#傳說中Indigo_Skyfold行動的裝置
一堆管子長在飛機上很嚇人，到底是用來噴什麼東西？
謎底揭曉，那是一架改造過的灣流飛機Gulfstream-159 (G1)，執行大氣輻射管理 (Atmosphere Radiation Measurement) 研究，目前已經退役。自1988年以來由巴特爾紀念研究所 (Battelle Memorial Institute) 所有，並由太平洋西北國家實驗室 (Pacific Northwest National Laboratory) 代替美國能源部 (U.S. Department of Energy) 運營，作為DOE和其他用戶的機載空中大氣研究實驗室。照片中機身上的那些管子是收集大氣數據用的設備。
佐證網頁連結
佐證影片連結
#只是收集大氣數據用的一堆管子
#Chemtrail 回目錄
一堆管子長在飛機上很嚇人，到底是用來噴什麼東西？
謎底揭曉，那是一架改造過的灣流飛機Gulfstream-159 (G1)，執行大氣輻射管理 (Atmosphere Radiation Measurement) 研究，目前已經退役。自1988年以來由巴特爾紀念研究所 (Battelle Memorial Institute) 所有，並由太平洋西北國家實驗室 (Pacific Northwest National Laboratory) 代替美國能源部 (U.S. Department of Energy) 運營，作為DOE和其他用戶的機載空中大氣研究實驗室。照片中機身上的那些管子是收集大氣數據用的設備。
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#詭異的密集往復式航跡
「又在噴了!」
大部份的人看到flightradar網站出現某些未顯示航空公司的航班，以極其詭異的方式，在某市或某地區上空進行密集往復式的飛行。 直覺上就會認為「又是DS在灑毒了」。真的是這樣子嗎？
其實，在空中密集往復式飛行，主要是在執行對地貌作遙測照相的任務。在日本，對照flightradar上面川崎橫濱上空的飛機型號與日本最大的測量飛機機隊Kyoritsu Air Survey公司網站上的飛機機型，完全符合。在台灣，對照flightradar上面高雄上空的飛機與林務局農林航空測量所發表新聞的飛機機型與農林所網頁上面公布的同月份航空攝影取像範圍，皆符合。
所以，這種密集往復式飛行軌跡，是測量飛機正在執行航拍任務的軌跡，不是在灑毒。
Kyoritsu Air Survey公司網站
林務局農林航空測量所FB貼文
農林所公布之2023年4月航拍範圍
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「又在噴了!」
大部份的人看到flightradar網站出現某些未顯示航空公司的航班，以極其詭異的方式，在某市或某地區上空進行密集往復式的飛行。 直覺上就會認為「又是DS在灑毒了」。真的是這樣子嗎？
其實，在空中密集往復式飛行，主要是在執行對地貌作遙測照相的任務。在日本，對照flightradar上面川崎橫濱上空的飛機型號與日本最大的測量飛機機隊Kyoritsu Air Survey公司網站上的飛機機型，完全符合。在台灣，對照flightradar上面高雄上空的飛機與林務局農林航空測量所發表新聞的飛機機型與農林所網頁上面公布的同月份航空攝影取像範圍，皆符合。
所以，這種密集往復式飛行軌跡，是測量飛機正在執行航拍任務的軌跡，不是在灑毒。
Kyoritsu Air Survey公司網站
林務局農林航空測量所FB貼文
農林所公布之2023年4月航拍範圍
#Chemtrail 回目錄
#中國CDC實驗室的新冠病毒分離
A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China, 2019
來自中國肺炎患者的新型冠狀病毒，2019
2020/1/24 線上發佈
2020/2/20 出版
採樣
2019/12/21後採集武漢不明原因肺炎患者4份下呼吸道樣本，包括支氣管肺泡灌洗液。並採集北京已知病因肺炎患者的7份支氣管肺泡灌洗液作為對照。從樣本(包括陰性對照)中提取核酸。通過PCR進行病毒和細菌檢測，分析22種病原體。基因測序發現無法識別的微生物序列，再使用RT-PCR來檢測病毒RNA。
病毒分離培養
樣本添加轉運培養基，然後離心去除細胞碎片。上清液接種於肺癌患者氣道上皮細胞，經NGS測試無特殊病原體。
使用人氣道上皮細胞和Vero E6和Huh-7細胞系分離病毒。人氣道上皮細胞在氣液界面中培養4至6週形成分化良好的極化培養物。
