#詭異的密集往復式航跡
「又在噴了!」
大部份的人看到flightradar網站出現某些未顯示航空公司的航班，以極其詭異的方式，在某市或某地區上空進行密集往復式的飛行。 直覺上就會認為「又是DS在灑毒了」。真的是這樣子嗎？
其實，在空中密集往復式飛行，主要是在執行對地貌作遙測照相的任務。在日本，對照flightradar上面川崎橫濱上空的飛機型號與日本最大的測量飛機機隊Kyoritsu Air Survey公司網站上的飛機機型，完全符合。在台灣，對照flightradar上面高雄上空的飛機與林務局農林航空測量所發表新聞的飛機機型與農林所網頁上面公布的同月份航空攝影取像範圍，皆符合。
所以，這種密集往復式飛行軌跡，是測量飛機正在執行航拍任務的軌跡，不是在灑毒。
Kyoritsu Air Survey公司網站
林務局農林航空測量所FB貼文
農林所公布之2023年4月航拍範圍
#Chemtrail 回目錄
「又在噴了!」
大部份的人看到flightradar網站出現某些未顯示航空公司的航班，以極其詭異的方式，在某市或某地區上空進行密集往復式的飛行。 直覺上就會認為「又是DS在灑毒了」。真的是這樣子嗎？
其實，在空中密集往復式飛行，主要是在執行對地貌作遙測照相的任務。在日本，對照flightradar上面川崎橫濱上空的飛機型號與日本最大的測量飛機機隊Kyoritsu Air Survey公司網站上的飛機機型，完全符合。在台灣，對照flightradar上面高雄上空的飛機與林務局農林航空測量所發表新聞的飛機機型與農林所網頁上面公布的同月份航空攝影取像範圍，皆符合。
所以，這種密集往復式飛行軌跡，是測量飛機正在執行航拍任務的軌跡，不是在灑毒。
Kyoritsu Air Survey公司網站
林務局農林航空測量所FB貼文
農林所公布之2023年4月航拍範圍
#Chemtrail 回目錄
#中國CDC實驗室的新冠病毒分離
A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China, 2019
來自中國肺炎患者的新型冠狀病毒，2019
2020/1/24 線上發佈
2020/2/20 出版
採樣
2019/12/21後採集武漢不明原因肺炎患者4份下呼吸道樣本，包括支氣管肺泡灌洗液。並採集北京已知病因肺炎患者的7份支氣管肺泡灌洗液作為對照。從樣本(包括陰性對照)中提取核酸。通過PCR進行病毒和細菌檢測，分析22種病原體。基因測序發現無法識別的微生物序列，再使用RT-PCR來檢測病毒RNA。
病毒分離培養
樣本添加轉運培養基，然後離心去除細胞碎片。上清液接種於肺癌患者氣道上皮細胞，經NGS測試無特殊病原體。
使用人氣道上皮細胞和Vero E6和Huh-7細胞系分離病毒。人氣道上皮細胞在氣液界面中培養4至6週形成分化良好的極化培養物。
感染前，人氣道上皮細胞頂面用PBS(磷酸鹽緩衝液)清洗3次；將支氣管肺泡灌洗液樣品的150μl上清液接種到細胞培養物的頂端表面。
在37°C下孵育2小時後，用500μl的PBS洗滌10分鐘去除未結合的病毒；人氣道上皮細胞保持在37°C和5%二氧化碳的氣液界面中。
每48小時，將150μl的PBS加於細胞的頂端表面，並在37°C下孵育10分鐘後收集樣品。
頂端樣品在1:3稀釋的小瓶原液中傳代至新細胞。
每天用光學顯微鏡監測細胞的細胞病變效應，並用RT-PCR監測上清液中病毒核酸的存在。傳三代後，製備頂端樣品和人氣道上皮細胞用於透射電子顯微鏡。
結果
人氣道上皮細胞表層96小時後觀察到細胞病變效應(左上圖)。6 天後在Vero E6和Huh-7細胞系中未觀察到特異性細胞病變效應。
病毒直徑大約60~140nm不等，顆粒有非常明顯9~12nm的尖峰。在人氣道上皮超薄切片中發現細胞外游離病毒顆粒和細胞質膜結合囊泡中充滿病毒顆粒的包涵體(右上圖)。
結合Illumina測序和納米孔測序進行克隆和基因測序。從單個標本中獲得超過20,000個病毒讀數，並且大多數重疊群與β冠狀病毒屬B譜系的基因組相匹配，與蝙蝠SARS樣冠狀病毒基因組有85%以上的同一性。使用RT-PCR測定也獲得了陽性結果。
論文連結
#使用人氣道上皮細胞及VeroE6和Huh7細胞系培養病毒
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China, 2019
來自中國肺炎患者的新型冠狀病毒，2019
2020/1/24 線上發佈
2020/2/20 出版
採樣
2019/12/21後採集武漢不明原因肺炎患者4份下呼吸道樣本，包括支氣管肺泡灌洗液。並採集北京已知病因肺炎患者的7份支氣管肺泡灌洗液作為對照。從樣本(包括陰性對照)中提取核酸。通過PCR進行病毒和細菌檢測，分析22種病原體。基因測序發現無法識別的微生物序列，再使用RT-PCR來檢測病毒RNA。
病毒分離培養
樣本添加轉運培養基，然後離心去除細胞碎片。上清液接種於肺癌患者氣道上皮細胞，經NGS測試無特殊病原體。
使用人氣道上皮細胞和Vero E6和Huh-7細胞系分離病毒。人氣道上皮細胞在氣液界面中培養4至6週形成分化良好的極化培養物。
感染前，人氣道上皮細胞頂面用PBS(磷酸鹽緩衝液)清洗3次；將支氣管肺泡灌洗液樣品的150μl上清液接種到細胞培養物的頂端表面。
在37°C下孵育2小時後，用500μl的PBS洗滌10分鐘去除未結合的病毒；人氣道上皮細胞保持在37°C和5%二氧化碳的氣液界面中。
每48小時，將150μl的PBS加於細胞的頂端表面，並在37°C下孵育10分鐘後收集樣品。
頂端樣品在1:3稀釋的小瓶原液中傳代至新細胞。
