🔰 تهیه گستره خونی و کاریوتایپ


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تهیه کروموزوم ها از سلول های انسان؛

🔴 در بررسی کروموزوم ها استفاده از #لنفوسیت های خون محیطی شایعتر است.
🔵 به غیر از لنفوسیت ها⬅از پوست، مغز استخوان، پرز های جفتی(سلول های مایع امنیون استفاده کرد


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰مراحل تهیه کروموزوم ها از خون:

1_ تهیه نمونه خونی و سپس افزودن #فیتوهماگلوتینین⬅ سبب تحریک تقسیم سلول های 🇹

2_ سلول ها سه روز در دمای 37 درجه کشت داده می شوند.

3_ #کلشیسین افزوده میشود⬅باعث عدم تشکیل دوک تقسیم و متوقف شدن تقسیم سلولی در #متافاز

💣 چون در متافاز،کروموزوم ها به #حداکثرفشردگی رسیده اند و بهتر قابل رویت اند.😊

4_ لیز سلول ها توسط نمک های هیپوتونیک و پخش کروموزوم ها روی اسلاید


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰نوار بندی(Banding) کروموزومی

🔸با کمک این تکنیک توانایی #شناسایی دقیق کروموزوم ها و #ناهنجاری های کوچک فراهم می شود.

🍒باندینگ مشخص کرد که کروموزوم ها به دو صورت:

☝️ هتروکروماتین ⬅ نوار های تیره و غنی از باز های A,T و از لحاظ رونویسی غیر فعال

✌️یوکروماتین ⬅ نوار های روشن و غنی از باز های C,G و از لحاظ رونویسی فعال میباشد


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تکنیک G_Banding:

1_ تیمار کروموزوم با #تریپسین
2_رنگ آمیزی DNA با گیمسا
💣نوار تیره =هتروکروماتین
نوار روشن = یوکروماتین

🔸نوار بندی G سبب ایجاد 400_500نوار در هر مجموعه هاپلوئید میشود و طول هر نوار 6تا 8 مگاباز یا 6000تا 8000(kb)


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰کاریوتایپ با نواربندی G

🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تکنیک Q_Banding

1- از رنگ فلورسنت #کوینیاکرین استفاده می شود،نیاز به 🔬فلورسنت دارد.

👈الگوی نوار بندی مشابه گیمسا


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تکنیک R_banding ( نواربندی معکوس):

1_ دناتوره کردن کروموزوم ها توسط حرارت
2_رنگ آمیزی گیمسا

🔸الگوی نواربندی عکس گیمسا
👈نوار تیره= یوکروماتین
👈نوار روشن = هتروکروماتین


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰 کاریوتایپ طیفی(Sky) یا Multiplex FISH(M-FISH)


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تکنیک C_banding(نوار بندی سانترومر):

1_تیمار کروموزوم با #اسیدوقلیا
2_ رنگ آمیزی با گیمسا

🔹 نواحی سانترومری حاوی تکرار زیاد رنگ آمیزی می شود.

❗️بیشترین میزان هتروکروماتین ژنی روی کروموزوم Y قرار دارد


🔰 تکنیک T- banding:
🔸برای رنگ آمیزی نواحی تلومری


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰 تفاوت نواربندی G. و نواربندی با تفکیک بالا


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تکنیک نواری بندی با تفکیک بالا


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تكنيك fish


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰 تکنیک SKY یا multiplex FISH
🔸 24 پروب برای 24 کروموزوم استفاده میشود.
👈کاربرد: جابه جایی، منشا کروموزوم اضافه ، ناهنجاری عددی


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰نوار بندی با حد تفکیک بالا High resolution banding :

❗️این تکنیک در مراحل ابتدایی میتوز مثل #پروفاز و پرومتافاز که کروموزم فشردگی کمتری دارد انجام می شود،و سبب ایجاد 800تا 1000 نوار و طول هر نوار 3تا 4 مگاباز میشود

👈این تکنیک ⬅ دقیق تر

@EmeryPlus
☢روش انجام High resolution banding :
1_ افزودن #متوتروکسات یا #تیمیدین ⬅⬅⬅ برای مهار تقسیم

2_ افزودن #اسیدفولیک یا #دئوکسی سیتیدین ⬅⬅⬅برای ورود سلول ها به میتوز
3 _ افزودن #کلشیسین در زمانی که بیشتر سلول ها در پروفاز هستند

🔴در نتیجه این تکنیک کروموزوم ها فشرده می شوند و نوار بندی با جزئیات بیشتر بدست می آید

🍁 در مراحل ابتدایی میتوز مثل پروفاز و یا پرومتافاز حساسیت بالایی دارد.


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰انواع پروب:

✅ پروب های سانترومری :

حاوی توالی های DNA تکراری سانترومر یا اطراف سانترومر کروموزومی می باشد
💣 #اولین پروب های بودند که برای تشخیص #انیوپلوییدی های کروموزومی مثل تریزومی ( 13_18_22) در تشخیص پیش از تولد بکار برده شوند
🔑 امروزه تکنیکQF_PCR برای تشخیص این تریزومی ها متداول تر است

✅ پروب های ویژه کروموزوم با توالی منحصر به فرد :

🔴برای تشخیص #حذف شدگی ها یا #مضاعف شدگی ها کوچک زیر حد تفکیک میکروسکوپ(مثل سندرم های ریز حذفی)
🔵برای شناسایی بیان بیش از حد ژن HER_2
در تومور های سینه برای بیمارانی که با #هرسپتین درمان میشوند.


@EmeryPlus
✅ پروب های تلومری:

🔴شناسایی ناهنجاری نزدیک تلومری پنهان یا cryptic

🔵مجموعه ای از پروب های تلومری را برای 24 کروموزوم می توان طراحی کرد (22 جفت کروموزوم اتوزومی و X,Y)و ناحیه مجاور تلومری تمام کروموزوم ها را میتوان در یک اسلاید بررسی کرد.

🔴 امروزه بجای پروب های تلومری از Q_PCR و MLPA استفاده میشود


✅ پروب های رنگ آمیزی کل کروموزوم:

شامل مخلوط از پروب ها که از بخش های مختلف یک کروموزوم خاص بدست آمده اند.
زمانی که از همه این پروب ها استفاده شود و هیبریداسیون صورت بگیرد کل کروموزوم از خودش رنگ فلورسنت ساطع میکند.

👈کاربرد:
1_ باز آرایی کروموزوم ها ظریف مانند حذف ها و جابجایی ها
2_ تعیین منشاء مواد کروموزومی اضافه مثل مارکر های متعدد کوچک و حلقه ها


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰تصویر متافازی از پروب ناحیه ویلیامزELN

👈از پروب های ویژه با توالی منحصر به فرد


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰 تکنیک CGH و CGH ARRAY


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

❗️❗️اصلاحیه...

🔆در آخر این ویس تفاوت دو تکنیک، یک مورد اشتباه بیان شده

درستش میشه⬅️ هر دو تکنیک ارایه و Cgh توانایی شناسایی بازآرایی های متعادل را ندارد.

🔰تکنیک CGH:

استفاده از کروموزوم متافازی
رنگ قرمز، از دست دادن(حذف)
رنگ سبز مضاعف شدن.


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰فلوكاريوتايپ=کاریوتایپ جریانی=فلوسایتومتری


🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus

🔰فلوسایتومتری یا Facs(دسته بندی سلول فعال شده با فلورسانس)

👈 در ابتدا برای جداسازی سلول ها استفاده میشده

🖌 گروه آموزشی امری پلاس
➕ @EmeryPlus