感染前，人氣道上皮細胞頂面用PBS(磷酸鹽緩衝液)清洗3次；將支氣管肺泡灌洗液樣品的150μl上清液接種到細胞培養物的頂端表面。
在37°C下孵育2小時後，用500μl的PBS洗滌10分鐘去除未結合的病毒；人氣道上皮細胞保持在37°C和5%二氧化碳的氣液界面中。
每48小時，將150μl的PBS加於細胞的頂端表面，並在37°C下孵育10分鐘後收集樣品。
頂端樣品在1:3稀釋的小瓶原液中傳代至新細胞。
每天用光學顯微鏡監測細胞的細胞病變效應，並用RT-PCR監測上清液中病毒核酸的存在。傳三代後，製備頂端樣品和人氣道上皮細胞用於透射電子顯微鏡。
結果
人氣道上皮細胞表層96小時後觀察到細胞病變效應(左上圖)。6 天後在Vero E6和Huh-7細胞系中未觀察到特異性細胞病變效應。
病毒直徑大約60~140nm不等，顆粒有非常明顯9~12nm的尖峰。在人氣道上皮超薄切片中發現細胞外游離病毒顆粒和細胞質膜結合囊泡中充滿病毒顆粒的包涵體(右上圖)。
結合Illumina測序和納米孔測序進行克隆和基因測序。從單個標本中獲得超過20,000個病毒讀數，並且大多數重疊群與β冠狀病毒屬B譜系的基因組相匹配，與蝙蝠SARS樣冠狀病毒基因組有85%以上的同一性。使用RT-PCR測定也獲得了陽性結果。
論文連結
#使用人氣道上皮細胞及VeroE6和Huh7細胞系培養病毒
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China, 2019
來自中國肺炎患者的新型冠狀病毒，2019
2020/1/24 線上發佈
2020/2/20 出版
採樣
2019/12/21後採集武漢不明原因肺炎患者4份下呼吸道樣本，包括支氣管肺泡灌洗液。並採集北京已知病因肺炎患者的7份支氣管肺泡灌洗液作為對照。從樣本(包括陰性對照)中提取核酸。通過PCR進行病毒和細菌檢測，分析22種病原體。基因測序發現無法識別的微生物序列，再使用RT-PCR來檢測病毒RNA。
病毒分離培養
樣本添加轉運培養基，然後離心去除細胞碎片。上清液接種於肺癌患者氣道上皮細胞，經NGS測試無特殊病原體。
使用人氣道上皮細胞和Vero E6和Huh-7細胞系分離病毒。人氣道上皮細胞在氣液界面中培養4至6週形成分化良好的極化培養物。
感染前，人氣道上皮細胞頂面用PBS(磷酸鹽緩衝液)清洗3次；將支氣管肺泡灌洗液樣品的150μl上清液接種到細胞培養物的頂端表面。
在37°C下孵育2小時後，用500μl的PBS洗滌10分鐘去除未結合的病毒；人氣道上皮細胞保持在37°C和5%二氧化碳的氣液界面中。
每48小時，將150μl的PBS加於細胞的頂端表面，並在37°C下孵育10分鐘後收集樣品。
頂端樣品在1:3稀釋的小瓶原液中傳代至新細胞。
每天用光學顯微鏡監測細胞的細胞病變效應，並用RT-PCR監測上清液中病毒核酸的存在。傳三代後，製備頂端樣品和人氣道上皮細胞用於透射電子顯微鏡。
結果
人氣道上皮細胞表層96小時後觀察到細胞病變效應(左上圖)。6 天後在Vero E6和Huh-7細胞系中未觀察到特異性細胞病變效應。
病毒直徑大約60~140nm不等，顆粒有非常明顯9~12nm的尖峰。在人氣道上皮超薄切片中發現細胞外游離病毒顆粒和細胞質膜結合囊泡中充滿病毒顆粒的包涵體(右上圖)。
結合Illumina測序和納米孔測序進行克隆和基因測序。從單個標本中獲得超過20,000個病毒讀數，並且大多數重疊群與β冠狀病毒屬B譜系的基因組相匹配，與蝙蝠SARS樣冠狀病毒基因組有85%以上的同一性。使用RT-PCR測定也獲得了陽性結果。
論文連結
#使用人氣道上皮細胞及VeroE6和Huh7細胞系培養病毒
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
#香港大學的新冠病毒分離
Comparative tropism, replication kinetics, and cell damage profiling of SARS-CoV-2 and SARS-CoV with implications for clinical manifestations, transmissibility, and laboratory studies of COVID-19: an observational study
SARS-CoV-2和SARS-CoV的比較趨向性、複製動力學和細胞損傷譜對新冠臨床表現、傳播性和實驗室研究的影響：一項觀察性研究
2020
4/21 線上發佈
5月 出版
方法
研究SARS-CoV-2的細胞易感性、物種嗜性、複製動力學和細胞損傷，與SARS-CoV比較。