每天用光學顯微鏡監測細胞的細胞病變效應，並用RT-PCR監測上清液中病毒核酸的存在。傳三代後，製備頂端樣品和人氣道上皮細胞用於透射電子顯微鏡。
結果
人氣道上皮細胞表層96小時後觀察到細胞病變效應(左上圖)。6 天後在Vero E6和Huh-7細胞系中未觀察到特異性細胞病變效應。
病毒直徑大約60~140nm不等，顆粒有非常明顯9~12nm的尖峰。在人氣道上皮超薄切片中發現細胞外游離病毒顆粒和細胞質膜結合囊泡中充滿病毒顆粒的包涵體(右上圖)。
結合Illumina測序和納米孔測序進行克隆和基因測序。從單個標本中獲得超過20,000個病毒讀數，並且大多數重疊群與β冠狀病毒屬B譜系的基因組相匹配，與蝙蝠SARS樣冠狀病毒基因組有85%以上的同一性。使用RT-PCR測定也獲得了陽性結果。
論文連結
#使用人氣道上皮細胞及VeroE6和Huh7細胞系培養病毒
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
#香港大學的新冠病毒分離
Comparative tropism, replication kinetics, and cell damage profiling of SARS-CoV-2 and SARS-CoV with implications for clinical manifestations, transmissibility, and laboratory studies of COVID-19: an observational study
SARS-CoV-2和SARS-CoV的比較趨向性、複製動力學和細胞損傷譜對新冠臨床表現、傳播性和實驗室研究的影響：一項觀察性研究
2020
4/21 線上發佈
5月 出版
方法
研究SARS-CoV-2的細胞易感性、物種嗜性、複製動力學和細胞損傷，與SARS-CoV比較。
樣本病毒分離
將一名新冠患者的鼻咽抽吸標本接種到VeroE6細胞。每天光學顯微鏡監測，並收集細胞上清液用RT-PCR評估病毒載量。72小時後觀察到大量細胞病變。RT-PCR證實了複製陽性。再用奈米孔輔以Sanger法進行全基因組測序。分離出SARS-CoV-2病毒株。SARS-CoV病毒株來自香港大學微生物學系。兩種病毒都在VeroE6細胞中繁殖並通過噬菌斑測定確定滴度，於實驗前傳代3次。
多種細胞系之病毒培養
接種25個不同組織和物種的細胞系與兩種病毒在37°C下以0.1的感染複數(MOI)處理2小時。根據細胞類型維持在EMEM、DMEM或DMEM/F12培養基中。經過常規支原體檢測確保無支原體。
結果
測試9種人類細胞系中，5個易受SARS-CoV-2感染。在Calu3(肺)和Caco2(腸)細胞中最強，支持腹瀉與肺的常見臨床症狀。其次是Huh7(肝)和293T(腎)細胞。U251(神經元)細胞僅檢測到適度複製。SARS-CoV具有相似的細胞嗜性(圖1)。
測試16種非人細胞系中，6個易受SARS-CoV-2感染，包括來自非人靈長類動物(VeroE6、FRhK4和LLCMK2)、貓(CRFK)、兔(RK-13) 和豬(PK-15)。在非人靈長類動物和豬細胞中複製最強(圖2)。SARS-CoV-2引起的細胞損傷比 SARS-CoV少，SARS-CoV-2僅誘導大量VeroE6和FRhK4細胞損傷(圖3-4)。
論文連結
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
Comparative tropism, replication kinetics, and cell damage profiling of SARS-CoV-2 and SARS-CoV with implications for clinical manifestations, transmissibility, and laboratory studies of COVID-19: an observational study
SARS-CoV-2和SARS-CoV的比較趨向性、複製動力學和細胞損傷譜對新冠臨床表現、傳播性和實驗室研究的影響：一項觀察性研究
2020
4/21 線上發佈
5月 出版
方法
研究SARS-CoV-2的細胞易感性、物種嗜性、複製動力學和細胞損傷，與SARS-CoV比較。
樣本病毒分離
將一名新冠患者的鼻咽抽吸標本接種到VeroE6細胞。每天光學顯微鏡監測，並收集細胞上清液用RT-PCR評估病毒載量。72小時後觀察到大量細胞病變。RT-PCR證實了複製陽性。再用奈米孔輔以Sanger法進行全基因組測序。分離出SARS-CoV-2病毒株。SARS-CoV病毒株來自香港大學微生物學系。兩種病毒都在VeroE6細胞中繁殖並通過噬菌斑測定確定滴度，於實驗前傳代3次。
多種細胞系之病毒培養
接種25個不同組織和物種的細胞系與兩種病毒在37°C下以0.1的感染複數(MOI)處理2小時。根據細胞類型維持在EMEM、DMEM或DMEM/F12培養基中。經過常規支原體檢測確保無支原體。
結果
測試9種人類細胞系中，5個易受SARS-CoV-2感染。在Calu3(肺)和Caco2(腸)細胞中最強，支持腹瀉與肺的常見臨床症狀。其次是Huh7(肝)和293T(腎)細胞。U251(神經元)細胞僅檢測到適度複製。SARS-CoV具有相似的細胞嗜性(圖1)。
測試16種非人細胞系中，6個易受SARS-CoV-2感染，包括來自非人靈長類動物(VeroE6、FRhK4和LLCMK2)、貓(CRFK)、兔(RK-13) 和豬(PK-15)。在非人靈長類動物和豬細胞中複製最強(圖2)。SARS-CoV-2引起的細胞損傷比 SARS-CoV少，SARS-CoV-2僅誘導大量VeroE6和FRhK4細胞損傷(圖3-4)。
