبغة أولية
• صبغة جرام:
وهي تتكون من صبغة الميثي
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• المكورات السبحية البراز يه
• عصيات الحميات المعوية (التيفود)
• عصيات القولون E.coli ,Strept. faecalis
• عصيات البروتيص
• السيلان
• السل
البيئات المستخدمة في عينات البول:
Blood agar:
بعض أنواع البيئات لا تنمو ألا بوجود الدم مثل:
الالتهاب السحائي الوبائي - الالتهاب الرئوي.
بعض أنواع البكتيريا تفرز خمائر تذيب كرات الدم الحمراء فيمكن التعرف عليها مثل الأنواع المختلفة من المكورات السبحية.
وأهميتها في تمييز نوع التحلل ألفا, بيتا, جاما
Chocolate agar:
يستخدم في مزارع الالتهاب الرئوي-السيلان-الأنفلونزا
وأهميتها أيضا في تمييز نمو بكتيريا نيسيريا, هيموفلص.
MacConkeys medium:
وهو للتعرف على البكتريا المخمرة لسكر اللاكتوز(لون احمر أو وردي) والتي لاتخمرة (نفس لون البيئة) وتنمو فيها عائلة البكتيريا المعوية
Cled agar:
للتفريق بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز والتي لاتخمرة وتحد من نمو بكتيريا البروتيص
طريقة أخذ العينة:
• أن تكون العينة من وسط البول وذلك حتى لا تحتوي على إفرازات من مجرى البول.
• أن يراعى التنبيه على المريض وخصوصا السيدات بغسل الأعضاء التناسلية الخارجية جيدا بالماء والصابون.
• يجب أن تفحص العينة خلال 3 ساعات من جمعها حيث أن تكاثر ونمو البكتيريا مما يودي إلى خلل في النتائج الكيميائية مثل نقص الجلوكوز وخلافه.
طريقة الزرع:
1) يتم تسجيل العينة ووضع البيانات في الملف الخاص بالزرع.
2) يتم تسجيل رقم العينة الخاص بالمختبر على الطبق.
3) يتم خلط العينة بهدوء لتوزيع أي راسب يكون في قاع العينة.
4) يتم الزرع بأخذ نقطه أو نقطتين من البول ويتم وضعها داخل طبق الزرع
5) يتم توزيع نقطة البول في الطبق باستخدام الإبرة حسب ميكانيكية معينه.
6) توضع الأطباق في الحاضنة عند درجة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
عينات البراز:
البكتيريا المحتمل وجودها في عينة البراز:
• السالمونيلا والشيجيلا
• الكوليرا
• المكورات العنقودية الذهبية staph.aureus
• الإيشريشيا كولاي
• البروتيص
البيئات المستخدمة على وجه العموم فهي كما يلي:
S.S agar:
تستخدم للعينات البرازية وهي بيئة انتخابية حيث أن هذه البيئة تثبط نمو البكتيريا الموجبة للجرام وكذلك تحتوي على مثبطات نمو البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز.
فبنسبة للسالونيلا في XLD فلونها زهري والمركز توجد نقطة سوداء
أما في الشيجيلا فلونها زهري وبدون مركز اسود اللون السائد زهري
EMB:
بيئة تفريقية لعزل البكتيريا المعوية السالبة للجرام مثل: سالمونيلا, بروتيص, شيجيلا حيث تحتوي هذه البيئة على دليلين هما Eosine وMethylene blue الذين يفرقان بين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة
DCA:
تحوي سكر اللاكتوز لذلك تفرق بين المخمرة وغير المخمرة لونها احمر فاتح يقترب من البني في حالة التخمر يتحول لونها إلى الأحمر الباهت.
حيث السالمونيلا لا لون لها وفي المركز نقطة سوداء
أما الشيجيلا فهي بدون لون
S.B) Selenite broth):
وهي بيئة سائله غنية لنمو السالمونيلا بأنواعها
المســحـــاتSWABS:
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
Blood Agar*
*Sabouraud Agar
Macconkey Agar*
*Chocolate Agar
أما البكتيريا المتوقع نموها فهي كالتالي وذلك حسب المنطقة المعزولة منها:
1-Beta.Hameolytic Streptococci.
2-Corynebacterium Diphtheriae.
3-Bordetella Pertussis.
4-Meningococci.
5-Staph Aureus.
6-Haemophills Influenzae.
7-Candida albicans.
أنواع المسحات:
1) مسحة من الزور أو الحلق في حالة الدفتيريا – التهاب الزور تزرع على B.A لاحتمال وجود المكورات السبحية المذيبة للدم أو العنقودية الذهبي تزرع على MAC عينات سلبية للجرام
2) مسحة من الجروح والدمامل والناسور
3) مسحة من الشرج في الأطفال في حالة الدوسنتريا
4) مسحة من الشرج في حالات الوفاة كما في الكوليرا
5) مسحة من التقيحات التي بالأذن، الأنف، العيون
تزرع على BA لا هوائي وهوائي وأيضا MAC
6) مسحة من الرحم كما في حالة السيلان- حمى النفاس
تزرع على BA+CO2 لاحتمال وجود مكورات سبحية مذيبة للدم
تزرع على MAC لاحتمال وجود العصيات سلبية جرام (بكتيريا القولون)
البيئات المستخدمة في عينة المسحة:
نستعمل Blood Agar و Macconkey Agar فقط
أما في حالة مسحة من الرحم أو العين فنستعمل Blood Agar و Chocolate Agar
التعرف على البكتيريا:
الفحص الميكروسكوبي عن طريق صبغ العينة:
أهمية الصبغة:
1. رؤية البكتيريا والتعرف عليها.
2. بعض أنواع الصبغات تستخدم في التفرقة بين أنواع البكتيريا مثل صبغة جرام التي تفرق بين الإيجابية والسلبية وصبغة زيل نلسن تصبغ البكتيريا المقاومة للأحماض.
أنواع الصبغات:
صبغات بسيطة:
• methylene blue stain
• صبغة كاربول فوكسين
صبغات مركبة:وهي الصبغات التي تستخدم فيها أكثر من صبغة أولية
• صبغة جرام:
وهي تتكون من صبغة الميثي
💢للذي يسال عن عد المستعمرات في الطبق البكتيري
عد البكتيريا في الطبق لعينات البول وكتابه تقرير عنها
🔢Bacterial Count in urine
💯اولا
لكي نقوم بعمل العد البكتيري في عينة اليورين
لازم نلتزم بالشروط الاتية
1⃣يعطى المريض sterial countainer
2⃣وعمل التعليمات اللازمة لجمع عينه urine للمزرعة بطريقة صحيحه وافضل عينة هي MSU وسنلاحظ الاتي :-
📶 في حالة كان التجميع صحيح والتزام المريض بالتعليمات الخاصه بتجميع العينة خلال تجميعها هنا بنعتبر النمو pathogenic organism اي مرضيه
📶 في حالة لم يلتزم المريض بالتعليمات الخاصه بجمع العينة هنا نعتبر النمو في الطبق تلوث Contamination
3⃣استخدام للوب البلاستيكي العياري معروف الحجم عند اخذ العينه
4⃣ طريقة التزريع في بيئه مناسبه والالتزام بشروط التزريع كالتالي
⏏تحريك العينه قبل اخذها للتزريع
⏏استخدام loop معياري معروف
⏏ان تكون العينه fresh ولا تزيد عن الوقت المحدد
⏏ان تكون العينه وسطيه
🎦 البيئة المستخدمة لعينة الـ،urine هي
CLED → Cystine lactose electrolyte deficient mediun
📲مميزات هذه الميديا
🕳مزرعة CLED يعطي نتائج دقيقة للاسباب عديدة منها:-
الاول:-
❇️allow growth Gram positive Gram Negative pathogenic bacteria
يسمح بنمو البكتيريا الموجبه والسالبه
❇️ثانيا :- أيضا لأن الCLEDيستخدم في عزل وتفريق بكتيريا المسالك البوليه
❇️أيضا يمكنه التمييز بين البكتيريا المخمره للاكتوز وغير المخمره
Lactose use to diffrentiat Gram negative bacteria to Lactose fermention
non lactose fermention
ثالثا :- electrolyte deficient الموجود في المزرعة تعمل على منع swarming لبكتيريا البروتيس بسبب الالكتروليت الموجود في البيئه
❇️Prevent the swarming of proteus in media
🔝 وفي حاله عدم توفر CLED ممكن نستخدم ال Blood agar & Mac للتزريع مع بعض وليس شرطا وجود ال cled
وتحتوى CLED على كاشف Bromo-thymol blue
كما انها تعتبر لها نفس وظيفة الـ Agar MacConkey
📶نستخدم CLEDلعينة urine طريقة خاصة جدا لتزريعها ولهذا السبب وجد العد البكتيري في عينة البول
🔎Types of Wire Loop use in urine culture:-
1⃣10 ML
2⃣100 ML
3⃣1000 ML
هذه انواع اللوب البلاستيكيه المستخدمه في قسم الميكرو
وتعتبر معيارية معروفه حجم الحلقي فيها اثناء اخذ العينه للتزريع
🕳يتم اخذ loop البلاستيكي وغمسه في العينه بشكل عمودي
وبما ان الدائرة الموجودة في رأس ال Loop معروفه حجمها واستخدامها في قانون العد
ويتم استخدام عيارته لكي لا تتم اخذ كميه اكبر من العينه المسحوبه
🕳يتم تخطيط الطبق حسب تزريع عينه البول وتعقيم الميديا قبل التزريع بتعريضها للهب
🕳تحضين الطبق لمدة 24 ساعه في جهاز الحاظنة incubator
🕳بعد 24 ساعه يتم قراة النمو ويتم عد المستعمرات Colonies
🔢حساب النتيجة
📶يتم عد المستعمرات على حسب قطر ال Loop المستخدم في التزريع نحسب عدد البكتيريا فإذا استخدمنا القطر
1⃣10 ML = Bacterial count × 100 = count CFU/
2⃣100ML = Bacterial count ×10 =count CFU/ML
3⃣1000ML= Bacterial count ×1 = count CFU/ML
📶Result Interpretation
1⃣اذا كان عدد الخلايا
=10^4 {write} → Not siginficant
2⃣اذا كان العدد
=10^4 -10^5{write} →doubtful due to contamination→ { repeat specimen}
3⃣اذا كان العدد
=10^5 {write} → significant growth
•┈┈┈❈••✦✾✦••❈•┈┈┈•
@ska96
عد البكتيريا في الطبق لعينات البول وكتابه تقرير عنها
🔢Bacterial Count in urine
💯اولا
لكي نقوم بعمل العد البكتيري في عينة اليورين
لازم نلتزم بالشروط الاتية
1⃣يعطى المريض sterial countainer
2⃣وعمل التعليمات اللازمة لجمع عينه urine للمزرعة بطريقة صحيحه وافضل عينة هي MSU وسنلاحظ الاتي :-
📶 في حالة كان التجميع صحيح والتزام المريض بالتعليمات الخاصه بتجميع العينة خلال تجميعها هنا بنعتبر النمو pathogenic organism اي مرضيه
📶 في حالة لم يلتزم المريض بالتعليمات الخاصه بجمع العينة هنا نعتبر النمو في الطبق تلوث Contamination
3⃣استخدام للوب البلاستيكي العياري معروف الحجم عند اخذ العينه
4⃣ طريقة التزريع في بيئه مناسبه والالتزام بشروط التزريع كالتالي
⏏تحريك العينه قبل اخذها للتزريع
⏏استخدام loop معياري معروف
⏏ان تكون العينه fresh ولا تزيد عن الوقت المحدد
⏏ان تكون العينه وسطيه
🎦 البيئة المستخدمة لعينة الـ،urine هي
CLED → Cystine lactose electrolyte deficient mediun
📲مميزات هذه الميديا
🕳مزرعة CLED يعطي نتائج دقيقة للاسباب عديدة منها:-
الاول:-
❇️allow growth Gram positive Gram Negative pathogenic bacteria
يسمح بنمو البكتيريا الموجبه والسالبه
❇️ثانيا :- أيضا لأن الCLEDيستخدم في عزل وتفريق بكتيريا المسالك البوليه
❇️أيضا يمكنه التمييز بين البكتيريا المخمره للاكتوز وغير المخمره
Lactose use to diffrentiat Gram negative bacteria to Lactose fermention
non lactose fermention
ثالثا :- electrolyte deficient الموجود في المزرعة تعمل على منع swarming لبكتيريا البروتيس بسبب الالكتروليت الموجود في البيئه
❇️Prevent the swarming of proteus in media
🔝 وفي حاله عدم توفر CLED ممكن نستخدم ال Blood agar & Mac للتزريع مع بعض وليس شرطا وجود ال cled
وتحتوى CLED على كاشف Bromo-thymol blue
كما انها تعتبر لها نفس وظيفة الـ Agar MacConkey
📶نستخدم CLEDلعينة urine طريقة خاصة جدا لتزريعها ولهذا السبب وجد العد البكتيري في عينة البول
🔎Types of Wire Loop use in urine culture:-
1⃣10 ML
2⃣100 ML
3⃣1000 ML
هذه انواع اللوب البلاستيكيه المستخدمه في قسم الميكرو
وتعتبر معيارية معروفه حجم الحلقي فيها اثناء اخذ العينه للتزريع
🕳يتم اخذ loop البلاستيكي وغمسه في العينه بشكل عمودي
وبما ان الدائرة الموجودة في رأس ال Loop معروفه حجمها واستخدامها في قانون العد
ويتم استخدام عيارته لكي لا تتم اخذ كميه اكبر من العينه المسحوبه
🕳يتم تخطيط الطبق حسب تزريع عينه البول وتعقيم الميديا قبل التزريع بتعريضها للهب
🕳تحضين الطبق لمدة 24 ساعه في جهاز الحاظنة incubator
🕳بعد 24 ساعه يتم قراة النمو ويتم عد المستعمرات Colonies
🔢حساب النتيجة
📶يتم عد المستعمرات على حسب قطر ال Loop المستخدم في التزريع نحسب عدد البكتيريا فإذا استخدمنا القطر
1⃣10 ML = Bacterial count × 100 = count CFU/
2⃣100ML = Bacterial count ×10 =count CFU/ML
3⃣1000ML= Bacterial count ×1 = count CFU/ML
📶Result Interpretation
1⃣اذا كان عدد الخلايا
=10^4 {write} → Not siginficant
2⃣اذا كان العدد
=10^4 -10^5{write} →doubtful due to contamination→ { repeat specimen}
3⃣اذا كان العدد
=10^5 {write} → significant growth
•┈┈┈❈••✦✾✦••❈•┈┈┈•
@ska96
عينات البراز stool specimen :
========================
تكون القناة الهضمية عند المواليد معقمة وتبدأ الجراثيم بالدخول إليها عبر الطعام والشراب فيتكون مجتمعاً ميكروبياً يتعايش مع الإنسان داخل جهازه الهضمي وهو ما يعرف normal flora ويزداد عدد هذه الكائنات كلما اتجهنا إلى أسفل الجهاز الهضمي بالرغم من وجود الحمض المعوي ووجود إنزيم الببسين الهاضم للمكونات البروتينية ولكن يزداد هذا العدد في الأمعاء الدقيقة والغليظة أكثر لوجود المواد الغذائية داخلها لمدة طويلة مما يعطي فرصة لهذه الكائنات بالزيادة العددية لها .