樣本病毒分離
將一名新冠患者的鼻咽抽吸標本接種到VeroE6細胞。每天光學顯微鏡監測，並收集細胞上清液用RT-PCR評估病毒載量。72小時後觀察到大量細胞病變。RT-PCR證實了複製陽性。再用奈米孔輔以Sanger法進行全基因組測序。分離出SARS-CoV-2病毒株。SARS-CoV病毒株來自香港大學微生物學系。兩種病毒都在VeroE6細胞中繁殖並通過噬菌斑測定確定滴度，於實驗前傳代3次。
多種細胞系之病毒培養
接種25個不同組織和物種的細胞系與兩種病毒在37°C下以0.1的感染複數(MOI)處理2小時。根據細胞類型維持在EMEM、DMEM或DMEM/F12培養基中。經過常規支原體檢測確保無支原體。
結果
測試9種人類細胞系中，5個易受SARS-CoV-2感染。在Calu3(肺)和Caco2(腸)細胞中最強，支持腹瀉與肺的常見臨床症狀。其次是Huh7(肝)和293T(腎)細胞。U251(神經元)細胞僅檢測到適度複製。SARS-CoV具有相似的細胞嗜性(圖1)。
測試16種非人細胞系中，6個易受SARS-CoV-2感染，包括來自非人靈長類動物(VeroE6、FRhK4和LLCMK2)、貓(CRFK)、兔(RK-13) 和豬(PK-15)。在非人靈長類動物和豬細胞中複製最強(圖2)。SARS-CoV-2引起的細胞損傷比 SARS-CoV少，SARS-CoV-2僅誘導大量VeroE6和FRhK4細胞損傷(圖3-4)。
論文連結
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
Comparative tropism, replication kinetics, and cell damage profiling of SARS-CoV-2 and SARS-CoV with implications for clinical manifestations, transmissibility, and laboratory studies of COVID-19: an observational study
SARS-CoV-2和SARS-CoV的比較趨向性、複製動力學和細胞損傷譜對新冠臨床表現、傳播性和實驗室研究的影響：一項觀察性研究
2020
4/21 線上發佈
5月 出版
方法
研究SARS-CoV-2的細胞易感性、物種嗜性、複製動力學和細胞損傷，與SARS-CoV比較。
樣本病毒分離
將一名新冠患者的鼻咽抽吸標本接種到VeroE6細胞。每天光學顯微鏡監測，並收集細胞上清液用RT-PCR評估病毒載量。72小時後觀察到大量細胞病變。RT-PCR證實了複製陽性。再用奈米孔輔以Sanger法進行全基因組測序。分離出SARS-CoV-2病毒株。SARS-CoV病毒株來自香港大學微生物學系。兩種病毒都在VeroE6細胞中繁殖並通過噬菌斑測定確定滴度，於實驗前傳代3次。
多種細胞系之病毒培養
接種25個不同組織和物種的細胞系與兩種病毒在37°C下以0.1的感染複數(MOI)處理2小時。根據細胞類型維持在EMEM、DMEM或DMEM/F12培養基中。經過常規支原體檢測確保無支原體。
結果
測試9種人類細胞系中，5個易受SARS-CoV-2感染。在Calu3(肺)和Caco2(腸)細胞中最強，支持腹瀉與肺的常見臨床症狀。其次是Huh7(肝)和293T(腎)細胞。U251(神經元)細胞僅檢測到適度複製。SARS-CoV具有相似的細胞嗜性(圖1)。
測試16種非人細胞系中，6個易受SARS-CoV-2感染，包括來自非人靈長類動物(VeroE6、FRhK4和LLCMK2)、貓(CRFK)、兔(RK-13) 和豬(PK-15)。在非人靈長類動物和豬細胞中複製最強(圖2)。SARS-CoV-2引起的細胞損傷比 SARS-CoV少，SARS-CoV-2僅誘導大量VeroE6和FRhK4細胞損傷(圖3-4)。
論文連結
#論文有提及實驗對照組
#病毒 回目錄
#法國Aix_Marseille大學的新冠病毒分離
Culture of SARS-CoV-2 in a panel of laboratory cell lines, permissivity, and differences in growth profile
SARS-CoV-2 在一組實驗室細胞系中的培養、容許度和生長曲線的差異
2020
06/02 投稿
11/20 接受。
2021/1/2 線上發佈
樣本例行繁殖
SARS CoV-2的IHUMI2、IHUMI3、IHUMI669和IHUMI2123病毒株是從人鼻咽拭子中分離，用於所有測試。4代病毒株在VERO E6中生長，在含有4%胎牛血清和 1%L-谷氨酰胺，37 °C、5%CO2下不含抗生素。