論文連結
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
#法國Aix_Marseille大學的新冠病毒分離
Culture of SARS-CoV-2 in a panel of laboratory cell lines, permissivity, and differences in growth profile
SARS-CoV-2 在一組實驗室細胞系中的培養、容許度和生長曲線的差異
2020
06/02 投稿
11/20 接受。
2021/1/2 線上發佈
樣本例行繁殖
SARS CoV-2的IHUMI2、IHUMI3、IHUMI669和IHUMI2123病毒株是從人鼻咽拭子中分離，用於所有測試。4代病毒株在VERO E6中生長，在含有4%胎牛血清和 1%L-谷氨酰胺，37 °C、5%CO2下不含抗生素。
多種細胞系的病毒培養
將要測試的34種細胞系置入對應的培養基，不含抗生素並孵育達到亞匯合。過濾0.2 μ後，用10 -1和10 -4稀釋的VERO E6上清液感染 病毒株於這些細胞系上。每天用數位倒置熒光顯微鏡觀察，持續 7 天。在感染後第0天和第7天，收集上清液用於後續定量作RT-PCR測試。每個條件1式3份。對於觀察到CPE效應的細胞，將細胞與10倍稀釋的不同病毒一起孵育，並在37°C下孵育7天。每個條件1式4份。中值組織培養感染劑量(TCID 50 )由Reed和Muench法確定。
結果
在這34個細胞系中，有7個支持SARS-CoV-2增殖(上圖)。除了分離和繁殖病毒的VERO E6外，還有4個非洲綠猴腎細胞系支持病毒的複制(VERO 81、VERO SLAM、MA104和BGM)都產生了明顯的細胞病變效應CPE。
一種來自人類結直腸腺癌(Caco-2)的上皮細胞系支持病毒複製。與對照組相比，Caco-2僅顯示離散，但沒有顯示真正的CPE。
LLC-MK2是一種恒河猴腎上皮細胞系，也未產生明顯的CPE。
討論
VERO E6細胞系(一種高度病毒允許的干擾素缺陷細胞系)可以開發快速分離病毒的方法。
SARS-CoV和SARS-CoV-2可以感染Caco-2細胞系。對於SARS-CoV感染，48小時後出現CPE，而對於SARS-CoV-2感染沒有明顯的細胞損傷。SARS-CoV-2感染Caco-2細胞的這種能力可以解釋為什麼感染該病毒的患者通常會出現胃腸道症狀。先前研究數據與我們觀察到的結果一致。
論文連結
#病毒 回目錄
Culture of SARS-CoV-2 in a panel of laboratory cell lines, permissivity, and differences in growth profile
SARS-CoV-2 在一組實驗室細胞系中的培養、容許度和生長曲線的差異
2020
06/02 投稿
11/20 接受。
2021/1/2 線上發佈
樣本例行繁殖
SARS CoV-2的IHUMI2、IHUMI3、IHUMI669和IHUMI2123病毒株是從人鼻咽拭子中分離，用於所有測試。4代病毒株在VERO E6中生長，在含有4%胎牛血清和 1%L-谷氨酰胺，37 °C、5%CO2下不含抗生素。
多種細胞系的病毒培養
將要測試的34種細胞系置入對應的培養基，不含抗生素並孵育達到亞匯合。過濾0.2 μ後，用10 -1和10 -4稀釋的VERO E6上清液感染 病毒株於這些細胞系上。每天用數位倒置熒光顯微鏡觀察，持續 7 天。在感染後第0天和第7天，收集上清液用於後續定量作RT-PCR測試。每個條件1式3份。對於觀察到CPE效應的細胞，將細胞與10倍稀釋的不同病毒一起孵育，並在37°C下孵育7天。每個條件1式4份。中值組織培養感染劑量(TCID 50 )由Reed和Muench法確定。
結果
在這34個細胞系中，有7個支持SARS-CoV-2增殖(上圖)。除了分離和繁殖病毒的VERO E6外，還有4個非洲綠猴腎細胞系支持病毒的複制(VERO 81、VERO SLAM、MA104和BGM)都產生了明顯的細胞病變效應CPE。
一種來自人類結直腸腺癌(Caco-2)的上皮細胞系支持病毒複製。與對照組相比，Caco-2僅顯示離散，但沒有顯示真正的CPE。
LLC-MK2是一種恒河猴腎上皮細胞系，也未產生明顯的CPE。
討論
VERO E6細胞系(一種高度病毒允許的干擾素缺陷細胞系)可以開發快速分離病毒的方法。
SARS-CoV和SARS-CoV-2可以感染Caco-2細胞系。對於SARS-CoV感染，48小時後出現CPE，而對於SARS-CoV-2感染沒有明顯的細胞損傷。SARS-CoV-2感染Caco-2細胞的這種能力可以解釋為什麼感染該病毒的患者通常會出現胃腸道症狀。先前研究數據與我們觀察到的結果一致。
論文連結
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#澳洲莫爾本大學的新冠病毒分離
Isolation and rapid sharing of the 2019 novel coronavirus (SARS‐CoV‐2) from the first patient diagnosed with COVID‐19 in Australia
從澳洲首例確診為COVID -19 的患者身上分離并快速共享 2019 年新型冠狀病毒(SARS -CoV-2)
2020
02/25 投稿
03/05 接受
04/01 線上發佈
6月 出版
採樣