وتحدث التهابات القناة الهضمية نتيجة الإصابة بعدة أنواع من المسببات كالبكتيريا والطفيليات والفيروسات فيحدث ألم أو غثيان أو قيئ أو إسهال وقد يصاحب ذلك الحمى كعرض من أعراض التهاب القناة الهضمية .
الجراثيم الممرضة التي قد توجد في الجهاز الهضمي :
----------------------------------
1- الفيروسات مثل Rotavirus و Norwalk agentvirus و Adenovirus .
2- الطفيليات Parasite مثل :
Entamoeba histolytica و Giardia lamblia .
3- البكتيريا ومنها حسب الجدول التالي :
الأنواع الأكثر شيوعاً -----الأنواع الأقل شيوعاً
Salmonella ----- Staphylococcus aureus
Shigella ----- E.coli
Vibrio spp. ----- Clostridium perfringens
Yersinia enterocolitica ----- Aeromonas
Cambylobacter jejuni------ Bacillus cereus
Mycobacterium tuberculosis
وتستخدم عدة عينات للكشف عن مسببات الإلتهاب مثل :
1- مسحة من المستقيم rectal swab أو من فتحة الشرج .
2- خزعة من الأمعاء Gastric biopsy .
3- الدم للزراعة أو للكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم .
4- البراز stool وهي الأكثر شيوعاً .
----------------------''
مراحل فحص عينة البراز :
1- الفحص الظاهري macroscopic examination :
يلاحظ قوام ولون العينة ووجود المخاط والدم وأطوار الديدان وذلك بالعين المجردة .
2- الفحص المجهري microscopic examination :
يعمل شريحة من عينة البراز بطريقة التحضير الرطب إذا كان المسبب من الفطريات مثل Candida spp. أو الطفيليات فيلاحظ أطوارها مثل الديدان والأميبا وغيرها .
كما ويستخدم الميكروسكوب لملاحظة خلايا الدم الحمراء والبيضاء دلالة على وجود الألتهاب.
3- زراعة عينة البراز :
تستخدم هذه الخطوة لعزل مسبب المرض خاصة البكتيريا ولابد من ملاحظة ما يلي :
1- لاتزرع عينة البراز في الظروف اللاهوائية لأن معظم الساكن الطبيعي من البكتيريا في الأمعاء لاهوائي ومسببات المرض هي من النوع الهوائي الإختياري .
2- استخدام الأوساط الإختيارية والتفريقية لتثبيط الساكن الطبيعي وتنمية البكتيريا المسببة للمرض فقط . ويجب أن تكون هذه الأوساط الغذائية تغطي جميع أنواع البكتيريا الشائعة المسببة للمرض..
-------
3- يمكن استخدام صبغة جرام لمعرفة كون المرض ناتجاً عن البكتيريا نفسها أم عن السموم التي تفرزها ولاتستخدم هذه الصبغة كمرحلة تشخيصية لكثرة الأنواع البكتيرية المسببة لالتهابات الأمعاء .
يفضل عزل الأنواع المختلفة على بيئات خاصة كما سيرد ( وهي الطريقة الدارجة في المختبرات ) :
أ- عزل بكتيريا Salmonella and Shigella :
ويتم عزل هذين النوعين من البكتيريا على عدة أوساط وهي :
1- تستخدم أوساط مفرقة واختيارية جزئية مثل Macconkey agar أو EMB حيث يعتبر هذين الوسطين من الأوساط المفرقة التي تميز بين البكتيريا الموجبة والسالب لصبغة جرام حيث ينمو عليها البكتيريا السالبة لجرام فقط كما أنها تميز البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة لاحتواء هذين الوسطين على اللاكتوز في تركيبهما . فالبكتيريا المخمرة للاكتوز تظهر كمستعمرات وردية وغير المخمرة تظهر مستعمراتها شفافة غير ملونة وتعتبر كل من Salmonella and Shigella غير مخمرة للاكتوز لذا تكون مستعمراتها شفافة غير ملونة على هذين الوسطين .
2- تستخدم البيئات التالية كونها مثبطة للساكن الطبيعي في الأمعاء وتنمي Salmonella and Shigella فقط وهي :
تزرع العينة على بيئة Salmonella Shigella agar و Desoxy cohlate citrate agar و Kauffmann-brilliant green agar تمنع الأخيرة نمو كثير من البكتيريا المعوية وخاصة E.coli and Proteus وتسمح بنمو السالمونيلا والشايجيلا . وتعمل هذه البيئات كمفرق للبكتيريا المخمرة للسكر والتي تظهر كمستعمرات وردية اللون وبما أن السالمونيلا والشايجيلا غير مخمرة للسكر فتظهر كمستعمرات عديمة اللون كما سبق ذكره .
بيئة Leifson selenite broth أو Mueller tetrathionate broth :
تحتوي على مواد كيميائية مثل Citrate , desoxycholate , tetrathionate تمنع نمو البكتيريا الموجبة لجرام وتنشط نمو السالمونيلا والشايجيلا .
بيئة Hektoen enteric agar :
يعتبر هذا الوسط اختياري لاحتوائه على تركيز عال من أملاح الصفراء Bile salt كما يعتبر وسطاً مفرقاً نظراً لاحتوائه على الكربوهيدرات فيفرق بين البكتيريا المخمرة
========================
تكون القناة الهضمية عند المواليد معقمة وتبدأ الجراثيم بالدخول إليها عبر الطعام والشراب فيتكون مجتمعاً ميكروبياً يتعايش مع الإنسان داخل جهازه الهضمي وهو ما يعرف normal flora ويزداد عدد هذه الكائنات كلما اتجهنا إلى أسفل الجهاز الهضمي بالرغم من وجود الحمض المعوي ووجود إنزيم الببسين الهاضم للمكونات البروتينية ولكن يزداد هذا العدد في الأمعاء الدقيقة والغليظة أكثر لوجود المواد الغذائية داخلها لمدة طويلة مما يعطي فرصة لهذه الكائنات بالزيادة العددية لها .
وتحدث التهابات القناة الهضمية نتيجة الإصابة بعدة أنواع من المسببات كالبكتيريا والطفيليات والفيروسات فيحدث ألم أو غثيان أو قيئ أو إسهال وقد يصاحب ذلك الحمى كعرض من أعراض التهاب القناة الهضمية .
الجراثيم الممرضة التي قد توجد في الجهاز الهضمي :
----------------------------------
1- الفيروسات مثل Rotavirus و Norwalk agentvirus و Adenovirus .
2- الطفيليات Parasite مثل :
Entamoeba histolytica و Giardia lamblia .
3- البكتيريا ومنها حسب الجدول التالي :
الأنواع الأكثر شيوعاً -----الأنواع الأقل شيوعاً
Salmonella ----- Staphylococcus aureus
Shigella ----- E.coli
Vibrio spp. ----- Clostridium perfringens
Yersinia enterocolitica ----- Aeromonas
Cambylobacter jejuni------ Bacillus cereus
Mycobacterium tuberculosis
وتستخدم عدة عينات للكشف عن مسببات الإلتهاب مثل :
1- مسحة من المستقيم rectal swab أو من فتحة الشرج .
2- خزعة من الأمعاء Gastric biopsy .
3- الدم للزراعة أو للكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم .
4- البراز stool وهي الأكثر شيوعاً .
----------------------''
مراحل فحص عينة البراز :
1- الفحص الظاهري macroscopic examination :
يلاحظ قوام ولون العينة ووجود المخاط والدم وأطوار الديدان وذلك بالعين المجردة .
2- الفحص المجهري microscopic examination :
يعمل شريحة من عينة البراز بطريقة التحضير الرطب إذا كان المسبب من الفطريات مثل Candida spp. أو الطفيليات فيلاحظ أطوارها مثل الديدان والأميبا وغيرها .
كما ويستخدم الميكروسكوب لملاحظة خلايا الدم الحمراء والبيضاء دلالة على وجود الألتهاب.
3- زراعة عينة البراز :
تستخدم هذه الخطوة لعزل مسبب المرض خاصة البكتيريا ولابد من ملاحظة ما يلي :
1- لاتزرع عينة البراز في الظروف اللاهوائية لأن معظم الساكن الطبيعي من البكتيريا في الأمعاء لاهوائي ومسببات المرض هي من النوع الهوائي الإختياري .
2- استخدام الأوساط الإختيارية والتفريقية لتثبيط الساكن الطبيعي وتنمية البكتيريا المسببة للمرض فقط . ويجب أن تكون هذه الأوساط الغذائية تغطي جميع أنواع البكتيريا الشائعة المسببة للمرض..
-------
3- يمكن استخدام صبغة جرام لمعرفة كون المرض ناتجاً عن البكتيريا نفسها أم عن السموم التي تفرزها ولاتستخدم هذه الصبغة كمرحلة تشخيصية لكثرة الأنواع البكتيرية المسببة لالتهابات الأمعاء .