多種細胞系的病毒培養
將要測試的34種細胞系置入對應的培養基，不含抗生素並孵育達到亞匯合。過濾0.2 μ後，用10 -1和10 -4稀釋的VERO E6上清液感染 病毒株於這些細胞系上。每天用數位倒置熒光顯微鏡觀察，持續 7 天。在感染後第0天和第7天，收集上清液用於後續定量作RT-PCR測試。每個條件1式3份。對於觀察到CPE效應的細胞，將細胞與10倍稀釋的不同病毒一起孵育，並在37°C下孵育7天。每個條件1式4份。中值組織培養感染劑量(TCID 50 )由Reed和Muench法確定。
結果
在這34個細胞系中，有7個支持SARS-CoV-2增殖(上圖)。除了分離和繁殖病毒的VERO E6外，還有4個非洲綠猴腎細胞系支持病毒的複制(VERO 81、VERO SLAM、MA104和BGM)都產生了明顯的細胞病變效應CPE。
一種來自人類結直腸腺癌(Caco-2)的上皮細胞系支持病毒複製。與對照組相比，Caco-2僅顯示離散，但沒有顯示真正的CPE。
LLC-MK2是一種恒河猴腎上皮細胞系，也未產生明顯的CPE。
討論
VERO E6細胞系(一種高度病毒允許的干擾素缺陷細胞系)可以開發快速分離病毒的方法。
SARS-CoV和SARS-CoV-2可以感染Caco-2細胞系。對於SARS-CoV感染，48小時後出現CPE，而對於SARS-CoV-2感染沒有明顯的細胞損傷。SARS-CoV-2感染Caco-2細胞的這種能力可以解釋為什麼感染該病毒的患者通常會出現胃腸道症狀。先前研究數據與我們觀察到的結果一致。
論文連結
#病毒 回目錄
Culture of SARS-CoV-2 in a panel of laboratory cell lines, permissivity, and differences in growth profile
SARS-CoV-2 在一組實驗室細胞系中的培養、容許度和生長曲線的差異
2020
06/02 投稿
11/20 接受。
2021/1/2 線上發佈
樣本例行繁殖
SARS CoV-2的IHUMI2、IHUMI3、IHUMI669和IHUMI2123病毒株是從人鼻咽拭子中分離，用於所有測試。4代病毒株在VERO E6中生長，在含有4%胎牛血清和 1%L-谷氨酰胺，37 °C、5%CO2下不含抗生素。
多種細胞系的病毒培養
將要測試的34種細胞系置入對應的培養基，不含抗生素並孵育達到亞匯合。過濾0.2 μ後，用10 -1和10 -4稀釋的VERO E6上清液感染 病毒株於這些細胞系上。每天用數位倒置熒光顯微鏡觀察，持續 7 天。在感染後第0天和第7天，收集上清液用於後續定量作RT-PCR測試。每個條件1式3份。對於觀察到CPE效應的細胞，將細胞與10倍稀釋的不同病毒一起孵育，並在37°C下孵育7天。每個條件1式4份。中值組織培養感染劑量(TCID 50 )由Reed和Muench法確定。
結果
在這34個細胞系中，有7個支持SARS-CoV-2增殖(上圖)。除了分離和繁殖病毒的VERO E6外，還有4個非洲綠猴腎細胞系支持病毒的複制(VERO 81、VERO SLAM、MA104和BGM)都產生了明顯的細胞病變效應CPE。
一種來自人類結直腸腺癌(Caco-2)的上皮細胞系支持病毒複製。與對照組相比，Caco-2僅顯示離散，但沒有顯示真正的CPE。
LLC-MK2是一種恒河猴腎上皮細胞系，也未產生明顯的CPE。
討論
VERO E6細胞系(一種高度病毒允許的干擾素缺陷細胞系)可以開發快速分離病毒的方法。
SARS-CoV和SARS-CoV-2可以感染Caco-2細胞系。對於SARS-CoV感染，48小時後出現CPE，而對於SARS-CoV-2感染沒有明顯的細胞損傷。SARS-CoV-2感染Caco-2細胞的這種能力可以解釋為什麼感染該病毒的患者通常會出現胃腸道症狀。先前研究數據與我們觀察到的結果一致。
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#澳洲莫爾本大學的新冠病毒分離
Isolation and rapid sharing of the 2019 novel coronavirus (SARS‐CoV‐2) from the first patient diagnosed with COVID‐19 in Australia
從澳洲首例確診為COVID -19 的患者身上分離并快速共享 2019 年新型冠狀病毒(SARS -CoV-2)
2020
02/25 投稿