一名來自中國武漢的58歲男子於 2020/1/19抵達墨爾本，並於1/24因發燒、咳嗽、和進行性呼吸困難住進墨爾本Monash醫療中心。對來自初始鼻咽拭子的材料進行RT-PCR檢測，並分別對痰液、尿液、糞便和血清樣本進行了檢測。確認了SARS-CoV-2的存在。
病毒分離
來自初始鼻咽拭子的材料用於接種Vero/hSLAM細胞系。監測燒瓶中病毒細胞病變效應的發展，每48小時取出140μL等分試樣，以通過實時RT-PCR評估病毒負荷。
病毒純化
對於電子顯微鏡，在4μg/mL胰蛋白酶存在下生長的細胞培養物的4mL上清液用0.5%戊二醛滅活12小時，並通過以1000 g離心3分鐘澄清。上清液用3%磷鎢酸(pH 7.0)進行負染色，並用FEI Tecnai T12電子顯微鏡在80kV下進行檢查。將剩餘的顆粒整體染色並包埋在樹脂中；使用FEI Tecnai F30電子顯微鏡在200kV下檢查70nm切片。
基因定序
從澄清的細胞培養上清液中提取RNA，並通過序列非依賴性單引物擴增(SISPA)隨機擴增cDNA。測序是結合Oxford Nanopore Technologies和Illumina短讀長測序進行的。分離病毒株的基因組序列與其他公開可用的SARS-CoV-2基因組表現出大於99.99%的序列同一性。
結果
接種VERO/hSLAM細胞系2天后，觀察到輕微的細胞病變效應，與未感染的對照細胞系相比，在第6天明顯不同(左圖)。細胞系上清液的RT-PCR測試證實了高病毒載量，表明了病毒感染。電子顯微照片(右圖)顯示直徑為90-110nm的球形和多形性病毒樣顆粒；顆粒顯示出突出的尖峰(9-12nm)，這是冠狀病毒科病毒的特徵。是第一批在中國境外分離的病毒株。
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#論文有提及實驗對照組
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Isolation and rapid sharing of the 2019 novel coronavirus (SARS‐CoV‐2) from the first patient diagnosed with COVID‐19 in Australia
從澳洲首例確診為COVID -19 的患者身上分離并快速共享 2019 年新型冠狀病毒(SARS -CoV-2)
2020
02/25 投稿
03/05 接受
04/01 線上發佈
6月 出版
採樣
一名來自中國武漢的58歲男子於 2020/1/19抵達墨爾本，並於1/24因發燒、咳嗽、和進行性呼吸困難住進墨爾本Monash醫療中心。對來自初始鼻咽拭子的材料進行RT-PCR檢測，並分別對痰液、尿液、糞便和血清樣本進行了檢測。確認了SARS-CoV-2的存在。
病毒分離
來自初始鼻咽拭子的材料用於接種Vero/hSLAM細胞系。監測燒瓶中病毒細胞病變效應的發展，每48小時取出140μL等分試樣，以通過實時RT-PCR評估病毒負荷。
病毒純化
對於電子顯微鏡，在4μg/mL胰蛋白酶存在下生長的細胞培養物的4mL上清液用0.5%戊二醛滅活12小時，並通過以1000 g離心3分鐘澄清。上清液用3%磷鎢酸(pH 7.0)進行負染色，並用FEI Tecnai T12電子顯微鏡在80kV下進行檢查。將剩餘的顆粒整體染色並包埋在樹脂中；使用FEI Tecnai F30電子顯微鏡在200kV下檢查70nm切片。
基因定序
從澄清的細胞培養上清液中提取RNA，並通過序列非依賴性單引物擴增(SISPA)隨機擴增cDNA。測序是結合Oxford Nanopore Technologies和Illumina短讀長測序進行的。分離病毒株的基因組序列與其他公開可用的SARS-CoV-2基因組表現出大於99.99%的序列同一性。
結果
接種VERO/hSLAM細胞系2天后，觀察到輕微的細胞病變效應，與未感染的對照細胞系相比，在第6天明顯不同(左圖)。細胞系上清液的RT-PCR測試證實了高病毒載量，表明了病毒感染。電子顯微照片(右圖)顯示直徑為90-110nm的球形和多形性病毒樣顆粒；顆粒顯示出突出的尖峰(9-12nm)，這是冠狀病毒科病毒的特徵。是第一批在中國境外分離的病毒株。
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#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
#日本NIID的新冠病毒分離
Enhanced isolation of SARS-CoV-2 by TMPRSS2-expressing cells
通過TMPRSS2蛋白基因表現的細胞增強SARS-CoV-2的分離
2020
02/12 審稿
03/05 批准
03/12 出版
方法
嘗試使用組成型TMPRSS2蛋白基因表現的VeroE6/TMPRSS2細胞分離SARS-CoV-2。VeroE6/TMPRSS2細胞中TMPRSS2的信使RNA表達水平比正常人肺組織和其他人細胞系高約10 倍(圖1A)。SARS-CoV-2使用與SARS-CoV相同的受體ACE2，並且ACE2在VeroE6細胞中的表達非常高。
採樣
截至2020/2/10，日本有16名國內確診病例。從7例SARS-CoV-2感染病例中獲得的7份臨床標本(咽拭子或痰液)。
病毒分離培養