يفضل عزل الأنواع المختلفة على بيئات خاصة كما سيرد ( وهي الطريقة الدارجة في المختبرات ) :
أ- عزل بكتيريا Salmonella and Shigella :
ويتم عزل هذين النوعين من البكتيريا على عدة أوساط وهي :
1- تستخدم أوساط مفرقة واختيارية جزئية مثل Macconkey agar أو EMB حيث يعتبر هذين الوسطين من الأوساط المفرقة التي تميز بين البكتيريا الموجبة والسالب لصبغة جرام حيث ينمو عليها البكتيريا السالبة لجرام فقط كما أنها تميز البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة لاحتواء هذين الوسطين على اللاكتوز في تركيبهما . فالبكتيريا المخمرة للاكتوز تظهر كمستعمرات وردية وغير المخمرة تظهر مستعمراتها شفافة غير ملونة وتعتبر كل من Salmonella and Shigella غير مخمرة للاكتوز لذا تكون مستعمراتها شفافة غير ملونة على هذين الوسطين .
2- تستخدم البيئات التالية كونها مثبطة للساكن الطبيعي في الأمعاء وتنمي Salmonella and Shigella فقط وهي :
تزرع العينة على بيئة Salmonella Shigella agar و Desoxy cohlate citrate agar و Kauffmann-brilliant green agar تمنع الأخيرة نمو كثير من البكتيريا المعوية وخاصة E.coli and Proteus وتسمح بنمو السالمونيلا والشايجيلا . وتعمل هذه البيئات كمفرق للبكتيريا المخمرة للسكر والتي تظهر كمستعمرات وردية اللون وبما أن السالمونيلا والشايجيلا غير مخمرة للسكر فتظهر كمستعمرات عديمة اللون كما سبق ذكره .
بيئة Leifson selenite broth أو Mueller tetrathionate broth :
تحتوي على مواد كيميائية مثل Citrate , desoxycholate , tetrathionate تمنع نمو البكتيريا الموجبة لجرام وتنشط نمو السالمونيلا والشايجيلا .
بيئة Hektoen enteric agar :
يعتبر هذا الوسط اختياري لاحتوائه على تركيز عال من أملاح الصفراء Bile salt كما يعتبر وسطاً مفرقاً نظراً لاحتوائه على الكربوهيدرات فيفرق بين البكتيريا المخمرة
للسكر ومنتجة لغاز H2S عن غيرها من الأنواع .
يكون لون هذا الوسط في العادة أخضراً وتظهر المستعمرات المخمرة للسكر باللون الأصفر .
وبما أن Salmonella and Shigella غير مخمرة للسكريات لذا تظهر مستعمراتها شفافة عديمة اللون . ولكن تظهر مستعمرات Salmonella فقط على هذه البيئة في منتصفها نقطة سوداء بسبب انتاج غاز H2Sالذي يترسب باللون الأسود على المستعمرة وهذه الخاصية تميز بكتيريا Salmonell عن Shigella .
-------------------
ملاحظة : تشترك صفة إنتاج غاز H2S مع بكتيريا Salmonell كل من بكتيريا Proteus , Providencia , Morganell .
بيئة Xylose lysin deoxy cholate ( XLD ) :
هذه البيئة ذات لون أحمر يتحول للون الأصفر عند نمو بكتيريا مخمرة للسكر عليه ويعتبر وسط ملائم لعزل بكتيريا Sigella .
3- تستخدم بيئات خاصة عالية الإختيارية ومفرقة بشكل خاص لبكتيريا Salmonella and Shigella مثل بيئة Bismuth sulfite agar الخاصة بتنمية بكتيريا Salmonella فقط لاحتوائه على تركيز عالي من صبغة Brilliant green وأملاح Bismuth فيكون لونه رمادياً لامعاً . وعند نمو بكتيريا Salmonella typhi تظهر مستعمراتها بلون أسود محاطة بمنطقة خضراء لامعة وبقية الأنواع من هذه البكتيريا ( Salmonella ) فتظهر إما شفافة أو خضراء أو سوداء .
4- تستخدم بيئات اختيارية إغنائية وهذه الأوساط سائلة تستخدم للقضاء على كافة أنواع البكتيريا الموجودة في عينة البراز وتنشط نمو بكتيريا Salmonella و Shigella وذلك بحقن كمية بسيطة من البراز غي البيئة ثم تحضينها لمدة 10 – 18 ساعة ثم يتم عمل زراعة أخرى sub culture على أوساط مفرقة للتمييز بين بكتيريا Salmonella و Shigella .
ومن هذه الأوساط Selenite broth , Tetrathionate broth , GN broth .
====================
خطوات عزل وزراعة البكتيريا من عينة البراز :
1- خذ كمية من البراز بواسطة ماسحة قطنية معقمة .
2- ازرع العينة بالتخطيط بواسطة الماسحة القطنية على وسطين من الأوساط التالية مع تفضيل أن يكون أحدهما خاص ببكتيريا Salmonella , Shigella .
مثل SS agar , Hekton enteric agar , Brilliant green agar , Desoxy cholate citrate agar .
ويفضل زرع عينة البراز في وسط إغنائي Selective enrichment media مثل Selenite broth أو GN broth وبعد التحضين 18 ساعة تقريباً يعمل تخطيط على أحدى البيئات السالفة الذكر بواسطة إبرة التلقيح .
3- تزرع العينة من الوسط الإغنائي أيضاً على بيئة EMB أو Macconkey agar أو Desoxycholate agar .
4- تزرع العينة أيضاً على بيئة Bismuth sulfite agar لعزل بكتيريا التيفوئيد وتشخيصها إن وجدت .
5- يتم تحضين الأوساط المزروعة لمدة 24 ساعة عند 35 ْم وقد يلزم بيئة Bismuth فترة أطول .
النتائج : تدرس الأطباق المزروعة تحت إضاءة جيدة للبحث عن النتائج التالية :
تظهر مستعمرات Salmonella , Shigella شفافة على الأوساط السابقة وتظهر مستعمرات Salmonella typhi سوداء اللون على بيئة Bismuth sulfate agar .
===================
عزل بكتيريا Yersinia enterocolitica :
يستخدم وسط Cefsulodin irgasan novobiocin ( CIN ) agar كوسط اختياري خاص لعزل بكتيريا Yersinia من عينة البراز وذلك لاحتوائه على مواد غذائية خاصة لهذه البكتيريا بالإضافة للمضادات الحيوية .
يتم زراعة العينة على الوسط السابق ثم يحضن لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة الغرفة . وبعد فترة التحضين تظهر مستعمرات Yersinis بلون زهري لامع ذات مركز أحمر .
وتظهر بعض أنواع البكتيريا هذه الصفة مثل Citrobacter , Aeromonas وللتمييز بينها تزرع على وسط Blood agar ثم نقوم بعمل الإختبارات البيوكيميائية . حيث أن Yersinia تعطي نتيجة سالبة لفحص الأكسيديز وبكتيريا Aeromonas تعطي نتيجة موجبة .
يمكن عزل بكتيريا Yersinis enterocolitica على وسط Blood agar , Macconkey agar حيث تنمو هذه البكتيريا على بيئة آجار الدم خلال 24 ساعة مكونة مستعمرات صغيرة سريعة النمو ومتحركة عند درجة حرارة الغرفة وهي غير مخمرة للاكتوز وتعطي نتيجة سالبة لصبغة جرام واختبار الأكسيديز وتعطي نتيجة موجبة لفحص Urease .
=================
عزل بكتيريا Vibrio cholera :
تنمو هذه البكتيريا المسببة لمرض الكوليرا على عدة أوساط ولكن بيئة Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar ( TCBS ) من أفضل الأوساط المميزة لهذه البكتيريا حيث تظهر بكتيريا Vibrio cholera كمستعمرات صفراء اللون بينماالنوع
Vibrio parahaemolyticus يعطي مستعمرات خضراء اللون على هذا الوسط .
=================
عزل بكتيريا Campylobacter :
تستخدم أوساط اختيارية خاصة بتنمية هذه البكتيريا مثل Campy-blood agar
و Skirrows media حيث تزرع العينة على الوسط ثم تحضن عند درجة 42 ْم لمدة 48 ساعة بوجود 10 % ثاني أكسيد الكربون .
ويعتبر وسط Campy-blood agar أفضل في تنمية بكتيريا Compylobacter jejuni بينما الآخر قد يستعمل لتنمية بقية أنواع هذه البكتيري
يكون لون هذا الوسط في العادة أخضراً وتظهر المستعمرات المخمرة للسكر باللون الأصفر .
وبما أن Salmonella and Shigella غير مخمرة للسكريات لذا تظهر مستعمراتها شفافة عديمة اللون . ولكن تظهر مستعمرات Salmonella فقط على هذه البيئة في منتصفها نقطة سوداء بسبب انتاج غاز H2Sالذي يترسب باللون الأسود على المستعمرة وهذه الخاصية تميز بكتيريا Salmonell عن Shigella .
-------------------
ملاحظة : تشترك صفة إنتاج غاز H2S مع بكتيريا Salmonell كل من بكتيريا Proteus , Providencia , Morganell .
بيئة Xylose lysin deoxy cholate ( XLD ) :
هذه البيئة ذات لون أحمر يتحول للون الأصفر عند نمو بكتيريا مخمرة للسكر عليه ويعتبر وسط ملائم لعزل بكتيريا Sigella .
3- تستخدم بيئات خاصة عالية الإختيارية ومفرقة بشكل خاص لبكتيريا Salmonella and Shigella مثل بيئة Bismuth sulfite agar الخاصة بتنمية بكتيريا Salmonella فقط لاحتوائه على تركيز عالي من صبغة Brilliant green وأملاح Bismuth فيكون لونه رمادياً لامعاً . وعند نمو بكتيريا Salmonella typhi تظهر مستعمراتها بلون أسود محاطة بمنطقة خضراء لامعة وبقية الأنواع من هذه البكتيريا ( Salmonella ) فتظهر إما شفافة أو خضراء أو سوداء .
4- تستخدم بيئات اختيارية إغنائية وهذه الأوساط سائلة تستخدم للقضاء على كافة أنواع البكتيريا الموجودة في عينة البراز وتنشط نمو بكتيريا Salmonella و Shigella وذلك بحقن كمية بسيطة من البراز غي البيئة ثم تحضينها لمدة 10 – 18 ساعة ثم يتم عمل زراعة أخرى sub culture على أوساط مفرقة للتمييز بين بكتيريا Salmonella و Shigella .
ومن هذه الأوساط Selenite broth , Tetrathionate broth , GN broth .
====================
خطوات عزل وزراعة البكتيريا من عينة البراز :
1- خذ كمية من البراز بواسطة ماسحة قطنية معقمة .
2- ازرع العينة بالتخطيط بواسطة الماسحة القطنية على وسطين من الأوساط التالية مع تفضيل أن يكون أحدهما خاص ببكتيريا Salmonella , Shigella .
مثل SS agar , Hekton enteric agar , Brilliant green agar , Desoxy cholate citrate agar .
ويفضل زرع عينة البراز في وسط إغنائي Selective enrichment media مثل Selenite broth أو GN broth وبعد التحضين 18 ساعة تقريباً يعمل تخطيط على أحدى البيئات السالفة الذكر بواسطة إبرة التلقيح .
3- تزرع العينة من الوسط الإغنائي أيضاً على بيئة EMB أو Macconkey agar أو Desoxycholate agar .
4- تزرع العينة أيضاً على بيئة Bismuth sulfite agar لعزل بكتيريا التيفوئيد وتشخيصها إن وجدت .
5- يتم تحضين الأوساط المزروعة لمدة 24 ساعة عند 35 ْم وقد يلزم بيئة Bismuth فترة أطول .
النتائج : تدرس الأطباق المزروعة تحت إضاءة جيدة للبحث عن النتائج التالية :
تظهر مستعمرات Salmonella , Shigella شفافة على الأوساط السابقة وتظهر مستعمرات Salmonella typhi سوداء اللون على بيئة Bismuth sulfate agar .
===================
عزل بكتيريا Yersinia enterocolitica :
يستخدم وسط Cefsulodin irgasan novobiocin ( CIN ) agar كوسط اختياري خاص لعزل بكتيريا Yersinia من عينة البراز وذلك لاحتوائه على مواد غذائية خاصة لهذه البكتيريا بالإضافة للمضادات الحيوية .
يتم زراعة العينة على الوسط السابق ثم يحضن لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة الغرفة . وبعد فترة التحضين تظهر مستعمرات Yersinis بلون زهري لامع ذات مركز أحمر .
