تتميز بكتيريا s.aureus انها
catalase and coagulase positive


✅📸للانضمام لنا:👇
🔻✨🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

مقارنة بين
s.aureus
s.epidermidis
s.saprophyticus


✅📸للانضمام لنا:👇
🔻✨🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

S.aureus مستعمرات من بكتيريا
على الــ PDMS
@MicroLabMed ☜

‏گلُ شيء هبْآآء إلُآآ ڈگر آللَّة بْقآآء💭💕

َّسبِحٌآن أّلَلَهِ💛
أّلَحٌمد لَلَهِ💙
لَأّ إلَه إلَأ ّآللهِ❤
أّلَلَه أكبِر💜

بسم الله الرحمن الرحيم
موضوع اليوم عن

الصبغات الميكروبيه

الصبغه⬅️ هي عباره عن مواد عضويه تحتوى على عامل ملون وعامل مؤين تستخدم لتحديد انواع البكتيريا واشكالها وتصبغ البكتيريا بعد عمليه الثبيت على شريحه زجاجيه فيتلون الكان الحي الدقيق في الشريحه.

"اكثر انواع الصبغات انتسارا في مجال الدراسات "

١- الصبغات البسيطه:-
تتكون من صبغه واحده تصبغ بها البكتيريا مثال
⬅️( ازرق المثلين)٠

٢- الصبغات التفريقه:-
تتكون م̷ـــِْن عدة صبغات وتستخدم للتميز بين انواع مختلفه م̷ـــِْن البكتيريا من اشهر هذه الصبغات
(Gram stain )
التي تفرق بين البكتيريا السالبة والموجبة لصبغة جرام.


★Gram stain★

👈👈صبغه جرام

مافائدة هذه الصبغة ¿
تسخدم هذه الصبغه م̷ـــِْن اجل
١-للتفريق بين
⬅️ البكتيريا السالبه لصبغة جرام التي تاخذ اللون 🔴 لون الصبغة البديله

⬅️عن البكتيريا المؤجبه لصبغة جرام الذي تاخذ اللون 🔵 لون الصبغة الاساسية .
٢-تساعدنا في دراسة اشكال البكتيريا ( كرويه ،عصويه ) وكذلك في تحديد الترتيب الخاص بالبكتيريا (ثنائي ،مسبحي ،عنقودي )
٣- تساعد كذلك في صبغ الفطريات والخلايا القيحيه.

👈👈كيف تصبغ البكتيريا
تاخد البكتيريا الموجبة لصبغة جرام اللون البنفسجي الخاص بصبغة الكرستال فيلت.

👈👈وتاخذ البكتيريا السالبه اللون الاحمر الخاص بصبغة السفرانين.

👈👈مبدا عمل الصبغه:-
يعتمد على التفاعل بين جدار البكتيريا والصبغات المكونه لصبغة جرام وكذلك يعود الاختلاف لوجود اختلاف في نفاذيه جدار الخلية بين G+ve and G-ve خلال عملية الصبغ.
@MicroLabMed
⬅️في البكتيريا الموجبة لصبغة جرام جدار البكتيريا مكون من عدةطبقات م̷ـــِْن من الببتدوجليكان تدخل اليها الصبغات ويتكون مركب معقد من اليود والكرستال فيلت هذا المركب المعقد غير قابل للازاله بواسطة مزيل اللون لذلك تحتفظ البكتيريا باللون البنفسجي الخاص بالكرستال فيلت وتظهر باللون البنفسجي

⬅️اما البكتيريا السالبة لصبغة جرام فان جدارها يتكون فقط من طبقه واحده من الببتيدواجليكان بالاضافه الى الدهون ولذلك فان صبغة الخاصه الكرستال فيليت تزال بواسطة مزيل اللون وتصبح الخليه البكتيريه خاليه من الصبغة ولذلك تقبل الصبعة البديله السفرانين وتصبغ باللون الاحمر.