標本被接種到VeroE6/TMPRSS2細胞中，每天監測細胞病變效應(CPE)。在7例中的5例中，在感染後2或3天出現明顯的CPE，伴有分離/漂浮(黑色箭頭，圖1B)和合胞體形成(白色箭頭，圖1B)。感染後第3天，5個病例的培養上清液中的病毒滴度為每毫升4.6×10 6至6.8×10 7中位組織培養感染劑量(TCID 50)。通過電子顯微鏡檢測到典型的冠狀病毒顆粒(圖1C)。病例Wk-521的下一代測序(NGS)檢測到來自SARS-CoV-2的幾乎全長基因組序列，同源性>99.9%。
結果
VeroE6/TMPRSS2細胞在SARS-CoV-2分離方面優於本研究中測試的其他細胞系。感染後48小時Vero、Calu-3和A549細胞培養上清液中的病毒RNA含量較低，而使用VeroE6細胞時可測得更高。
然而，VeroE6/TMPRSS2細胞培養上清液中的病毒RNA拷貝數比VeroE6細胞的多100倍以上(圖1D和E)。數據顯示TMPRSS2提高了其進入效率。
用10倍連續稀釋的SARS-CoV-2樣本感染VeroE6和VeroE6/TMPRSS2細胞，並通過間接免疫熒光測定法觀察感染細胞(圖1F) 。結果表明VeroE6/TMPRSS2感染S的細胞數量比VeroE6細胞多10倍。
VeroE6/TMPRSS2細胞系對SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV-2高度敏感，成為全球高危CoV監測的合適貢獻者。
論文連結
#病毒 回目錄
Enhanced isolation of SARS-CoV-2 by TMPRSS2-expressing cells
通過TMPRSS2蛋白基因表現的細胞增強SARS-CoV-2的分離
2020
02/12 審稿
03/05 批准
03/12 出版
方法
嘗試使用組成型TMPRSS2蛋白基因表現的VeroE6/TMPRSS2細胞分離SARS-CoV-2。VeroE6/TMPRSS2細胞中TMPRSS2的信使RNA表達水平比正常人肺組織和其他人細胞系高約10 倍(圖1A)。SARS-CoV-2使用與SARS-CoV相同的受體ACE2，並且ACE2在VeroE6細胞中的表達非常高。
採樣
截至2020/2/10，日本有16名國內確診病例。從7例SARS-CoV-2感染病例中獲得的7份臨床標本(咽拭子或痰液)。
病毒分離培養
標本被接種到VeroE6/TMPRSS2細胞中，每天監測細胞病變效應(CPE)。在7例中的5例中，在感染後2或3天出現明顯的CPE，伴有分離/漂浮(黑色箭頭，圖1B)和合胞體形成(白色箭頭，圖1B)。感染後第3天，5個病例的培養上清液中的病毒滴度為每毫升4.6×10 6至6.8×10 7中位組織培養感染劑量(TCID 50)。通過電子顯微鏡檢測到典型的冠狀病毒顆粒(圖1C)。病例Wk-521的下一代測序(NGS)檢測到來自SARS-CoV-2的幾乎全長基因組序列，同源性>99.9%。
結果
VeroE6/TMPRSS2細胞在SARS-CoV-2分離方面優於本研究中測試的其他細胞系。感染後48小時Vero、Calu-3和A549細胞培養上清液中的病毒RNA含量較低，而使用VeroE6細胞時可測得更高。
然而，VeroE6/TMPRSS2細胞培養上清液中的病毒RNA拷貝數比VeroE6細胞的多100倍以上(圖1D和E)。數據顯示TMPRSS2提高了其進入效率。
用10倍連續稀釋的SARS-CoV-2樣本感染VeroE6和VeroE6/TMPRSS2細胞，並通過間接免疫熒光測定法觀察感染細胞(圖1F) 。結果表明VeroE6/TMPRSS2感染S的細胞數量比VeroE6細胞多10倍。
VeroE6/TMPRSS2細胞系對SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV-2高度敏感，成為全球高危CoV監測的合適貢獻者。
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#病毒 回目錄
#Andrew_Kaufman
#冷靜否認現實的精神科醫生
Jonathan Jarry M.Sc.
24 Sep 2020
安德魯·考夫曼 (Andrew Kaufman) 博士在 COVID-19 大流行初期通過聲稱該病毒不存在而四處傳播。現在，他在公開示威中領導反蒙面者，並告訴數十萬 YouTube 用戶，他們所知道的關於醫學的一切都是錯誤的
人震驚的是，在互聯網上發現一位受歡迎的醫生聲稱闌尾炎——一種可導致敗血症和死亡的常見闌尾炎症——沒什麼大不了的。按照他的說法，就是簡單的便秘，灌腸就能緩解。不過，他說得如此平靜，以至於你可能傾向於相信他。
這位醫生是紐約錫拉丘茲的安德魯·考夫曼 (Andrew Kaufman)。在全球健康大流行期間，他已成為在線否認 COVID 運動的重要代言人。他在 YouTube 上的許多長篇評論都獲得了數十萬的瀏覽量。如果你聽說過冠狀病毒不是真的，科學家們實際上正在檢測“外泌體”，你就會熟悉考夫曼的理論。他遠離醫學的部分原因似乎是閱讀了凱利布羅根 (Kelly Brogan) 的書《你自己的想法》(A Mind of Your Own)，一位精神病學家轉變為病毒否認者和 Goop 貢獻者. 考夫曼經常在 YouTube 上回答觀眾的具體醫學問題，並向他們提供與人體基本知識背道而馳的“信息”，支持骨湯和針對各種疾病的排毒方案。他不是自然療法者；他是一名精神科醫生，在他所在的州擁有有效的醫療執照。
闡明邊緣主張可能會毒害公眾話語，但考夫曼非常受歡迎，因此有必要闡述他的主要理論。他關於“全球主義議程”和導致“脅迫”的“人為危機”的溫和警告助長了 COVID-19 陰謀論者的劇本。
病毒不存在的神話