وتظهر بعض أنواع البكتيريا هذه الصفة مثل Citrobacter , Aeromonas وللتمييز بينها تزرع على وسط Blood agar ثم نقوم بعمل الإختبارات البيوكيميائية . حيث أن Yersinia تعطي نتيجة سالبة لفحص الأكسيديز وبكتيريا Aeromonas تعطي نتيجة موجبة .
يمكن عزل بكتيريا Yersinis enterocolitica على وسط Blood agar , Macconkey agar حيث تنمو هذه البكتيريا على بيئة آجار الدم خلال 24 ساعة مكونة مستعمرات صغيرة سريعة النمو ومتحركة عند درجة حرارة الغرفة وهي غير مخمرة للاكتوز وتعطي نتيجة سالبة لصبغة جرام واختبار الأكسيديز وتعطي نتيجة موجبة لفحص Urease .
=================
عزل بكتيريا Vibrio cholera :
تنمو هذه البكتيريا المسببة لمرض الكوليرا على عدة أوساط ولكن بيئة Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar ( TCBS ) من أفضل الأوساط المميزة لهذه البكتيريا حيث تظهر بكتيريا Vibrio cholera كمستعمرات صفراء اللون بينماالنوع
Vibrio parahaemolyticus يعطي مستعمرات خضراء اللون على هذا الوسط .
=================
عزل بكتيريا Campylobacter :
تستخدم أوساط اختيارية خاصة بتنمية هذه البكتيريا مثل Campy-blood agar
و Skirrows media حيث تزرع العينة على الوسط ثم تحضن عند درجة 42 ْم لمدة 48 ساعة بوجود 10 % ثاني أكسيد الكربون .
ويعتبر وسط Campy-blood agar أفضل في تنمية بكتيريا Compylobacter jejuni بينما الآخر قد يستعمل لتنمية بقية أنواع هذه البكتيري
ا .
==============
عزل بكتيريا Helicobacter pylori :
تسبب هذه البكتيريا قرحة المعدة والإثنا عشر وتعزل بأخذ خزعة من مكان التقرح ثم إجراء أحد الفحوصات التالية عليها :
1- عمل مسحة من النسيج المأخوذ ( الخزعة ) وصبغها بصبغة جمسا Giemsa stane لمشاهدة البكتيريا التي تكون منحنية أو لولبية الشكل .
2- تزرع هذه البكتيريا على بيئة Campy-blood agar أو Skirrows media مضافاً لها المضادات الحيوية التالية Trimethoprim , Vancomycin .
ويمكن زراعة العينة على بيئة Chocolate agar مضافاً لها بعض المضادات الحيوية لقتل الكائنات الملوثة للعينة مثل Amphotericin , Nalidixc acid , Vancomycin . ثم تحضن الأوساط المزروعة عند درجة 37 ْم لمدة 3 - 6 أيام فتظهر مستعمرات لامعة ذات قطر يتراوح بين 1 – 2 ملم عند وجود هذه البكتيريا .
3- تنتج هذه البكتيريا إنزيم Urease بقوة لذلك يمكن وضع النسيج في بيئة سائلة Urease media المحتوية على اليوريا بحيث يؤدي إنتاج البكتيريا لإنزيم اليورييز إلى تغير لون الوسط خلال 15 – 30 دقيقة من وضع العينة .
==============
عزل بكتيريا E.coli :
تعتبر من الفلورا الطبيعية التي تعيش في أمعاء الإنسان إلا أن بعض أنواعها تسبب الإسهال لدى الأطفال حديثي الولادة بسبب إفراز السموم مثل النوع المصلي E.coli O157:H7 هو أكثرها شيوعاً .
ويتم زراعتها بأخذ مسحة شرجية أو عينة من البراز وزراعتها على بيئة Blood agar و أوساط اختيارية أخرى مثل Macconkey agar و EMB ثم تحضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وعند ظهور مستعمرات هذه البكتيريا يؤخذ جزء منها ويعرض لأجسام مضادة خاصة بكل نوع مصلي لوحده من أنواع E.coli على شريحة بحيث تعطي النتيجة الإيجابية تخثر للعينة Agglutination . كما يمكن زراعة العينة على بيئة Sorbitol macconkey agar حيث أن 95 % من أنواع بكتيريا E.coli قادرة على تخمير سكر السوربيتول بينما النوع المصلي E.coli O157:H7 يعطي نتيجة سلبية لهذا الفحص .
=================
عزل بكتيريا السل Mycobacterium tuberculosis :
في بعض حالات السل الرئوي وفي حال صعوبة أخذ عينة من البلغم للأشخاص المصابين بهذا المرض يمكن أخذ عينة من البراز لتشخيص مرض السل فيتم زراعة العينة على بيئة Lowenstein-jensen media .
=================
عزل البكتيريا العنقودية الممرضة :
نبحث في هذا العزل على البكتيريا العنقودية Staph. الموجبة لفحص Coagulase فيستخدم لذلك بيئة غنية بأملاح كلوريد الصوديوم مثل Staph. Medium -110 أو Mannitol salt agar .
=================
عزل الفطريات :
قد تتواجد أنواع من الفطريات في الأمعاء مثل Candida albicans بشكل يشبه خلايا الخميرة بشكل طبيعي ولكن عند ضعف مناعة الجسم قد يزداد عددها مما قد يسبب مرضاً . ومما هو جدير بالذكر أن وجود خلايا كالخميرة ليس ذو دلالة مرضية بينما وجودها ووجود خيوط فطرية في العينة يعطي دلالة على المرض .
ويمكن الكشف عنها بعمل تحضير رطب ومشاهدته بواسطة المجهر . كما ويمكن زراعة العينة على أوساط خاصة بالفطريات مثل SDA ( Sugar dextrose agar ) ثم تحضن عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وتظهر مستعمرات Candida بيضاء حليبية مشابهة لمستعمرات البكتيري.
================
#Admin : Saif kh
================
==============
عزل بكتيريا Helicobacter pylori :
تسبب هذه البكتيريا قرحة المعدة والإثنا عشر وتعزل بأخذ خزعة من مكان التقرح ثم إجراء أحد الفحوصات التالية عليها :
1- عمل مسحة من النسيج المأخوذ ( الخزعة ) وصبغها بصبغة جمسا Giemsa stane لمشاهدة البكتيريا التي تكون منحنية أو لولبية الشكل .
2- تزرع هذه البكتيريا على بيئة Campy-blood agar أو Skirrows media مضافاً لها المضادات الحيوية التالية Trimethoprim , Vancomycin .
ويمكن زراعة العينة على بيئة Chocolate agar مضافاً لها بعض المضادات الحيوية لقتل الكائنات الملوثة للعينة مثل Amphotericin , Nalidixc acid , Vancomycin . ثم تحضن الأوساط المزروعة عند درجة 37 ْم لمدة 3 - 6 أيام فتظهر مستعمرات لامعة ذات قطر يتراوح بين 1 – 2 ملم عند وجود هذه البكتيريا .
3- تنتج هذه البكتيريا إنزيم Urease بقوة لذلك يمكن وضع النسيج في بيئة سائلة Urease media المحتوية على اليوريا بحيث يؤدي إنتاج البكتيريا لإنزيم اليورييز إلى تغير لون الوسط خلال 15 – 30 دقيقة من وضع العينة .
==============
عزل بكتيريا E.coli :
تعتبر من الفلورا الطبيعية التي تعيش في أمعاء الإنسان إلا أن بعض أنواعها تسبب الإسهال لدى الأطفال حديثي الولادة بسبب إفراز السموم مثل النوع المصلي E.coli O157:H7 هو أكثرها شيوعاً .
ويتم زراعتها بأخذ مسحة شرجية أو عينة من البراز وزراعتها على بيئة Blood agar و أوساط اختيارية أخرى مثل Macconkey agar و EMB ثم تحضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وعند ظهور مستعمرات هذه البكتيريا يؤخذ جزء منها ويعرض لأجسام مضادة خاصة بكل نوع مصلي لوحده من أنواع E.coli على شريحة بحيث تعطي النتيجة الإيجابية تخثر للعينة Agglutination . كما يمكن زراعة العينة على بيئة Sorbitol macconkey agar حيث أن 95 % من أنواع بكتيريا E.coli قادرة على تخمير سكر السوربيتول بينما النوع المصلي E.coli O157:H7 يعطي نتيجة سلبية لهذا الفحص .
=================
عزل بكتيريا السل Mycobacterium tuberculosis :
في بعض حالات السل الرئوي وفي حال صعوبة أخذ عينة من البلغم للأشخاص المصابين بهذا المرض يمكن أخذ عينة من البراز لتشخيص مرض السل فيتم زراعة العينة على بيئة Lowenstein-jensen media .
=================
عزل البكتيريا العنقودية الممرضة :
نبحث في هذا العزل على البكتيريا العنقودية Staph. الموجبة لفحص Coagulase فيستخدم لذلك بيئة غنية بأملاح كلوريد الصوديوم مثل Staph. Medium -110 أو Mannitol salt agar .
=================
عزل الفطريات :
قد تتواجد أنواع من الفطريات في الأمعاء مثل Candida albicans بشكل يشبه خلايا الخميرة بشكل طبيعي ولكن عند ضعف مناعة الجسم قد يزداد عددها مما قد يسبب مرضاً . ومما هو جدير بالذكر أن وجود خلايا كالخميرة ليس ذو دلالة مرضية بينما وجودها ووجود خيوط فطرية في العينة يعطي دلالة على المرض .
ويمكن الكشف عنها بعمل تحضير رطب ومشاهدته بواسطة المجهر . كما ويمكن زراعة العينة على أوساط خاصة بالفطريات مثل SDA ( Sugar dextrose agar ) ثم تحضن عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وتظهر مستعمرات Candida بيضاء حليبية مشابهة لمستعمرات البكتيري.
================
#Admin : Saif kh
================
علم التحليلات المرضية
Photo
عينات البراز stool specimen :
========================
تكون القناة الهضمية عند المواليد معقمة وتبدأ الجراثيم بالدخول إليها عبر الطعام والشراب فيتكون مجتمعاً ميكروبياً يتعايش مع الإنسان داخل جهازه الهضمي وهو ما يعرف normal flora ويزداد عدد هذه الكائنات كلما اتجهنا إلى أسفل الجهاز الهضمي بالرغم من وجود الحمض المعوي ووجود إنزيم الببسين الهاضم للمكونات البروتينية ولكن يزداد هذا العدد في الأمعاء الدقيقة والغليظة أكثر لوجود المواد الغذائية داخلها لمدة طويلة مما يعطي فرصة لهذه الكائنات بالزيادة العددية لها .
وتحدث التهابات القناة الهضمية نتيجة الإصابة بعدة أنواع من المسببات كالبكتيريا والطفيليات والفيروسات فيحدث ألم أو غثيان أو قيئ أو إسهال وقد يصاحب ذلك الحمى كعرض من أعراض التهاب القناة الهضمية .
الجراثيم الممرضة التي قد توجد في الجهاز الهضمي :
----------------------------------
1- الفيروسات مثل Rotavirus و Norwalk agentvirus و Adenovirus .
2- الطفيليات Parasite مثل :
Entamoeba histolytica و Giardia lamblia .
3- البكتيريا ومنها حسب الجدول التالي :
الأنواع الأكثر شيوعاً -----الأنواع الأقل شيوعاً
Salmonella ----- Staphylococcus aureus
Shigella ----- E.coli
Vibrio spp. ----- Clostridium perfringens
Yersinia enterocolitica ----- Aeromonas
Cambylobacter jejuni------ Bacillus cereus
Mycobacterium tuberculosis
وتستخدم عدة عينات للكشف عن مسببات الإلتهاب مثل :
1- مسحة من المستقيم rectal swab أو من فتحة الشرج .
2- خزعة من الأمعاء Gastric biopsy .
3- الدم للزراعة أو للكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم .
4- البراز stool وهي الأكثر شيوعاً .
----------------------''
مراحل فحص عينة البراز :
1- الفحص الظاهري macroscopic examination :
يلاحظ قوام ولون العينة ووجود المخاط والدم وأطوار الديدان وذلك بالعين المجردة .