03/05 接受
04/01 線上發佈
6月 出版
採樣
一名來自中國武漢的58歲男子於 2020/1/19抵達墨爾本，並於1/24因發燒、咳嗽、和進行性呼吸困難住進墨爾本Monash醫療中心。對來自初始鼻咽拭子的材料進行RT-PCR檢測，並分別對痰液、尿液、糞便和血清樣本進行了檢測。確認了SARS-CoV-2的存在。
病毒分離
來自初始鼻咽拭子的材料用於接種Vero/hSLAM細胞系。監測燒瓶中病毒細胞病變效應的發展，每48小時取出140μL等分試樣，以通過實時RT-PCR評估病毒負荷。
病毒純化
對於電子顯微鏡，在4μg/mL胰蛋白酶存在下生長的細胞培養物的4mL上清液用0.5%戊二醛滅活12小時，並通過以1000 g離心3分鐘澄清。上清液用3%磷鎢酸(pH 7.0)進行負染色，並用FEI Tecnai T12電子顯微鏡在80kV下進行檢查。將剩餘的顆粒整體染色並包埋在樹脂中；使用FEI Tecnai F30電子顯微鏡在200kV下檢查70nm切片。
基因定序
從澄清的細胞培養上清液中提取RNA，並通過序列非依賴性單引物擴增(SISPA)隨機擴增cDNA。測序是結合Oxford Nanopore Technologies和Illumina短讀長測序進行的。分離病毒株的基因組序列與其他公開可用的SARS-CoV-2基因組表現出大於99.99%的序列同一性。
結果
接種VERO/hSLAM細胞系2天后，觀察到輕微的細胞病變效應，與未感染的對照細胞系相比，在第6天明顯不同(左圖)。細胞系上清液的RT-PCR測試證實了高病毒載量，表明了病毒感染。電子顯微照片(右圖)顯示直徑為90-110nm的球形和多形性病毒樣顆粒；顆粒顯示出突出的尖峰(9-12nm)，這是冠狀病毒科病毒的特徵。是第一批在中國境外分離的病毒株。
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#論文有提及實驗對照組
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Isolation and rapid sharing of the 2019 novel coronavirus (SARS‐CoV‐2) from the first patient diagnosed with COVID‐19 in Australia
從澳洲首例確診為COVID -19 的患者身上分離并快速共享 2019 年新型冠狀病毒(SARS -CoV-2)
2020
02/25 投稿
03/05 接受
04/01 線上發佈
6月 出版
採樣
一名來自中國武漢的58歲男子於 2020/1/19抵達墨爾本，並於1/24因發燒、咳嗽、和進行性呼吸困難住進墨爾本Monash醫療中心。對來自初始鼻咽拭子的材料進行RT-PCR檢測，並分別對痰液、尿液、糞便和血清樣本進行了檢測。確認了SARS-CoV-2的存在。
病毒分離
來自初始鼻咽拭子的材料用於接種Vero/hSLAM細胞系。監測燒瓶中病毒細胞病變效應的發展，每48小時取出140μL等分試樣，以通過實時RT-PCR評估病毒負荷。
病毒純化
對於電子顯微鏡，在4μg/mL胰蛋白酶存在下生長的細胞培養物的4mL上清液用0.5%戊二醛滅活12小時，並通過以1000 g離心3分鐘澄清。上清液用3%磷鎢酸(pH 7.0)進行負染色，並用FEI Tecnai T12電子顯微鏡在80kV下進行檢查。將剩餘的顆粒整體染色並包埋在樹脂中；使用FEI Tecnai F30電子顯微鏡在200kV下檢查70nm切片。
基因定序
從澄清的細胞培養上清液中提取RNA，並通過序列非依賴性單引物擴增(SISPA)隨機擴增cDNA。測序是結合Oxford Nanopore Technologies和Illumina短讀長測序進行的。分離病毒株的基因組序列與其他公開可用的SARS-CoV-2基因組表現出大於99.99%的序列同一性。
結果
接種VERO/hSLAM細胞系2天后，觀察到輕微的細胞病變效應，與未感染的對照細胞系相比，在第6天明顯不同(左圖)。細胞系上清液的RT-PCR測試證實了高病毒載量，表明了病毒感染。電子顯微照片(右圖)顯示直徑為90-110nm的球形和多形性病毒樣顆粒；顆粒顯示出突出的尖峰(9-12nm)，這是冠狀病毒科病毒的特徵。是第一批在中國境外分離的病毒株。
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#論文有提及實驗對照組
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