考夫曼聽起來鎮定自若，知識淵博，反復告訴他的觀眾病毒不是人類疾病的原因。通過觀看數小時的視頻，我看到他否認普通感冒、脊髓灰質炎、艾滋病毒/艾滋病、病毒性肝炎、水痘、COVID-19和麻疹背後存在的病毒。為什麼他反對細菌理論的戰爭是合理的，他最喜歡的例子之一是 Stefan Lanka 的案例，他向聽眾推銷該案例是因為“德國最高法院實際上裁定不存在已被證明存在的麻疹病毒”（來自他對倫敦皇馬的採訪, 時間碼 1:04:00)。事實上，蘭卡提出了一個挑戰：他想要一篇科學論文，該論文本身可以毫無疑問地證明該病毒的存在。當一位名叫大衛·巴登斯的醫生出示了六份共同承擔舉證責任的論文時，蘭卡拒絕付款，法院承認蘭卡可以自由地制定他認為合適的規則，因為這是一項獎勵，他可以將其授予任何人。麻疹病毒非常真實：在我看來，蘭卡的公開挑戰是一個雙贏的局面，以證明他的病毒否認主義。
安德魯·考夫曼 (Andrew Kaufman) 博士在大流行初期聲名鵲起，他聲稱科學家們用電子顯微鏡實際看到的不是新型冠狀病毒，而是外泌體。這個故事很有趣，因為它揭示了考夫曼使用的一個常用策略。在觀察和他喜歡的結論之間架起一座橋樑時，他通常會使用有效的科學來鋪設一些木板。當那座橋快要完工時，他用完了木板並進行了信仰的飛躍，但這種飛躍可能只有專家才能注意到。回到外泌體，考夫曼所說的大部分內容都是正確的。我們的身體是由細胞構成的，您可以將細胞想像成一個肥皂泡。外泌體是一個微小的氣泡，從那個肥皂泡中萌芽並開始漂浮，最終可能與另一個肥皂泡融合。
這些外泌體可以攜帶有效載荷，如遺傳物質，並在我們體內充當轉運體，它們看起來確實非常像許多病毒。事實上，有時病毒會感染細胞，而含有病毒遺傳物質的外泌體會萌芽並繼續感染另一個細胞，就像病毒顆粒一樣！但在這裡，我們到達了橋的盡頭。兩位科學專家在YouTube 視頻中討論了這個問題，並得出結論：“很明顯，外泌體與冠狀病毒之間存在相似之處，但在許多方面卻完全不同。” 考夫曼跳了一大步，聲稱病毒不存在。都是外泌體。
事實上，考夫曼喜歡提到，聲稱發現傳染性病毒的醫生從未能夠滿足科赫的神聖假設。有必要上一堂簡短的歷史課。微生物學家羅伯特·科赫 (Robert Koch) 在維多利亞時代（就在我們真正了解 DNA 和病毒是什麼之前）表示，要證明微生物會導致疾病，您需要將它從患有疾病的生物中分離出來，而不是在沒有微生物的生物中發現它。疾病。如果你把它從一個有它的生物身上拿走，然後把它給一個沒有的生物，它應該會導致疾病，然後你應該能夠分離出它體內的這種微生物。因此，如果科學家沒有對特定病毒進行過這種研究，那麼考夫曼這樣的人就可以聲稱我們只是不知道。
問題是科赫自己意識到要求他的假設每次都得到滿足是錯誤的。他注意到那些沒有症狀的傷寒和霍亂攜帶者。他們有傳染源但沒有疾病。是否證明這些微生物最終沒有引起疾病？不。科赫的假設在歷史上很有趣，但它們基本上已被基於檢測微生物本身的 DNA 或 RNA 的指導方針所取代。
對於那些想要深入研究“考夫曼認為冠狀病毒的遺傳密碼從何而來”的人，請單擊此處
從MD到ND
在我看來，安德魯考夫曼博士現在是一名自然療法醫生。他對一次自然健康諮詢收費 750 美元（高級套餐收費 1,750 美元）。他曾表示， “如果你的骨頭從你的皮膚中伸出來”，醫學技術的進步只會優於自然方法；合成藥物是錯誤的；他聲稱，我們應該簡單地依賴天然分子，其安全性是眾所周知的。和自然療法者一樣，考夫曼到處都能看到毒素。他認為我們從衣服、洗髮水和食物供應中獲得它們。他認為，尿路感染可能是由直腸中“轉移”的毒素引起的到泌尿系統。所以很自然地，他向許多帶著問題來信的人推薦“清洗”。這些神秘的毒素和我們淨化自己的儀式讓我想起了過去的惡魔和驅魔，如果你認為這是一個延伸，過去在刑事司法系統工作過的精神病學家考夫曼認為“惡魔附身實際上可能是某些精神疾病的一個因素”，例如精神分裂症。他的直播流中的許多評論都表現出強烈的宗教熱情——“是的，惡魔是真實的”和“只要與基督同行，即使他們殺了你，你也會得救 [原文如此]！”——如此之多以至於你會認為你正在觀看世界上最鎮定的傳教士。
但考夫曼並不滿足於擁抱自然療法並否認細菌的存在：他不得不暗示這種流行病只是沒有累積起來。他將封鎖稱為“軟禁”和“戒嚴令”的一種形式，剝奪了人們的集會權和宗教信仰權。他曾聲稱疫苗是“裝滿毒藥的注射器”，同時口罩的孔隙太大而無法阻擋“病毒”（無論對他來說這意味著什麼）但又小到足以顯著減少氧氣供應，這在科學上是不成立的感覺。他反問“誰戴口罩？”，但沒有用“醫生、牙醫、護士”來回答。“隱藏東西的人，”他說，“不誠實的人，偷竊的人。” 他最近因拒絕戴口罩而失去了剩餘的兼職醫生工作，此後一直帶領一群未戴口罩的人進入當地企業表明立場。
他擔心這場“人為製造的危機”有一個目標，那就是讓人們依賴政府的施捨，這是“自由”反動派的共同陰謀論信念。為了給這個殉難蛋糕錦上添花，他將比爾·蓋茨與優生學運動聯繫在一起，並在倫敦真實頻道上亮相，這是一個賺取數百萬美元的宣傳自助和陰謀論的視頻頻道，這要歸功於相信爬行動物外星人的前嘉賓大衛艾克-人類混血兒秘密地統治著世界。考夫曼他穿西裝打領帶覺得這次採訪真是太好了。
COVID 否認主義、對排毒療法的信仰、自由主義者呼籲保護個人自由，所有這些比喻都被安德魯·考夫曼博士等不科學的人拼湊成一個弗蘭肯斯坦的怪物。它可能在哪裡結束？考夫曼聽起來平靜、鎮定且不祥，他承諾“如果我們到了 [士兵將你壓倒為你接種疫苗的地步]，我保證我會給出一個‘食譜’，可以減輕被關押的人的痛苦強行擊倒並接種疫苗。”
這個安迪·考夫曼可不是鬧著玩的。
原文連結
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#冷靜否認現實的精神科醫生
Jonathan Jarry M.Sc.