2- الفحص المجهري microscopic examination :
يعمل شريحة من عينة البراز بطريقة التحضير الرطب إذا كان المسبب من الفطريات مثل Candida spp. أو الطفيليات فيلاحظ أطوارها مثل الديدان والأميبا وغيرها .
كما ويستخدم الميكروسكوب لملاحظة خلايا الدم الحمراء والبيضاء دلالة على وجود الألتهاب.
3- زراعة عينة البراز :
تستخدم هذه الخطوة لعزل مسبب المرض خاصة البكتيريا ولابد من ملاحظة ما يلي :
1- لاتزرع عينة البراز في الظروف اللاهوائية لأن معظم الساكن الطبيعي من البكتيريا في الأمعاء لاهوائي ومسببات المرض هي من النوع الهوائي الإختياري .
2- استخدام الأوساط الإختيارية والتفريقية لتثبيط الساكن الطبيعي وتنمية البكتيريا المسببة للمرض فقط . ويجب أن تكون هذه الأوساط الغذائية تغطي جميع أنواع البكتيريا الشائعة المسببة للمرض..
-------
3- يمكن استخدام صبغة جرام لمعرفة كون المرض ناتجاً عن البكتيريا نفسها أم عن السموم التي تفرزها ولاتستخدم هذه الصبغة كمرحلة تشخيصية لكثرة الأنواع البكتيرية المسببة لالتهابات الأمعاء .
يفضل عزل الأنواع المختلفة على بيئات خاصة كما سيرد ( وهي الطريقة الدارجة في المختبرات ) :
أ- عزل بكتيريا Salmonella and Shigella :
ويتم عزل هذين النوعين من البكتيريا على عدة أوساط وهي :
1- تستخدم أوساط مفرقة واختيارية جزئية مثل Macconkey agar أو EMB حيث يعتبر هذين الوسطين من الأوساط المفرقة التي تميز بين البكتيريا الموجبة والسالب لصبغة جرام حيث ينمو عليها البكتيريا السالبة لجرام فقط كما أنها تميز البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة لاحتواء هذين الوسطين على اللاكتوز في تركيبهما . فالبكتيريا المخمرة للاكتوز تظهر كمستعمرات وردية وغير المخمرة تظهر مستعمراتها شفافة غير ملونة وتعتبر كل من Salmonella and Shigella غير مخمرة للاكتوز لذا تكون مستعمراتها شفافة غير ملونة على هذين الوسطين .
2- تستخدم البيئات التالية كونها مثبطة للساكن الطبيعي في الأمعاء وتنمي Salmonella and Shigella فقط وهي :
تزرع العينة على بيئة Salmonella Shigella agar و Desoxy cohlate citrate agar و Kauffmann-brilliant green agar تمنع الأخيرة نمو كثير من البكتيريا المعوية وخاصة E.coli and Proteus وتسمح بنمو السالمونيلا والشايجيلا . وتعمل هذه البيئات كمفرق للبكتيريا المخمرة للسكر والتي تظهر كمستعمرات وردية اللون وبما أن السالمونيلا والشايجيلا غير مخمرة للسكر فتظهر كمستعمرات عديمة اللون كما سبق ذكره .
بيئة Leifson selenite broth أو Mueller tetrathionate broth :
تحتوي على مواد كيميائية مثل Citrate , desoxycholate , tetrathionate تمنع نمو البكتيريا الموجبة لجرام وتنشط نمو السالمونيلا والشايجيلا .
========================
تكون القناة الهضمية عند المواليد معقمة وتبدأ الجراثيم بالدخول إليها عبر الطعام والشراب فيتكون مجتمعاً ميكروبياً يتعايش مع الإنسان داخل جهازه الهضمي وهو ما يعرف normal flora ويزداد عدد هذه الكائنات كلما اتجهنا إلى أسفل الجهاز الهضمي بالرغم من وجود الحمض المعوي ووجود إنزيم الببسين الهاضم للمكونات البروتينية ولكن يزداد هذا العدد في الأمعاء الدقيقة والغليظة أكثر لوجود المواد الغذائية داخلها لمدة طويلة مما يعطي فرصة لهذه الكائنات بالزيادة العددية لها .
وتحدث التهابات القناة الهضمية نتيجة الإصابة بعدة أنواع من المسببات كالبكتيريا والطفيليات والفيروسات فيحدث ألم أو غثيان أو قيئ أو إسهال وقد يصاحب ذلك الحمى كعرض من أعراض التهاب القناة الهضمية .
الجراثيم الممرضة التي قد توجد في الجهاز الهضمي :
----------------------------------
1- الفيروسات مثل Rotavirus و Norwalk agentvirus و Adenovirus .
2- الطفيليات Parasite مثل :
Entamoeba histolytica و Giardia lamblia .
3- البكتيريا ومنها حسب الجدول التالي :
الأنواع الأكثر شيوعاً -----الأنواع الأقل شيوعاً
Salmonella ----- Staphylococcus aureus
Shigella ----- E.coli
Vibrio spp. ----- Clostridium perfringens
Yersinia enterocolitica ----- Aeromonas
Cambylobacter jejuni------ Bacillus cereus
Mycobacterium tuberculosis
وتستخدم عدة عينات للكشف عن مسببات الإلتهاب مثل :
1- مسحة من المستقيم rectal swab أو من فتحة الشرج .
2- خزعة من الأمعاء Gastric biopsy .
3- الدم للزراعة أو للكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم .
4- البراز stool وهي الأكثر شيوعاً .
----------------------''
مراحل فحص عينة البراز :
1- الفحص الظاهري macroscopic examination :
يلاحظ قوام ولون العينة ووجود المخاط والدم وأطوار الديدان وذلك بالعين المجردة .
2- الفحص المجهري microscopic examination :
يعمل شريحة من عينة البراز بطريقة التحضير الرطب إذا كان المسبب من الفطريات مثل Candida spp. أو الطفيليات فيلاحظ أطوارها مثل الديدان والأميبا وغيرها .
كما ويستخدم الميكروسكوب لملاحظة خلايا الدم الحمراء والبيضاء دلالة على وجود الألتهاب.
3- زراعة عينة البراز :
تستخدم هذه الخطوة لعزل مسبب المرض خاصة البكتيريا ولابد من ملاحظة ما يلي :
1- لاتزرع عينة البراز في الظروف اللاهوائية لأن معظم الساكن الطبيعي من البكتيريا في الأمعاء لاهوائي ومسببات المرض هي من النوع الهوائي الإختياري .
2- استخدام الأوساط الإختيارية والتفريقية لتثبيط الساكن الطبيعي وتنمية البكتيريا المسببة للمرض فقط . ويجب أن تكون هذه الأوساط الغذائية تغطي جميع أنواع البكتيريا الشائعة المسببة للمرض..
-------
3- يمكن استخدام صبغة جرام لمعرفة كون المرض ناتجاً عن البكتيريا نفسها أم عن السموم التي تفرزها ولاتستخدم هذه الصبغة كمرحلة تشخيصية لكثرة الأنواع البكتيرية المسببة لالتهابات الأمعاء .
يفضل عزل الأنواع المختلفة على بيئات خاصة كما سيرد ( وهي الطريقة الدارجة في المختبرات ) :
أ- عزل بكتيريا Salmonella and Shigella :
ويتم عزل هذين النوعين من البكتيريا على عدة أوساط وهي :
1- تستخدم أوساط مفرقة واختيارية جزئية مثل Macconkey agar أو EMB حيث يعتبر هذين الوسطين من الأوساط المفرقة التي تميز بين البكتيريا الموجبة والسالب لصبغة جرام حيث ينمو عليها البكتيريا السالبة لجرام فقط كما أنها تميز البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير المخمرة لاحتواء هذين الوسطين على اللاكتوز في تركيبهما . فالبكتيريا المخمرة للاكتوز تظهر كمستعمرات وردية وغير المخمرة تظهر مستعمراتها شفافة غير ملونة وتعتبر كل من Salmonella and Shigella غير مخمرة للاكتوز لذا تكون مستعمراتها شفافة غير ملونة على هذين الوسطين .
2- تستخدم البيئات التالية كونها مثبطة للساكن الطبيعي في الأمعاء وتنمي Salmonella and Shigella فقط وهي :
تزرع العينة على بيئة Salmonella Shigella agar و Desoxy cohlate citrate agar و Kauffmann-brilliant green agar تمنع الأخيرة نمو كثير من البكتيريا المعوية وخاصة E.coli and Proteus وتسمح بنمو السالمونيلا والشايجيلا . وتعمل هذه البيئات كمفرق للبكتيريا المخمرة للسكر والتي تظهر كمستعمرات وردية اللون وبما أن السالمونيلا والشايجيلا غير مخمرة للسكر فتظهر كمستعمرات عديمة اللون كما سبق ذكره .
بيئة Leifson selenite broth أو Mueller tetrathionate broth :
تحتوي على مواد كيميائية مثل Citrate , desoxycholate , tetrathionate تمنع نمو البكتيريا الموجبة لجرام وتنشط نمو السالمونيلا والشايجيلا .
علم التحليلات المرضية
Photo
بيئة Hektoen enteric agar :
يعتبر هذا الوسط اختياري لاحتوائه على تركيز عال من أملاح الصفراء Bile salt كما يعتبر وسطاً مفرقاً نظراً لاحتوائه على الكربوهيدرات فيفرق بين البكتيريا المخمرة للسكر ومنتجة لغاز H2S عن غيرها من الأنواع .
يكون لون هذا الوسط في العادة أخضراً وتظهر المستعمرات المخمرة للسكر باللون الأصفر .
وبما أن Salmonella and Shigella غير مخمرة للسكريات لذا تظهر مستعمراتها شفافة عديمة اللون . ولكن تظهر مستعمرات Salmonella فقط على هذه البيئة في منتصفها نقطة سوداء بسبب انتاج غاز H2Sالذي يترسب باللون الأسود على المستعمرة وهذه الخاصية تميز بكتيريا Salmonell عن Shigella .
-------------------
ملاحظة : تشترك صفة إنتاج غاز H2S مع بكتيريا Salmonell كل من بكتيريا Proteus , Providencia , Morganell .
بيئة Xylose lysin deoxy cholate ( XLD ) :
هذه البيئة ذات لون أحمر يتحول للون الأصفر عند نمو بكتيريا مخمرة للسكر عليه ويعتبر وسط ملائم لعزل بكتيريا Sigella .
3- تستخدم بيئات خاصة عالية الإختيارية ومفرقة بشكل خاص لبكتيريا Salmonella and Shigella مثل بيئة Bismuth sulfite agar الخاصة بتنمية بكتيريا Salmonella فقط لاحتوائه على تركيز عالي من صبغة Brilliant green وأملاح Bismuth فيكون لونه رمادياً لامعاً . وعند نمو بكتيريا Salmonella typhi تظهر مستعمراتها بلون أسود محاطة بمنطقة خضراء لامعة وبقية الأنواع من هذه البكتيريا ( Salmonella ) فتظهر إما شفافة أو خضراء أو سوداء .
4- تستخدم بيئات اختيارية إغنائية وهذه الأوساط سائلة تستخدم للقضاء على كافة أنواع البكتيريا الموجودة في عينة البراز وتنشط نمو بكتيريا Salmonella و Shigella وذلك بحقن كمية بسيطة من البراز غي البيئة ثم تحضينها لمدة 10 – 18 ساعة ثم يتم عمل زراعة أخرى sub culture على أوساط مفرقة للتمييز بين بكتيريا Salmonella و Shigella .
ومن هذه الأوساط Selenite broth , Tetrathionate broth , GN broth .
====================
خطوات عزل وزراعة البكتيريا من عينة البراز :
1- خذ كمية من البراز بواسطة ماسحة قطنية معقمة .
2- ازرع العينة بالتخطيط بواسطة الماسحة القطنية على وسطين من الأوساط التالية مع تفضيل أن يكون أحدهما خاص ببكتيريا Salmonella , Shigella .
مثل SS agar , Hekton enteric agar , Brilliant green agar , Desoxy cholate citrate agar .
ويفضل زرع عينة البراز في وسط إغنائي Selective enrichment media مثل Selenite broth أو GN broth وبعد التحضين 18 ساعة تقريباً يعمل تخطيط على أحدى البيئات السالفة الذكر بواسطة إبرة التلقيح .
3- تزرع العينة من الوسط الإغنائي أيضاً على بيئة EMB أو Macconkey agar أو Desoxycholate agar .