قنــاة الميكروبيلوجي🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

صوره تفرق بين جدار البكتيريا الموجبة والسالبة لصبغة جرام

★تحضير اللطخة البكتيرية للصبع★

1- استخدام شريحة زجاجيه نظيفة وجافة.
٢-تمسك الشريحه من أحدى طرفيها وترسم دائره قطرها ١.٥ سم على الوجه الاسفل من الشريحه.
@LabMed2016
٣-توضع قطره من الماء على وجه الشريحه المرسوم عليها الدائره بداخلها لغرض عمل لطخة بكتيرية.
٤-تعقم عقدة الحلقه
(الوير لوب ) على لهب موقد بنزن حتى درجه الاحمرار وتبرد لمده ١٠ ثواني.
٥-تؤخذ كمية صغيرة من البكتيريا مجرد لمس للمستعمره البكتيرية بواسطة
wire loop
٦- تخلط البكتيريا مع الماء داخل الدائره على سطح الشريحه.
٧-تترك لتجف قريب من اللهب.
٨-بعد ان تجف اللطخة البكتيرية تثبت باستخدام اللهب او باستخدام ميثانول مركز.
٩- عند الثبيت باللهب تمرر الشريحه بسرعه ثلاث مرات فوق اللهب واذا استخدمة الميثانول يترك لمده دقيقتين.
@LabMed2016

👈👈هناك طريقتين لتثبيت اللطخات البكتيرية

١-باستخدام الميثانول المركز.
٢- بتمرير اللطخه البكتريه الجافه على لهب.

👈👈لماذا يستخدم الكحول في تثبت اللطخات البكتيرية المحتمل احتوئها على بكتيريا النسيريا بنوعيها(gonococci or meningococci)

★وذلك لان بكتيريا النسيريا تشخص ( Intracellular )داخل الخلايا القيحيه لذلك تثبت اللطخة البكتيرية بتغطيه الشريحه بالميثانول لمده دقيقتين للمحافظه على الخلايا القيحيه من التحطم عند تعرضها للثبيت باللهب.

★ايضا بالنسبه لبكتيريا T.B ايضا نثبت الشريحه بواسطه الميثانول لمنع تطاير العصيات الذي يمكن ان تستنشق وتسبب العدوى (لان الهب يعمل تطاير droplet ) تؤدي الى انتقال العدوى.

★بعد الثبيت اصبحت اللطخة البكتيرية جاهزة للصبغ★

قنــاة الميكروبيلوجي🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

★طريقة الصبغ باصبغة جرام★
قبل الصبغ يجب عليك
🔍التاكد من كل الصبغات انها تعمل قبل الصبغ وذلك من اجل الحصول على نتائج دقيقه .

👈بعد التاكد من ان الصبغة فعاله نبدا عملية الصبغ .

نرتب الصبغات بحسب تسلسل الصبغ:-
١-كرستال فيليت crystal violet
٢-ليوجلس ايودينLugol,s Iodine.
٣- اسيتون الكحول
Acetone alcohol.
٤-سفرانين safranine .

بعد ترتيب الصغبة نبدا عمليه الصبغ
🔻🔻🔻🔻🔻🔻🔻🔻🔻🔻🔻

١- نضع الشريحة على الحامل الخاص بالصبغ وتغطى اللطخه بالصبغة الاولى الكرستال فيلت (الاساسيه ) وتترك لمده من نصف دقيقة دقيقة واحده.
٢- تغسل اللطخه بالماء وتغطى بالصبغة الثانيه ليوجل ايودين.
والتي تعتبر الصبغه( المثبته )وتترك لمدة من نصف دقيقة الى دقيقة.
٣- تغسل الشريحه بالماء وتغطى با استون الكحول وهو (مزيل اللون) لمده ١٠ ثواني.
٤- تغسل الشريحه بسرعه بعد انتهاء الوقت وتضاف الصبغة الاخيره السفرانين
(الصبغة البديلة ) وتترك لمده دقيقتين.
٥- تغسل الشريحه بالماء وتترك لتجف.
٦- بعد ان تجف نضع قطره من الزيت وتدرس تحت العدسه
١٠٠ x

★ما الذي تتوقع رويته تحت المجهر★

🔍البكتيريا الموجبة لصبغة جرام 👈تظهر باللون البنفسجي الغامق.

🔍البكتيريا السالبة لصبغة جرام 👈تظهر باللون الاحمر.

🔍الخمائر👈 تظهر باللون البنفسجي الغامق.

🔍الخلايا الطلائية 👈تظهر باللون احمر فاتح.