24 Sep 2020
安德魯·考夫曼 (Andrew Kaufman) 博士在 COVID-19 大流行初期通過聲稱該病毒不存在而四處傳播。現在，他在公開示威中領導反蒙面者，並告訴數十萬 YouTube 用戶，他們所知道的關於醫學的一切都是錯誤的
人震驚的是，在互聯網上發現一位受歡迎的醫生聲稱闌尾炎——一種可導致敗血症和死亡的常見闌尾炎症——沒什麼大不了的。按照他的說法，就是簡單的便秘，灌腸就能緩解。不過，他說得如此平靜，以至於你可能傾向於相信他。
這位醫生是紐約錫拉丘茲的安德魯·考夫曼 (Andrew Kaufman)。在全球健康大流行期間，他已成為在線否認 COVID 運動的重要代言人。他在 YouTube 上的許多長篇評論都獲得了數十萬的瀏覽量。如果你聽說過冠狀病毒不是真的，科學家們實際上正在檢測“外泌體”，你就會熟悉考夫曼的理論。他遠離醫學的部分原因似乎是閱讀了凱利布羅根 (Kelly Brogan) 的書《你自己的想法》(A Mind of Your Own)，一位精神病學家轉變為病毒否認者和 Goop 貢獻者. 考夫曼經常在 YouTube 上回答觀眾的具體醫學問題，並向他們提供與人體基本知識背道而馳的“信息”，支持骨湯和針對各種疾病的排毒方案。他不是自然療法者；他是一名精神科醫生，在他所在的州擁有有效的醫療執照。
闡明邊緣主張可能會毒害公眾話語，但考夫曼非常受歡迎，因此有必要闡述他的主要理論。他關於“全球主義議程”和導致“脅迫”的“人為危機”的溫和警告助長了 COVID-19 陰謀論者的劇本。
病毒不存在的神話
考夫曼聽起來鎮定自若，知識淵博，反復告訴他的觀眾病毒不是人類疾病的原因。通過觀看數小時的視頻，我看到他否認普通感冒、脊髓灰質炎、艾滋病毒/艾滋病、病毒性肝炎、水痘、COVID-19和麻疹背後存在的病毒。為什麼他反對細菌理論的戰爭是合理的，他最喜歡的例子之一是 Stefan Lanka 的案例，他向聽眾推銷該案例是因為“德國最高法院實際上裁定不存在已被證明存在的麻疹病毒”（來自他對倫敦皇馬的採訪, 時間碼 1:04:00)。事實上，蘭卡提出了一個挑戰：他想要一篇科學論文，該論文本身可以毫無疑問地證明該病毒的存在。當一位名叫大衛·巴登斯的醫生出示了六份共同承擔舉證責任的論文時，蘭卡拒絕付款，法院承認蘭卡可以自由地制定他認為合適的規則，因為這是一項獎勵，他可以將其授予任何人。麻疹病毒非常真實：在我看來，蘭卡的公開挑戰是一個雙贏的局面，以證明他的病毒否認主義。
安德魯·考夫曼 (Andrew Kaufman) 博士在大流行初期聲名鵲起，他聲稱科學家們用電子顯微鏡實際看到的不是新型冠狀病毒，而是外泌體。這個故事很有趣，因為它揭示了考夫曼使用的一個常用策略。在觀察和他喜歡的結論之間架起一座橋樑時，他通常會使用有效的科學來鋪設一些木板。當那座橋快要完工時，他用完了木板並進行了信仰的飛躍，但這種飛躍可能只有專家才能注意到。回到外泌體，考夫曼所說的大部分內容都是正確的。我們的身體是由細胞構成的，您可以將細胞想像成一個肥皂泡。外泌體是一個微小的氣泡，從那個肥皂泡中萌芽並開始漂浮，最終可能與另一個肥皂泡融合。
這些外泌體可以攜帶有效載荷，如遺傳物質，並在我們體內充當轉運體，它們看起來確實非常像許多病毒。事實上，有時病毒會感染細胞，而含有病毒遺傳物質的外泌體會萌芽並繼續感染另一個細胞，就像病毒顆粒一樣！但在這裡，我們到達了橋的盡頭。兩位科學專家在YouTube 視頻中討論了這個問題，並得出結論：“很明顯，外泌體與冠狀病毒之間存在相似之處，但在許多方面卻完全不同。” 考夫曼跳了一大步，聲稱病毒不存在。都是外泌體。
事實上，考夫曼喜歡提到，聲稱發現傳染性病毒的醫生從未能夠滿足科赫的神聖假設。有必要上一堂簡短的歷史課。微生物學家羅伯特·科赫 (Robert Koch) 在維多利亞時代（就在我們真正了解 DNA 和病毒是什麼之前）表示，要證明微生物會導致疾病，您需要將它從患有疾病的生物中分離出來，而不是在沒有微生物的生物中發現它。疾病。如果你把它從一個有它的生物身上拿走，然後把它給一個沒有的生物，它應該會導致疾病，然後你應該能夠分離出它體內的這種微生物。因此，如果科學家沒有對特定病毒進行過這種研究，那麼考夫曼這樣的人就可以聲稱我們只是不知道。
問題是科赫自己意識到要求他的假設每次都得到滿足是錯誤的。他注意到那些沒有症狀的傷寒和霍亂攜帶者。他們有傳染源但沒有疾病。是否證明這些微生物最終沒有引起疾病？不。科赫的假設在歷史上很有趣，但它們基本上已被基於檢測微生物本身的 DNA 或 RNA 的指導方針所取代。
對於那些想要深入研究“考夫曼認為冠狀病毒的遺傳密碼從何而來”的人，請單擊此處
從MD到ND
在我看來，安德魯考夫曼博士現在是一名自然療法醫生。他對一次自然健康諮詢收費 750 美元（高級套餐收費 1,750 美元）。他曾表示， “如果你的骨頭從你的皮膚中伸出來”，醫學技術的進步只會優於自然方法；合成藥物是錯誤的；他聲稱，我們應該簡單地依賴天然分子，其安全性是眾所周知的。和自然療法者一樣，考夫曼到處都能看到毒素。他認為我們從衣服、洗髮水和食物供應中獲得它們。他認為，尿路感染可能是由直腸中“轉移”的毒素引起的到泌尿系統。所以很自然地，他向許多帶著問題來信的人推薦“清洗”。這些神秘的毒素和我們淨化自己的儀式讓我想起了過去的惡魔和驅魔，如果你認為這是一個延伸，過去在刑事司法系統工作過的精神病學家考夫曼認為“惡魔附身實際上可能是某些精神疾病的一個因素”，例如精神分裂症。他的直播流中的許多評論都表現出強烈的宗教熱情——“是的，惡魔是真實的”和“只要與基督同行，即使他們殺了你，你也會得救 [原文如此]！”——如此之多以至於你會認為你正在觀看世界上最鎮定的傳教士。