4- تزرع العينة أيضاً على بيئة Bismuth sulfite agar لعزل بكتيريا التيفوئيد وتشخيصها إن وجدت .
5- يتم تحضين الأوساط المزروعة لمدة 24 ساعة عند 35 ْم وقد يلزم بيئة Bismuth فترة أطول .
النتائج : تدرس الأطباق المزروعة تحت إضاءة جيدة للبحث عن النتائج التالية :
تظهر مستعمرات Salmonella , Shigella شفافة على الأوساط السابقة وتظهر مستعمرات Salmonella typhi سوداء اللون على بيئة Bismuth sulfate agar .
===================
عزل بكتيريا Yersinia enterocolitica :
يستخدم وسط Cefsulodin irgasan novobiocin ( CIN ) agar كوسط اختياري خاص لعزل بكتيريا Yersinia من عينة البراز وذلك لاحتوائه على مواد غذائية خاصة لهذه البكتيريا بالإضافة للمضادات الحيوية .
يتم زراعة العينة على الوسط السابق ثم يحضن لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة الغرفة . وبعد فترة التحضين تظهر مستعمرات Yersinis بلون زهري لامع ذات مركز أحمر .
وتظهر بعض أنواع البكتيريا هذه الصفة مثل Citrobacter , Aeromonas وللتمييز بينها تزرع على وسط Blood agar ثم نقوم بعمل الإختبارات البيوكيميائية . حيث أن Yersinia تعطي نتيجة سالبة لفحص الأكسيديز وبكتيريا Aeromonas تعطي نتيجة موجبة .
يمكن عزل بكتيريا Yersinis enterocolitica على وسط Blood agar , Macconkey agar حيث تنمو هذه البكتيريا على بيئة آجار الدم خلال 24 ساعة مكونة مستعمرات صغيرة سريعة النمو ومتحركة عند درجة حرارة الغرفة وهي غير مخمرة للاكتوز وتعطي نتيجة سالبة لصبغة جرام واختبار الأكسيديز وتعطي نتيجة موجبة لفحص Urease .
=================
عزل بكتيريا Vibrio cholera :
تنمو هذه البكتيريا المسببة لمرض الكوليرا على عدة أوساط ولكن بيئة Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar ( TCBS ) من أفضل الأوساط المميزة لهذه البكتيريا حيث تظهر بكتيريا Vibrio cholera كمستعمرات صفراء اللون بينماالنوع
يعتبر هذا الوسط اختياري لاحتوائه على تركيز عال من أملاح الصفراء Bile salt كما يعتبر وسطاً مفرقاً نظراً لاحتوائه على الكربوهيدرات فيفرق بين البكتيريا المخمرة للسكر ومنتجة لغاز H2S عن غيرها من الأنواع .
يكون لون هذا الوسط في العادة أخضراً وتظهر المستعمرات المخمرة للسكر باللون الأصفر .
وبما أن Salmonella and Shigella غير مخمرة للسكريات لذا تظهر مستعمراتها شفافة عديمة اللون . ولكن تظهر مستعمرات Salmonella فقط على هذه البيئة في منتصفها نقطة سوداء بسبب انتاج غاز H2Sالذي يترسب باللون الأسود على المستعمرة وهذه الخاصية تميز بكتيريا Salmonell عن Shigella .
-------------------
ملاحظة : تشترك صفة إنتاج غاز H2S مع بكتيريا Salmonell كل من بكتيريا Proteus , Providencia , Morganell .
بيئة Xylose lysin deoxy cholate ( XLD ) :
هذه البيئة ذات لون أحمر يتحول للون الأصفر عند نمو بكتيريا مخمرة للسكر عليه ويعتبر وسط ملائم لعزل بكتيريا Sigella .
3- تستخدم بيئات خاصة عالية الإختيارية ومفرقة بشكل خاص لبكتيريا Salmonella and Shigella مثل بيئة Bismuth sulfite agar الخاصة بتنمية بكتيريا Salmonella فقط لاحتوائه على تركيز عالي من صبغة Brilliant green وأملاح Bismuth فيكون لونه رمادياً لامعاً . وعند نمو بكتيريا Salmonella typhi تظهر مستعمراتها بلون أسود محاطة بمنطقة خضراء لامعة وبقية الأنواع من هذه البكتيريا ( Salmonella ) فتظهر إما شفافة أو خضراء أو سوداء .
4- تستخدم بيئات اختيارية إغنائية وهذه الأوساط سائلة تستخدم للقضاء على كافة أنواع البكتيريا الموجودة في عينة البراز وتنشط نمو بكتيريا Salmonella و Shigella وذلك بحقن كمية بسيطة من البراز غي البيئة ثم تحضينها لمدة 10 – 18 ساعة ثم يتم عمل زراعة أخرى sub culture على أوساط مفرقة للتمييز بين بكتيريا Salmonella و Shigella .
ومن هذه الأوساط Selenite broth , Tetrathionate broth , GN broth .
====================
خطوات عزل وزراعة البكتيريا من عينة البراز :
1- خذ كمية من البراز بواسطة ماسحة قطنية معقمة .
2- ازرع العينة بالتخطيط بواسطة الماسحة القطنية على وسطين من الأوساط التالية مع تفضيل أن يكون أحدهما خاص ببكتيريا Salmonella , Shigella .
مثل SS agar , Hekton enteric agar , Brilliant green agar , Desoxy cholate citrate agar .
ويفضل زرع عينة البراز في وسط إغنائي Selective enrichment media مثل Selenite broth أو GN broth وبعد التحضين 18 ساعة تقريباً يعمل تخطيط على أحدى البيئات السالفة الذكر بواسطة إبرة التلقيح .
3- تزرع العينة من الوسط الإغنائي أيضاً على بيئة EMB أو Macconkey agar أو Desoxycholate agar .
4- تزرع العينة أيضاً على بيئة Bismuth sulfite agar لعزل بكتيريا التيفوئيد وتشخيصها إن وجدت .
5- يتم تحضين الأوساط المزروعة لمدة 24 ساعة عند 35 ْم وقد يلزم بيئة Bismuth فترة أطول .
النتائج : تدرس الأطباق المزروعة تحت إضاءة جيدة للبحث عن النتائج التالية :
تظهر مستعمرات Salmonella , Shigella شفافة على الأوساط السابقة وتظهر مستعمرات Salmonella typhi سوداء اللون على بيئة Bismuth sulfate agar .
===================
عزل بكتيريا Yersinia enterocolitica :
يستخدم وسط Cefsulodin irgasan novobiocin ( CIN ) agar كوسط اختياري خاص لعزل بكتيريا Yersinia من عينة البراز وذلك لاحتوائه على مواد غذائية خاصة لهذه البكتيريا بالإضافة للمضادات الحيوية .
يتم زراعة العينة على الوسط السابق ثم يحضن لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة الغرفة . وبعد فترة التحضين تظهر مستعمرات Yersinis بلون زهري لامع ذات مركز أحمر .
وتظهر بعض أنواع البكتيريا هذه الصفة مثل Citrobacter , Aeromonas وللتمييز بينها تزرع على وسط Blood agar ثم نقوم بعمل الإختبارات البيوكيميائية . حيث أن Yersinia تعطي نتيجة سالبة لفحص الأكسيديز وبكتيريا Aeromonas تعطي نتيجة موجبة .
يمكن عزل بكتيريا Yersinis enterocolitica على وسط Blood agar , Macconkey agar حيث تنمو هذه البكتيريا على بيئة آجار الدم خلال 24 ساعة مكونة مستعمرات صغيرة سريعة النمو ومتحركة عند درجة حرارة الغرفة وهي غير مخمرة للاكتوز وتعطي نتيجة سالبة لصبغة جرام واختبار الأكسيديز وتعطي نتيجة موجبة لفحص Urease .
=================
عزل بكتيريا Vibrio cholera :
تنمو هذه البكتيريا المسببة لمرض الكوليرا على عدة أوساط ولكن بيئة Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar ( TCBS ) من أفضل الأوساط المميزة لهذه البكتيريا حيث تظهر بكتيريا Vibrio cholera كمستعمرات صفراء اللون بينماالنوع
علم التحليلات المرضية
Photo
Vibrio parahaemolyticus يعطي مستعمرات خضراء اللون على هذا الوسط .
=================
عزل بكتيريا Campylobacter :
تستخدم أوساط اختيارية خاصة بتنمية هذه البكتيريا مثل Campy-blood agar
و Skirrows media حيث تزرع العينة على الوسط ثم تحضن عند درجة 42 ْم لمدة 48 ساعة بوجود 10 % ثاني أكسيد الكربون .
ويعتبر وسط Campy-blood agar أفضل في تنمية بكتيريا Compylobacter jejuni بينما الآخر قد يستعمل لتنمية بقية أنواع هذه البكتيريا .
==============
عزل بكتيريا Helicobacter pylori :
تسبب هذه البكتيريا قرحة المعدة والإثنا عشر وتعزل بأخذ خزعة من مكان التقرح ثم إجراء أحد الفحوصات التالية عليها :
1- عمل مسحة من النسيج المأخوذ ( الخزعة ) وصبغها بصبغة جمسا Giemsa stane لمشاهدة البكتيريا التي تكون منحنية أو لولبية الشكل .
2- تزرع هذه البكتيريا على بيئة Campy-blood agar أو Skirrows media مضافاً لها المضادات الحيوية التالية Trimethoprim , Vancomycin .
ويمكن زراعة العينة على بيئة Chocolate agar مضافاً لها بعض المضادات الحيوية لقتل الكائنات الملوثة للعينة مثل Amphotericin , Nalidixc acid , Vancomycin . ثم تحضن الأوساط المزروعة عند درجة 37 ْم لمدة 3 - 6 أيام فتظهر مستعمرات لامعة ذات قطر يتراوح بين 1 – 2 ملم عند وجود هذه البكتيريا .
3- تنتج هذه البكتيريا إنزيم Urease بقوة لذلك يمكن وضع النسيج في بيئة سائلة Urease media المحتوية على اليوريا بحيث يؤدي إنتاج البكتيريا لإنزيم اليورييز إلى تغير لون الوسط خلال 15 – 30 دقيقة من وضع العينة .
==============
عزل بكتيريا E.coli :
تعتبر من الفلورا الطبيعية التي تعيش في أمعاء الإنسان إلا أن بعض أنواعها تسبب الإسهال لدى الأطفال حديثي الولادة بسبب إفراز السموم مثل النوع المصلي E.coli O157:H7 هو أكثرها شيوعاً .
ويتم زراعتها بأخذ مسحة شرجية أو عينة من البراز وزراعتها على بيئة Blood agar و أوساط اختيارية أخرى مثل Macconkey agar و EMB ثم تحضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وعند ظهور مستعمرات هذه البكتيريا يؤخذ جزء منها ويعرض لأجسام مضادة خاصة بكل نوع مصلي لوحده من أنواع E.coli على شريحة بحيث تعطي النتيجة الإيجابية تخثر للعينة Agglutination . كما يمكن زراعة العينة على بيئة Sorbitol macconkey agar حيث أن 95 % من أنواع بكتيريا E.coli قادرة على تخمير سكر السوربيتول بينما النوع المصلي E.coli O157:H7 يعطي نتيجة سلبية لهذا الفحص .
=================
عزل بكتيريا السل Mycobacterium tuberculosis :
في بعض حالات السل الرئوي وفي حال صعوبة أخذ عينة من البلغم للأشخاص المصابين بهذا المرض يمكن أخذ عينة من البراز لتشخيص مرض السل فيتم زراعة العينة على بيئة Lowenstein-jensen media .
=================
عزل البكتيريا العنقودية الممرضة :
نبحث في هذا العزل على البكتيريا العنقودية Staph. الموجبة لفحص Coagulase فيستخدم لذلك بيئة غنية بأملاح كلوريد الصوديوم مثل Staph. Medium -110 أو Mannitol salt agar .
=================
عزل الفطريات :
قد تتواجد أنواع من الفطريات في الأمعاء مثل Candida albicans بشكل يشبه خلايا الخميرة بشكل طبيعي ولكن عند ضعف مناعة الجسم قد يزداد عددها مما قد يسبب مرضاً . ومما هو جدير بالذكر أن وجود خلايا كالخميرة ليس ذو دلالة مرضية بينما وجودها ووجود خيوط فطرية في العينة يعطي دلالة على المرض .