🔍انوية الخلايا القيحية 👈تظهر باللون الاحمر.

قنــاة الميكروبيلوجي🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

صبغ البكتيريا بصبغة جرام

Gram positive cocci. فوق خليه طلائيه لونها وردي فاتح
والبكتيريا لونها بنفسجي

Gram positive cocci
موجوده مع انويه خلايا قيحيه لونها
ا حمرغامق

Gram negative bacilli

Gram positive bacilli

★كتابه التقرير★

يتظمن التقرير :-
١-عدد البكتيريا الموجوده
(many moderate few or scanty )
٢-تفاعل البكتيريا مع الصبغه
(G+ve or G-ve)

@MicroLabMed
٣-شكل وترتيب البكتيريا
(cocci, diplocci ,streptococci, rod ,coccobacilli)
وكذالك في ما اذا كانت البكتيريا داخل الخلايا (intracellular )
٤-وجود الخلايا القيحيه وعددها
٥- وجود الخمائر والخلايا الطلائيه.

قنــاة الميكروبيلوجي🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

الاخطاء المرافقه لعملية الصبغ

⚙⚙ما هي الاخطاء التي تجعل البكتيريا الموجبة لصبغة جرام تصبغ باللون الاحمر ا❓❓❓❓❓❓❓❓❓❓❓الخاص بالبكتيريا السالبة لصبغة جرام :-
١-حدوث تحطم لجدار البكتيريا الموجبة لصبغة جرام بسبب التعرض للحراره لفتره طويله خلال عمليه الثبيت.
٢- ترك مزيل اللون acetone alcohol على الشريحه لفترة طويلة وعدم اللتزام بفترة الصبغ المحدده وهي ثواني قليله.
٣- استخدام lugol,s Iodine قديم وحدث له تحول في لونه من اللون البني الى اللون الاصفر اذا تحول لونه الى الاصفر اصبح غير فعال من شروط الحفظ الجيد للصبغات تحفظ في حاويات معتمه او زجاجه بنيه اللون وبعيد عن الضؤ.
٤- ان تكون اللطخة البكتيرية المراد صبغها قد حضرت من وسط زراعي قديم له اكثر من٢٤ ساعه.

⚙⚙ماهي الاخطاء التي تؤدي الى صبغ البكتيريا السالبة لصبغة جرام باللون الازرق الخاص البكتيريا الموجبة لصبغة جرام ❓❓❓❓❓❓❓❓❓❓

@MicroLabMed

★اخذ كمية كبيرة من البكتيريا خلال تحضير اللطخه البكتيريه مما يؤدي العدم قدره مزيل اللون على النفاذ الي الطبقه السميكه من البكتيريا وبالتالى لا يحدث ازله كامله للون في حاله البكتيريا السالبة لصبغة جرام( لذلك يجب ان تكون كمية البكتيريا الماخوذه لعمل اللطخه البكتيريه مجرد لمس للمستعمره فقط).

قنــاة الميكروبيلوجي🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

https://m.youtube.com/watch?v=vlnIDGmgQfk

فيديو يوضح طريقة اعداد اللطخة البكتيريه وطريقة الصبغ

🔰Catalase test
🔴الهدف م̷ـــِْن catalase test
يفرق بين ⬅️Staphylococci
والتي تكون
catalase +ve
عن ⬅️streptococcus
والتي تكون. catalase -ve

🔴مبدأ العمل catalase :-
انزيم الكاتليز المفرز من البكتيريا يحطم ماده H 2O2
الى ماء و اوكسجين والذي يظهر بشكل فقاعات.
Colonies
( catalase)➕H2O2 ➡️
H2O ➕O2 ( bubbles)
🔴الطريقه:-
ملاحظه يجرى هذا الفحص بعد دراسة المستعمرات باستخدام صبغة جرام وكان ناتج الصبغ
G+ve cocci
بعد ذلك نجري هذا الفحص بالخطوات التاليه :-

١- ننقل مستعمرات بكتيريه عمرها ٢٤ ساعه باستخدام Wire loop مصنوع من البلاتين او اداه خشبية الى سطح شريحه زجاجيه.
٢- ضع قطرات من الهيدروجين بروكسيد على المستعمرات البكتيرية ونخلط

🔴النتيجه المتوقعه:-

⬅️تكون فقاعات يعني +ve البكتيريا هي مجموعه Staphylococci.