但考夫曼並不滿足於擁抱自然療法並否認細菌的存在：他不得不暗示這種流行病只是沒有累積起來。他將封鎖稱為“軟禁”和“戒嚴令”的一種形式，剝奪了人們的集會權和宗教信仰權。他曾聲稱疫苗是“裝滿毒藥的注射器”，同時口罩的孔隙太大而無法阻擋“病毒”（無論對他來說這意味著什麼）但又小到足以顯著減少氧氣供應，這在科學上是不成立的感覺。他反問“誰戴口罩？”，但沒有用“醫生、牙醫、護士”來回答。“隱藏東西的人，”他說，“不誠實的人，偷竊的人。” 他最近因拒絕戴口罩而失去了剩餘的兼職醫生工作，此後一直帶領一群未戴口罩的人進入當地企業表明立場。
他擔心這場“人為製造的危機”有一個目標，那就是讓人們依賴政府的施捨，這是“自由”反動派的共同陰謀論信念。為了給這個殉難蛋糕錦上添花，他將比爾·蓋茨與優生學運動聯繫在一起，並在倫敦真實頻道上亮相，這是一個賺取數百萬美元的宣傳自助和陰謀論的視頻頻道，這要歸功於相信爬行動物外星人的前嘉賓大衛艾克-人類混血兒秘密地統治著世界。考夫曼他穿西裝打領帶覺得這次採訪真是太好了。
COVID 否認主義、對排毒療法的信仰、自由主義者呼籲保護個人自由，所有這些比喻都被安德魯·考夫曼博士等不科學的人拼湊成一個弗蘭肯斯坦的怪物。它可能在哪裡結束？考夫曼聽起來平靜、鎮定且不祥，他承諾“如果我們到了 [士兵將你壓倒為你接種疫苗的地步]，我保證我會給出一個‘食譜’，可以減輕被關押的人的痛苦強行擊倒並接種疫苗。”
這個安迪·考夫曼可不是鬧著玩的。
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Office for Science and Society
Articles by Jonathan Jarry M.sc.
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#韓國CDC實驗室的新冠病毒分離
Identification of Coronavirus Isolated from a Patient in Korea with COVID-19
從韓國 COVID-19 患者身上分離出的冠狀病毒的鑑定
2020
02/13 接收
02/18 修訂
02/19 接受
採樣
從有症狀的患者身上採集鼻咽和口咽拭子以及痰液樣本，通過RT-PCR檢測SARS-CoV-2。
病毒分離
口咽樣本用含有鼻咽拭子和抗生素(制黴菌素、青黴素-鏈黴素1:1稀釋液)的病毒轉移培養基以1:4的比例稀釋，並在4°C下孵育1小時，然後接種到Vero細胞上。接種的Vero細胞在37°C、5%CO2下在補充有2%胎牛血清和青黴素-鏈黴素的1×Dulbecco改良伊格爾培養基(DMEM)中培養。通過細胞病變效應、基因檢測和電子顯微鏡證實了病毒複製和分離。
結果
鼻咽和口咽樣本接種Vero細胞後，每24小時觀察一次，接種後3天開始觀察細胞病變效應(圖1)。當超過80%的細胞表現出細胞病變效應時，在第4天收穫接種的細胞。使用從細胞培養基中提取的RNA進行實時RT-PCR確認病毒複製。
通過電子顯微鏡檢查接種後3天細胞的細胞質中的病毒結構(圖 2)。觀察到冠狀病毒特異性形態。病毒粒徑範圍為70-90nm，在廣泛的細胞內細胞器中觀察到病毒，尤其是在囊泡中。
基因定序分析表明，該序列與先前報導的SARS-CoV-2序列包含在同一簇中，並且與其他分離的SARS-CoV-2序列顯示出>99.5% 的高同源性。該病毒被命名為BetaCoV/Korea/KCDC03/2020。
論文連結
#論文有提及實驗對照組
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從韓國 COVID-19 患者身上分離出的冠狀病毒的鑑定
2020
02/13 接收
02/18 修訂
02/19 接受
採樣
從有症狀的患者身上採集鼻咽和口咽拭子以及痰液樣本，通過RT-PCR檢測SARS-CoV-2。
病毒分離
口咽樣本用含有鼻咽拭子和抗生素(制黴菌素、青黴素-鏈黴素1:1稀釋液)的病毒轉移培養基以1:4的比例稀釋，並在4°C下孵育1小時，然後接種到Vero細胞上。接種的Vero細胞在37°C、5%CO2下在補充有2%胎牛血清和青黴素-鏈黴素的1×Dulbecco改良伊格爾培養基(DMEM)中培養。通過細胞病變效應、基因檢測和電子顯微鏡證實了病毒複製和分離。
結果
鼻咽和口咽樣本接種Vero細胞後，每24小時觀察一次，接種後3天開始觀察細胞病變效應(圖1)。當超過80%的細胞表現出細胞病變效應時，在第4天收穫接種的細胞。使用從細胞培養基中提取的RNA進行實時RT-PCR確認病毒複製。
通過電子顯微鏡檢查接種後3天細胞的細胞質中的病毒結構(圖 2)。觀察到冠狀病毒特異性形態。病毒粒徑範圍為70-90nm，在廣泛的細胞內細胞器中觀察到病毒，尤其是在囊泡中。
基因定序分析表明，該序列與先前報導的SARS-CoV-2序列包含在同一簇中，並且與其他分離的SARS-CoV-2序列顯示出>99.5% 的高同源性。該病毒被命名為BetaCoV/Korea/KCDC03/2020。
論文連結
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