ويمكن الكشف عنها بعمل تحضير رطب ومشاهدته بواسطة المجهر . كما ويمكن زراعة العينة على أوساط خاصة بالفطريات مثل SDA ( Sugar dextrose agar ) ثم تحضن عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وتظهر مستعمرات Candida بيضاء حليبية مشابهة لمستعمرات البكتيري.
================
#Admin : Saif kh
================
=================
عزل بكتيريا Campylobacter :
تستخدم أوساط اختيارية خاصة بتنمية هذه البكتيريا مثل Campy-blood agar
و Skirrows media حيث تزرع العينة على الوسط ثم تحضن عند درجة 42 ْم لمدة 48 ساعة بوجود 10 % ثاني أكسيد الكربون .
ويعتبر وسط Campy-blood agar أفضل في تنمية بكتيريا Compylobacter jejuni بينما الآخر قد يستعمل لتنمية بقية أنواع هذه البكتيريا .
==============
عزل بكتيريا Helicobacter pylori :
تسبب هذه البكتيريا قرحة المعدة والإثنا عشر وتعزل بأخذ خزعة من مكان التقرح ثم إجراء أحد الفحوصات التالية عليها :
1- عمل مسحة من النسيج المأخوذ ( الخزعة ) وصبغها بصبغة جمسا Giemsa stane لمشاهدة البكتيريا التي تكون منحنية أو لولبية الشكل .
2- تزرع هذه البكتيريا على بيئة Campy-blood agar أو Skirrows media مضافاً لها المضادات الحيوية التالية Trimethoprim , Vancomycin .
ويمكن زراعة العينة على بيئة Chocolate agar مضافاً لها بعض المضادات الحيوية لقتل الكائنات الملوثة للعينة مثل Amphotericin , Nalidixc acid , Vancomycin . ثم تحضن الأوساط المزروعة عند درجة 37 ْم لمدة 3 - 6 أيام فتظهر مستعمرات لامعة ذات قطر يتراوح بين 1 – 2 ملم عند وجود هذه البكتيريا .
3- تنتج هذه البكتيريا إنزيم Urease بقوة لذلك يمكن وضع النسيج في بيئة سائلة Urease media المحتوية على اليوريا بحيث يؤدي إنتاج البكتيريا لإنزيم اليورييز إلى تغير لون الوسط خلال 15 – 30 دقيقة من وضع العينة .
==============
عزل بكتيريا E.coli :
تعتبر من الفلورا الطبيعية التي تعيش في أمعاء الإنسان إلا أن بعض أنواعها تسبب الإسهال لدى الأطفال حديثي الولادة بسبب إفراز السموم مثل النوع المصلي E.coli O157:H7 هو أكثرها شيوعاً .
ويتم زراعتها بأخذ مسحة شرجية أو عينة من البراز وزراعتها على بيئة Blood agar و أوساط اختيارية أخرى مثل Macconkey agar و EMB ثم تحضن الأطباق عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وعند ظهور مستعمرات هذه البكتيريا يؤخذ جزء منها ويعرض لأجسام مضادة خاصة بكل نوع مصلي لوحده من أنواع E.coli على شريحة بحيث تعطي النتيجة الإيجابية تخثر للعينة Agglutination . كما يمكن زراعة العينة على بيئة Sorbitol macconkey agar حيث أن 95 % من أنواع بكتيريا E.coli قادرة على تخمير سكر السوربيتول بينما النوع المصلي E.coli O157:H7 يعطي نتيجة سلبية لهذا الفحص .
=================
عزل بكتيريا السل Mycobacterium tuberculosis :
في بعض حالات السل الرئوي وفي حال صعوبة أخذ عينة من البلغم للأشخاص المصابين بهذا المرض يمكن أخذ عينة من البراز لتشخيص مرض السل فيتم زراعة العينة على بيئة Lowenstein-jensen media .
=================
عزل البكتيريا العنقودية الممرضة :
نبحث في هذا العزل على البكتيريا العنقودية Staph. الموجبة لفحص Coagulase فيستخدم لذلك بيئة غنية بأملاح كلوريد الصوديوم مثل Staph. Medium -110 أو Mannitol salt agar .
=================
عزل الفطريات :
قد تتواجد أنواع من الفطريات في الأمعاء مثل Candida albicans بشكل يشبه خلايا الخميرة بشكل طبيعي ولكن عند ضعف مناعة الجسم قد يزداد عددها مما قد يسبب مرضاً . ومما هو جدير بالذكر أن وجود خلايا كالخميرة ليس ذو دلالة مرضية بينما وجودها ووجود خيوط فطرية في العينة يعطي دلالة على المرض .
ويمكن الكشف عنها بعمل تحضير رطب ومشاهدته بواسطة المجهر . كما ويمكن زراعة العينة على أوساط خاصة بالفطريات مثل SDA ( Sugar dextrose agar ) ثم تحضن عند 37 ْم لمدة 24 ساعة وتظهر مستعمرات Candida بيضاء حليبية مشابهة لمستعمرات البكتيري.
================
#Admin : Saif kh
================
#Culture_Media :
.
.
.
1-#Chocolate Agar :
.
بيئة غنية Enriched Media تنمو عليها أغلب البكتيريا تحتوي على عوامل X و V الناتجة من تحلل كريات الدم الحمراء RBCs والتي يمكن من خلالها نمو :
.
Heamophilus spp
Neisseriae spp
.
والتي تعتبر هذه الأنواع من البكتيريا صعبة النمو Fastidious
.
.
.
.
.
.
2-#BloodAgar :
بيئة غنية Enriched Media تنمو عليها معظم البكتيريا
.
بيئة تفريقية Differential بين أنواع البكتيريا المحللة للدم عن طريق :
.
* التحلل الكامل للدم
#Betahemolytic
مثل :
Streptococcus Pyogenes
Sterptococcus agalactiae
.
.
.
* أو التحلل الجزئي للدم
#Alpha hemolytic
مثل:
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus viridans
.
.
.
*أو عدم التحلل للدم:
#Nonhemolytic
مثل :
Streptococcus Faecalis
Streptococcus bovis
.
.
.
.
.
3-#MacConkeyAgar :
بيئة تفريقية للتفريق بين البكتيريا المخمرة للاكتوز Lactose fermenting والتي تأخذ اللون الوردي مثل :
-E.coli
-Klebsiella
-Enterobacte
-Citrobacter
.
وبين البكتيريا الغير مخمرة للاكتوز
Non-lactose fermenting
والتي ليس لها لون
شفاف مثل :
-Proteus
-Salmonella
-Shigella
.
تحتوي على Crystal violet أو Bile Salts
.
بحيث تسمح للبكتيريا السالبة لصبغة جرام بالنمو وتثبط نمو الموجبة لصبغة جرام
.
.
.
.
.
4- Cystine Lactose electrolyte deficient #CLED:
.
وسط لزراعة عينات الجهاز البولي
.
بيئة تفريقية للتفريق بين البكتيريا المخمرة للاكتوز Lactose fermenting والتي تأخذ اللون الأصفر مثل E.coli
.
وبين البكتيريا الغير مخمرة للاكتوز
Non -lactose fermenting
والتي ليس لها لون : شفاف مثل : Acnitobacter
.
بسبب وجود الكاشف Bromo -thymol blue
.
لها نفس وظيفة الـ MacConkey
.
.
.
.
.
5- Xylose lysine deoxycholate : #XLD:
.
بيئة اختيارية تفريقية لـ Salmonella و Shigella
.
حيث أن الـ Salmonella تأخذ اللون الوردي لوجود Phenol Red مع وجود لون أسود في المركز نتيجة تحلل مواد موجودة في البيئة ينتج عنها غازH2S
.
والـ Shigella تأخذ مستعمراتها اللون الوردي فقط
.
.
.
.
.
6- Salmonella Shigella Agar : #S.S.A :
.
بيئة اختيارية لا تسمح بنمو البكتيريا الموجبة لصبغة جرام وبعض البكتيريا السالبة لصبغة جرام ماعدا
Salmonella
Shigella
بسبب وجود Na -citrate & bile salts
.
بيئة تفريقية لـ Salmonella و Shigella
.
حيث أن الـ Salmonella تأخذ لون البيئة (شفاف) مع وجود لون أسود في المركز نتيجة تحلل مواد موجودة في البيئة ينتج عنها غاز H2S
.
والـ Shigella تأخذ مستعمراتها لون الوسط (شفاف)
.
.
.
.
.
7- Mannitol salt Agar : #MSA :
بيئة تفريقيه للتفريق بين
Staphylococcus species و Staphylococcus aureus
.
التي تخمر المانيتول بتأثيرها على لون الكاشفPhenol red وتعطي اللون الأصفر الذهبي بينما الـ Staph الأخرى لا تخمر المانيتول
.
بيئة اختيارية لأن تركيز الأملاح العالي Nacl 7.5% الموجود فيه يثبط نمو الميكروبات الأخرى
.
.
.
.
8- Thiosulphate citrate bile salt sucrose Agar #TCBS:
.
بيئة اختيارية لعزل الكوليرا Vibrio Cholera
.
تثبط نمو معظم الـ Enterbacteria والبكتيريا الموجبة لصبغة جرام بسبب احتوائها على مواد مثبطة وكذلك قلوية PH الوسط العالية
.
.
.
.
9- Mueller Hinton Agar : #MHA :
.
بيئة ضعيفة المواد الغذائية
.
مناسبة لعمل اختبارات الحساسية لأنها لا تحتوي على أية نسب من المواد الكيميائية
.
بحيث لا تتفاعل مع المضادات الحيوية
.
وتحتوى على النشأ الذي يقوم بإمتصاص السموم البكتريه المفرزه حتى لا يحدث تداخل بين سم البكتريا واثر المضاد الحيوي
.
.
.
.
.
10- Bile Esculine :
بيئة تفريقية بين الأنواع المختلفة من الـStreptococcus
و الـ Enterococcus
Strept Faecalis.
.
التي تفرز عند نموها على هذه البيئة إنزيما يفكك مادة الأسكولين فيتشكل مركب أسكولتين والذي يتحد مع أيونات الحديد الموجود بالبيئة على شكل سترات الحديد ويتكون مركب اسود يدل على وجود Enterococcus
.
أيضاً وجود 4% أملاح الصفراء يثبط الكثير من البكتيريا دون أن يؤثر على نمو Enterococcus
.
.
.
.
.
11- Sabouroud Dextrose Agar : #SDA
.
بيئة اختيارية لنمو الفطريات حيث ان درجة ال PH حمضية علاوة على احتوائها على بعض مضادات الحيويه البكتيري
.
.
.
1-#Chocolate Agar :
.
بيئة غنية Enriched Media تنمو عليها أغلب البكتيريا تحتوي على عوامل X و V الناتجة من تحلل كريات الدم الحمراء RBCs والتي يمكن من خلالها نمو :
.
Heamophilus spp
Neisseriae spp
.
والتي تعتبر هذه الأنواع من البكتيريا صعبة النمو Fastidious
.
.
.
.
.
.
2-#BloodAgar :
بيئة غنية Enriched Media تنمو عليها معظم البكتيريا
.
بيئة تفريقية Differential بين أنواع البكتيريا المحللة للدم عن طريق :
.
* التحلل الكامل للدم
#Betahemolytic
مثل :
Streptococcus Pyogenes
Sterptococcus agalactiae
.
.
.
* أو التحلل الجزئي للدم
#Alpha hemolytic
مثل:
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus viridans
.
.
.
*أو عدم التحلل للدم:
#Nonhemolytic
مثل :
Streptococcus Faecalis
Streptococcus bovis
.
.
.
.
.
3-#MacConkeyAgar :
بيئة تفريقية للتفريق بين البكتيريا المخمرة للاكتوز Lactose fermenting والتي تأخذ اللون الوردي مثل :
-E.coli
-Klebsiella
-Enterobacte
-Citrobacter
.
وبين البكتيريا الغير مخمرة للاكتوز
Non-lactose fermenting
والتي ليس لها لون
شفاف مثل :
-Proteus
-Salmonella
-Shigella
.
تحتوي على Crystal violet أو Bile Salts
.