⬅️عدم تكون فقاعات -ve
البكتيريا هي من مجموعه Streptococci
@MicroLabMed

ضبط الجوده في هذا الفحص:-
🚫متى يحدث false positive result
تحدث النتائج الاجابيه الخاطئه نتيجة:-
١- استخدام Wire loop يحتوي على الصدأ المفترض ان يكون مصنوع من البلاتين.
٢- استخدام مستعمرات عمرها اكثر من ٢٤ ساعه
٣- استخدام مستعمرات من داخل وسط Blood agar واخذ جزء من آجار الدم مع المستعمرات.
@MicroLabMed
💢ملاحظه مهمه💢
لاختبار صلاحية محلول الهيدروجين بيروكسيد ناخد جزء من اجار الدم ونضع عليه قطرات من المحلول H2O2 ولان الدم يحتوي على الانزيم الكاتليز سوف يتكون فقاعات وهذا دليل ان المحلول صالح للعمل في حالة لم يتكون فقاعات يعني ذلك ان المحلول منتهي الصلاحية.

قنــاة الميكروبيلوجي🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

ⓂICRO🅱IOLOGY:

🔰Coagulase test
🔴الهدف م̷ـــِْن coagulase test
يفرق بين ⬅️S.aureus والتي تكون
coagulase +ve
عن ⬅️other staphylcoccus والتي تكون coagulase -ve

⬅️هناك نوعين من هذا الانزيم
حر ومرتبط
Coagulase Boundمرتبط بالخلية البكتيريه ( clumping factor)
Coagulase free
النوع الحر يكون عباره عن انزيم بروتيني خارج الخلية يعمل clot .

🔴 مبدأ العمل :-
انزيم coagulase المفرز من البكتيريا يحول الفيبرونوجين الى فيبرين والذي يظهر بشكل clot.
Colonies (Coagulase) ➕poly plasma( fibrinogen) ➡️ fibrin clot.

🔴الطريقة:-
ملاحظه يجرى هذا الفحص بعد دراسة المستعمرات والتاكد انها G+ve catalase +ve
خطوات اجراء الفحص :-

١- نضع قطرة من البلازما على احد جوانب الشريحه test
وعلى الطرف الاخر نضع قطرة من محلول الملح⬅️ control -ve.
٢-ناخذ بواسطة Wire loop مستعمرة بكتيرية ونضعها على البلازما test وتخلط و مستعمرة اخرى ونضعها في محلول الملح control تخلط الى ان يتكون مستحلب بكتيري متجانس.

٣- خلط المستعمرات البكتيرية لمدة
5- 10 ثواني
@MicroLabMed

🔴النتيجه المتوقعه:-

⬅️تكوّن كتل يعني ve+ البكتيريا هي S.aureus.

⬅️عدم تكوّن كتل ve- البكتيريا هي
other staphylococci
(S.epdermidis or S.saprophyticus )

في حالة اذا كانت سالبة لا تُعتمد الا بعد التاكد بطريقة☜
Tube Method

نحضر مستحلب من البكتيريا مع 0.5 ml من البلازما في انبوبة زجاجية تحضّن في الحضّان عند ℃37 درجه لمدة 4 ساعات وتفحص كل ساعة للكشف عن تكون clot اذا لم يتكون clot بعد 4 ساعات تحضن الانبوبه 24 ساعة قبل اعطاء النتيجه ve-

🔴ضبط الجوده :-
عمل كنترول ve-
و كنترول ve+
ومن المفترض ان يكون عند الكنترول السالب لا يتكون اي تكتلات وعند الموجب يتكون تكتلات مشابه للتكتلات test.
@MicroLabMed


قنــاة الميكروبيلوجي🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/joinchat/AAAAAD-9_z56fB6h3kDmTA

شرح مبسّط لكيفية االاشتراك بمكتبة #الطـب_المخبري وتحميل الكتب ‏ ‏ منـِْهـ♡̨̐ـِْا
✅📚للدخول للمكتبة من هنا👇
🔻✨🔻✨🔻✨🔻✨🔻
https://telegram.me/Lab_Med_ALMAS_bot