بحيث تسمح للبكتيريا السالبة لصبغة جرام بالنمو وتثبط نمو الموجبة لصبغة جرام
.
.
.
.
.
4- Cystine Lactose electrolyte deficient #CLED:
.
وسط لزراعة عينات الجهاز البولي
.
بيئة تفريقية للتفريق بين البكتيريا المخمرة للاكتوز Lactose fermenting والتي تأخذ اللون الأصفر مثل E.coli
.
وبين البكتيريا الغير مخمرة للاكتوز
Non -lactose fermenting
والتي ليس لها لون : شفاف مثل : Acnitobacter
.
بسبب وجود الكاشف Bromo -thymol blue
.
لها نفس وظيفة الـ MacConkey
.
.
.
.
.
5- Xylose lysine deoxycholate : #XLD:
.
بيئة اختيارية تفريقية لـ Salmonella و Shigella
.
حيث أن الـ Salmonella تأخذ اللون الوردي لوجود Phenol Red مع وجود لون أسود في المركز نتيجة تحلل مواد موجودة في البيئة ينتج عنها غازH2S
.
والـ Shigella تأخذ مستعمراتها اللون الوردي فقط
.
.
.
.
.
6- Salmonella Shigella Agar : #S.S.A :
.
بيئة اختيارية لا تسمح بنمو البكتيريا الموجبة لصبغة جرام وبعض البكتيريا السالبة لصبغة جرام ماعدا
Salmonella
Shigella
بسبب وجود Na -citrate & bile salts
.
بيئة تفريقية لـ Salmonella و Shigella
.
حيث أن الـ Salmonella تأخذ لون البيئة (شفاف) مع وجود لون أسود في المركز نتيجة تحلل مواد موجودة في البيئة ينتج عنها غاز H2S
.
والـ Shigella تأخذ مستعمراتها لون الوسط (شفاف)
.
.
.
.
.
7- Mannitol salt Agar : #MSA :
بيئة تفريقيه للتفريق بين
Staphylococcus species و Staphylococcus aureus
.
التي تخمر المانيتول بتأثيرها على لون الكاشفPhenol red وتعطي اللون الأصفر الذهبي بينما الـ Staph الأخرى لا تخمر المانيتول
.
بيئة اختيارية لأن تركيز الأملاح العالي Nacl 7.5% الموجود فيه يثبط نمو الميكروبات الأخرى
.
.
.
.
8- Thiosulphate citrate bile salt sucrose Agar #TCBS:
.
بيئة اختيارية لعزل الكوليرا Vibrio Cholera
.
تثبط نمو معظم الـ Enterbacteria والبكتيريا الموجبة لصبغة جرام بسبب احتوائها على مواد مثبطة وكذلك قلوية PH الوسط العالية
.
.
.
.
9- Mueller Hinton Agar : #MHA :
.
بيئة ضعيفة المواد الغذائية
.
مناسبة لعمل اختبارات الحساسية لأنها لا تحتوي على أية نسب من المواد الكيميائية
.
بحيث لا تتفاعل مع المضادات الحيوية
.
وتحتوى على النشأ الذي يقوم بإمتصاص السموم البكتريه المفرزه حتى لا يحدث تداخل بين سم البكتريا واثر المضاد الحيوي
.
.
.
.
.
10- Bile Esculine :
بيئة تفريقية بين الأنواع المختلفة من الـStreptococcus
و الـ Enterococcus
Strept Faecalis.
.
التي تفرز عند نموها على هذه البيئة إنزيما يفكك مادة الأسكولين فيتشكل مركب أسكولتين والذي يتحد مع أيونات الحديد الموجود بالبيئة على شكل سترات الحديد ويتكون مركب اسود يدل على وجود Enterococcus
.
أيضاً وجود 4% أملاح الصفراء يثبط الكثير من البكتيريا دون أن يؤثر على نمو Enterococcus
.
.
.
.
.
11- Sabouroud Dextrose Agar : #SDA
.
بيئة اختيارية لنمو الفطريات حيث ان درجة ال PH حمضية علاوة على احتوائها على بعض مضادات الحيويه البكتيري
🔹️تحاليل البصاق او البلغم :
- يمكننا أن نقسم تحاليل البصاق إلى نوعان أساسية :
النوع الأول يعتمد يستخدم لإكتشاف مرض الدرن (TB ) والنوع الثاني من التحاليل نستخدم طريقة الزراعة والتحضيين لإكتشاف أنواع المايكروبات المتواجدة بشكل عام وبالتالي علاجها.
أولاً : تحليل البصاق ثلاثة أيام متتالية :-
- يشترط تجميع البصاق في الصباح الباكر بعد المضمضة بالماء عدة مرات وقبل الأكــــــــل ولا تقبل عينات اللعابالــ (saliva) لتسهيل إخراج البلغم يمكن إستنشاق بخار الماء الساخن في الصباح ويفضل أن ترسل العينة في نفس اليوم إلى المعمل ليتم إختبارها.
* يجب التأكيد على التالي عند إستلام العينة :
1-أن يكون وعاء تجميع العينة نظيف وغير محتوي على أي إضافات ويفضل إحضارالعينة في الوعاء الذي يعطى من المختبر وليس سواه.
2-أن تكون العينة محتوية على البلغم وإلا فلا تقبل عينة اللعاب.
2-كتابة الإسم على الوعاء المحتوي على العينة.
3-كتابة التاريخ على وعاء العينة.
4-كتابة رقم العينة على الوعاء ( يعني العينة الأولى أو الثانية أو الثالثة ).
*خطوات التحليل :- عبارة عن عمل فيلم من البلغم وصباغته بصبغة الــــZiehl Neelsen stain التي من خلالها يتم صباغة الــ acid fast bacilli من النوع الــ Mycobacterium tuberculosis المسببة لمرض الدرن الرئوي.
1- نقوم بأخذ جزء من البلغم المشكوك فيه ( أي الموجود به شيء مريب ومتغير كلون غريب أو دم ) ونفرده على شريحة زجاجية.
2- نترك الشريحة الزجاجية لتنشف في الهواء.
3- نقوم بالتثبيت للمسحة بواسطة تمرير الشريحة بشكل سريع على الجزء الأعلى من النار حوالي 4-5 مرات.
4- نتبع خطوات الصبغة المرفقة مع الصبغة ، فالصبغات الخاصة بهذا التحليل نوعان :
النوع الأول لانستخدم فيه النار والتسخيين وهذه الصبغة سريعة جدا وحديثة.
النوع الثاني نستخدم النار وهي طريقة قديمة ولكن نتائجها أفضل.
5-بعد الصباغة نقوم بفحص الشريحة تحت الميكروسكوب كاملة بشكل جيد ثم نحدد وجود من عدم وجود الدرن بإكتشافنا أو عدم إكتشافنا للعصيات المنحنية.
6- عند كتابة التقرير يجب أن نكتب في حال لم نجد شيء : No acide fast bacilli is seen ولا نكتب Negative لأنه من الممكن أن لا نجد في الشريحة أو في الجزئية المفحوصة العصيات بينما هي موجودة في جزء آخر من العينة وفي حال وجودها نكتب كالتالي :
+++ one or more bacilli / oil slide
++ ten bacilli / slide
+ from three to nine bacilli / slide
+/- from one to tow bacilli / slide
وبهذا نكون أوجزنا النوع الأول من اختبارات البصاق ،
ثانيا / الزراعة و التحضين :- نحتاج عينة واحدة فقط لنزرعها في الميديا التالية :
1-Blood agar
2-Chocolate agar
3-MacConkey agar
4-SAB agar
لمدة 24 ساعة ثم نقوم بتشخيص نوع البكتيريا في حال النمو بإستخدام صبغة الجرام ثم نستخدم الديسكات المحتوية على المضادات لنرى من منها أكثر نفعا في القضاء على هذه البكتيريا وبالتالي نساعد الطبيب المعالج في تحديد نوع الدواء.
*ملاحظة / هناك نوع خاص للميديا المستخدمة لإكتشاف وجود الدرن وتدعى Lownsten jenseen media فقط نستخدمها للدرن ولكن لباقي الأنواع من البكتيريا نستخدم الميديا السابق ذكرها.
@ska96
Telegram.me/analysis_96
- يمكننا أن نقسم تحاليل البصاق إلى نوعان أساسية :
النوع الأول يعتمد يستخدم لإكتشاف مرض الدرن (TB ) والنوع الثاني من التحاليل نستخدم طريقة الزراعة والتحضيين لإكتشاف أنواع المايكروبات المتواجدة بشكل عام وبالتالي علاجها.
أولاً : تحليل البصاق ثلاثة أيام متتالية :-
- يشترط تجميع البصاق في الصباح الباكر بعد المضمضة بالماء عدة مرات وقبل الأكــــــــل ولا تقبل عينات اللعابالــ (saliva) لتسهيل إخراج البلغم يمكن إستنشاق بخار الماء الساخن في الصباح ويفضل أن ترسل العينة في نفس اليوم إلى المعمل ليتم إختبارها.
* يجب التأكيد على التالي عند إستلام العينة :
1-أن يكون وعاء تجميع العينة نظيف وغير محتوي على أي إضافات ويفضل إحضارالعينة في الوعاء الذي يعطى من المختبر وليس سواه.
2-أن تكون العينة محتوية على البلغم وإلا فلا تقبل عينة اللعاب.
2-كتابة الإسم على الوعاء المحتوي على العينة.
3-كتابة التاريخ على وعاء العينة.
4-كتابة رقم العينة على الوعاء ( يعني العينة الأولى أو الثانية أو الثالثة ).
*خطوات التحليل :- عبارة عن عمل فيلم من البلغم وصباغته بصبغة الــــZiehl Neelsen stain التي من خلالها يتم صباغة الــ acid fast bacilli من النوع الــ Mycobacterium tuberculosis المسببة لمرض الدرن الرئوي.
1- نقوم بأخذ جزء من البلغم المشكوك فيه ( أي الموجود به شيء مريب ومتغير كلون غريب أو دم ) ونفرده على شريحة زجاجية.
2- نترك الشريحة الزجاجية لتنشف في الهواء.
3- نقوم بالتثبيت للمسحة بواسطة تمرير الشريحة بشكل سريع على الجزء الأعلى من النار حوالي 4-5 مرات.
4- نتبع خطوات الصبغة المرفقة مع الصبغة ، فالصبغات الخاصة بهذا التحليل نوعان :
النوع الأول لانستخدم فيه النار والتسخيين وهذه الصبغة سريعة جدا وحديثة.
النوع الثاني نستخدم النار وهي طريقة قديمة ولكن نتائجها أفضل.
5-بعد الصباغة نقوم بفحص الشريحة تحت الميكروسكوب كاملة بشكل جيد ثم نحدد وجود من عدم وجود الدرن بإكتشافنا أو عدم إكتشافنا للعصيات المنحنية.
6- عند كتابة التقرير يجب أن نكتب في حال لم نجد شيء : No acide fast bacilli is seen ولا نكتب Negative لأنه من الممكن أن لا نجد في الشريحة أو في الجزئية المفحوصة العصيات بينما هي موجودة في جزء آخر من العينة وفي حال وجودها نكتب كالتالي :
+++ one or more bacilli / oil slide
++ ten bacilli / slide
+ from three to nine bacilli / slide
+/- from one to tow bacilli / slide
وبهذا نكون أوجزنا النوع الأول من اختبارات البصاق ،
ثانيا / الزراعة و التحضين :- نحتاج عينة واحدة فقط لنزرعها في الميديا التالية :
1-Blood agar
2-Chocolate agar
3-MacConkey agar
4-SAB agar
لمدة 24 ساعة ثم نقوم بتشخيص نوع البكتيريا في حال النمو بإستخدام صبغة الجرام ثم نستخدم الديسكات المحتوية على المضادات لنرى من منها أكثر نفعا في القضاء على هذه البكتيريا وبالتالي نساعد الطبيب المعالج في تحديد نوع الدواء.
*ملاحظة / هناك نوع خاص للميديا المستخدمة لإكتشاف وجود الدرن وتدعى Lownsten jenseen media فقط نستخدمها للدرن ولكن لباقي الأنواع من البكتيريا نستخدم الميديا السابق ذكرها.
@ska96
Telegram.me/analysis_96
Telegram
علم التحليلات المرضية
ادمن القناة @ska96